загрузка...
 
Сторонняя лаборатория
Повернутись до змісту

Сторонняя лаборатория

 

Из-за расстояний между клиникой и лабораторией результаты из коммерческих лабораторий часто можно получить только с некоторым опозданием. Это побуждает многие лаборатории, работающие на клиентов, содержать курьерские службы для забора проб и передавать результаты по факсу. Хорошим клиентам предоставляются телефаксные аппараты на выгодных условиях.

При небольшом или среднем количестве проб биохимические анализы крови выгоднее отсылать в специальные лаборатории. Однако важно, требуются ли результаты анализов немедленно, или без ущерба можно подождать прибытия результатов исследования. Неотложные исследования, такие как, например, определение амилазы или билирубина, часто могут быть выполнены лабораторией ближайшей общетерапевтической больницы или врачом с хорошо оборудованной лабораторией. Для проведения всех остальных исследований можно обратиться в автоматизированные большие коммерческие лаборатории, которые иногда предоставляют значительные скидки для ветеринарных врачей.

Поскольку методы больших лабораторий ориентированы на человеческую кровь, следует быть осторожным при интерпретации параметров, нормальные величины которых у человека и животных существенно отличаются, например, Т 3, Т 4, кортизол, амилаза, эритроциты (размеры клеток), морфология лейкоцитов.

Отправка анализов

Все пробы, которые отсылаются, должны доставляться в исследовательскую лабораторию как можно скорее и в свежем состоянии. Каждая проба должна быть надписана отдельно. Как правило, обычная пересылка почтой является достаточной. Многие коммерческие лаборатории содержат также постоянно действующую курьерскую службу.

Для исследования химического состава крови, как правило, лучше всего подходит сыворотка. В специальных случаях в пробы крови, сыворотки или плазмы добавляются определенные реагенты для повышения их сохранности.

Для бактериологических исследований соответствующими лабораториями, как правило, бесплатно предоставляются контейнеры для пересылки и транспортные средства.

Г истопатологические анализы

Кроме как для проведения специальных исследований, биопсийные и другие пробы консервируются в 10%- ном растворе формалина. Пробу для исследования надо сразу же после забора поместить в раствор формалина, а перед отправкой — в свежий раствор. Соотношение объема раствора формалина к пробе 10:1 обеспечивает хорошую сохранность.

При выборе сторонней лаборатории и перед забором проб надо прояснить следующие вопросы:

Имеется ли у этой лаборатории опыт анализа крови животных?

Имеет ли лаборатория нормальные показатели для собак?

Каковы затраты на проведение исследований?

Проводит ли эта лаборатория исследования в неотложном порядке?

Исследование крови

Кровь для гематологических и биохимических анализов, за исключением некоторых специальных исследований, берется из вены. Если требуются сыворотка или плазма, берется такое количество крови, которое в 3—5 раз превышает требуемое для исследования.

Получение сыворотки

Дать крови свернуться без добавления антикоагулянтов и без сотрясений;

осторожно собрать сгустки крови по краям пробирки стеклянной или пластмассовой палочкой;

бережно (сначала в медленном, затем в быстром режиме) подвергнуть центрифугированию;

сыворотку (собравшуюся наверху) отсосать пипеткой или осторожно слить.

Получение плазмы

Предотвратить сворачивание крови с помощью соответствующего антикоагулянта.

Центрифугировать (в течение примерно 5 мин при скорости 3000 об/мин). Для того, чтобы не добавлять антикоагулянты, кровь можно собирать в пробирку, покрытую слоем специального тормозящего свертывание вещества (этилендиаминтетрауксусная кислота, гепарин, фторид натрия). Пробирки следует по возможности заполнять до отметки во избежание появления осмотически обусловленных артефактов. Если

Предлагает ли она экспресс-сервис?

Транспортировка:

отправка почтой: экспресс? обычной почтой?

курьерская служба?

условия хранения?

точный адрес?

Что надо отправлять и какое количество одной пробы?

Как должна быть подготовлена в клинике эта проба к отправке?

Предоставляет ли лаборатория пакеты или контейнеры для пересылки?

Нужны ли специальные транспортные средства?

Какие методы исследования применяются?

Каким образом осуществляется передача результатов?

Требовать достаточное количество формуляров!

ожидается, что будут браться небольшие пробы крови, то следует использовать пробирки малого объема. Применяемые при получении плазмы антикоагулянты не должны мешать проведению запланированных исследований.

Взятие крови

Всегда следует перетягивать вену не более чем на одну минуту и по возможности избегать возбуждения пациента. Оба фактора могут изменить как количество клеток, так и ферментные показатели.

Проведение. Проколоть вену и собрать кровь непосредственно в пробирку, покрытую изнутри слоем этилен- диаминтетрауксусной кислоты. При наличии опыта иглу и пробирку можно удерживать одной рукой таким образом, чтобы ни одна капля крови не пропала. Если предстоит забрать кровь в несколько пробирок, то первоначально полученная кровь используется для гематологических исследований. Пробирки с антикоагулянтами сразу же после наполнения закрываются и несколько раз покачиваются (не встряхиваются) для перемешивания крови с антикоагулянтом.

Иглы. Для пункции вен лучше всего подходят новые одноразовые иглы диаметром 0,9 или 1,2 мм в зависимости от размеров собаки. В порядке исключения небольшие объемы крови забираются тонкими иглами (0,5 мм).

Емкости для собирания крови. Стеклянные пробирки (10—20 мл), чистые, обезжиренные (обезжиривание: 10 мин в алкогольном эфире).

Пробирки из пластмассы, покрытые слоем антикоагулянта (0,5—5,0 мл, этилендиаминтетрауксусная кислота, гепарин). Надо иметь антикоагулянт в сухом виде, поскольку при изменении объемов пробы могут возникнуть ошибки.

Системы/наборы для забора крови. При помощи вакуума или без него, они позволяют проводить бескапель- ный забор крови даже неопытному человеку.

Преимущества: никакой потери крови и никакого загрязнения кровью; недостатки: цена. При применении систем с вакуумом существует опасность коллапса для маленьких вен и при плохом наполнении вен, поэтому следует применять тонкие иглы (0,7 мм).

Места взятия крови (для правшей).

Правая подкожная вена предплечья. Ассистент, находящийся слева от собаки, обхватывает ее левой рукой снизу за шею (рис. 1.24). Правой рукой сверху он обхватывает плечевую кость за дистальный конец и вытягивает конечность. Тем самым, вена подтягивается и фиксируется. Перекрывание вены: выполняется ассистентом при помощи жгута для перетягивания и зажима, при помощи жгута с зажимом (рис. 1.7)\тл. при помощи большого и указательного пальцев правой руки.

Правая малая подкожная вена. Особенно удобное место для взятия крови у беспокойных животных. Пациент фиксируется ассистентом в положении на левом боку. Второй ассистент вытягивает левой рукой правое колено. Таким образом, вена подтягивается и фиксируется. Правой рукой посредством давления на выемку в коленке правая малая подкожная вена пережимается. При использовании жгута для перетягивания можно иногда обойтись помощью только одного ассистента (рис. 1.24, 1.7). При недостаточном выступании малой подкожной вены на латеральном отвороте через дистальную часть большеберцовой кости перекрывание может быть неполным.

Яремная вена. Ассистент проводит левую руку под шею собаки и отжимает локтем морду собаки вверх (рис. 1.26). Одновременно правой рукой ассистент прижимает собаку к себе, фиксируя кистью правой руки плечо собаки. Ветеринарный врач пережимает вену самостоятельно, или ему при этом помогает еще один ассистент.

Примечание. У беспокойных животных или у животных с густой шерстью место пункции должно быть выстрижено. Для установки постоянного катетера и для взятия крови из вен, которые плохо контурируют- ся (например, вследствие шока), рекомендуется венесекция.

Подсчет эритроцитов

Количество эритроцитов (Эц) на литр (л) (в/л) цельной крови (старая единица: Эц /мкл или мм3). Забор пробы или напрямую с иглы, или из пробирки, при этом каждую пробу перед забором следует хорошо перемешать (оседание эритроцитов).

Традиционный метод разведения:

В сухую эритроцитную пипетку набирается кровь до отметки 0,5, пипетка снаружи очищается. До отметки 101 набирается раствор Эйема без воздушных пузырей. Края пипетки закрываются большим и средним пальцами, и ее встряхивают в течение не менее 3 мин рукой или аппаратом для встряхивания пипеток.

Метод с использованием готовых систем: 1ЖОРЕТТЕ®-Тез1 N0 605851, система 1ЖОРЕТ-ТЕт Система иЫОРЕТТЕЫ служит для взятия и анализа микропроб крови для гематологии. Существуют наборы для определения эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Наборы предназначены для одноразового использования и содержат растворы для разбавления в зависимости от объемов проб. Путем капиллярного воздействия забирается точное количество крови. Это позволяет не следить за дозировкой. Точность выше, чем при традиционном разведении.

Подготовка счетной камеры. Провести по боковым желобкам счетной камеры влажным пальцем. Сухое, отшлифованное покровное стекло положить таким образом, чтобы на боковых желобках образовались цветные кольца Ньютона. Поле для подсчетов должно при этом оставаться сухим и чистым.

Наполнение счетной камеры. Закрыть указательным пальцем конец зритроцитной пипетки для того, чтобы можно было дозировать вытекание кровяной смеси. Стряхнуть в сторону первые пять вытекших капель. Установить наконечник пипетки наискось между покровным стеклом и серединой одного поля пластинки с выгравированной сеткой. Накапать кровяную смесь до полного наполнения одного поля камеры. Не переполнять. Аналогичные действия выполнить на другой половине камеры. Оставить на 3—5 мин для осаждения.

Гематокрит

Процентное количество клеточных составляющих (в том числе и эритроцитов) в крови. Единица СИ: объем Эц на 1 л крови; старая единица: объем в %. Два микрокапилляра для одноразового использования наполняются при погружении в кровь под углом без подсасывания благодаря капиллярным силам. В зависимости от вида центрифуги концы капилляра, которые будут находять- ся дальше от центра, закрываются замазкой, и капилляры центрифугируются в специальной микрогематокрит- ной центрифуге 2 мин. Поскольку большинство гематок- ритных трубочек покрыты слоем антикоагулянта, то оба капилляра можно наполнить прямо на месте забора крови, или используется кровь, предварительно обработанная антикоагулянтом.

Подсчет: вычисляется процентное количество эритроцитов из обоих капилляров, и берется среднее арифметическое.

Оценка окраски плазмы и слоя лейкоцитов (“слой сала”, buffy coat) над слоем эритроцитов осуществляется при помощи лупы (нормальная толщина от 0,5 до 1,3 % гематокрита).

На гематокрит в существенной мере влияют добавленные в трубочки антикоагулянты (осмотические силы). Правильное значение гематокрита можно получить только тогда, когда пробирка, в которую собирается кровь, заполняется до отметки. Если ожидается, что от пациента можно получить небольшое количество крови, то применяется пробирка меньшего объема.

Гемоглобин

Единица СИ = ммоль гемоглобина на 1 л крови; старая единица = г/100 мл. Определение проводится фотометрически. Метод и количество требуемой крови варьируются в зависимости от типа фотометра. Альтернатива: гемоглобинометр Спенсера.

Реакция оседания эритроцитов (скорость оседания эритроцитов, СОЭ)

Эритроциты осаживаются в крови, обработанной антикоагулянтом. Скорость оседания (мм/ч) рассчитывается с целью: приблизительной оценки количества эритроцитов, оценки увеличения количества лейкоцитов, определения смещения соотношения альбумина и глобулина и белка плазмы. С помощью СОЭ можно оценить содержание билирубина и липемию в плазме. На СОЭ влияют многие факторы, поэтому ее изменения не являются специфическими. Однако это все-таки достаточно чувствительный показатель, позволяющий делать заключения относительно наличия воспалительных процессов и разложения ткани. Нормальная СОЭ не исключает возможность болезни. Преимуществом метода является легкость проведения и незначительность затрат.

Проведением шприц объемом 2 мл вначале набирается 0,4 мл 3,8%-ного раствора цитрата натрия, затем 1,6 мл крови, смесь слегка взбалтывается, без образования пены выливается шприцем в пробирку, затем набирается в пипетку Вестергрена до нулевой отметки и ставится в штатив для седиментации. Оценка производится через 1, 2 и 24 часа. Если же пипетка Вестергрена для осаждения крови наклонена на 60°, то оседание эритроцитов ускоряется, и оценка может быть произведена через 1, 10 и 20 мин, но при этом точность несколько снижается.

Нормальная СОЭ у собаки через 1 ч: 1—2 мм, через 2 ч: 2—4 мм, через 24 ч: от 8 до 15 мм.

Подсчет лейкоцитов

Интерпретацию значений см. в гл. 17.1, Количество лейкоцитов (единица СИ = количество лейкоцитов на 1 л крови, старая единица = количество лейкоцитов на мкл). Взятие проб происходит либо непосредственно из пунк- ционной иглы, либо из пробирки с антикоагулянтом, при этом проба непосредственно перед взятием должна быть хорошо перемешана (осаждение лейкоцитов). Сухой пипеткой для лейкоцитов набирается кровь до отметки 0,5, после чего пипетку надо очистить снаружи. Затем до отметки 11 набирается реагент Тюрка. Пипетка закрывается на концах указательным и большим пальцами и встряхивается по меньшей мере 3 мин (в аппарате для встряхивания пипеток) для перемешивания и гемолиза эритроцитов.

Подготовка и наполнение счетной камеры. Так же, как при определении количества эритроцитов или UNOPETTE® - Test (см. гл. 4.3.2).

Подсчет. Подсчитать количество лейкоцитов в по меньшей мере двух, а лучше четырех угловых квадратах счетной камеры при 100—200-кратном увеличении (рис. 4.2). Эти четыре больших квадрата должны содержать, по меньшей мере, по 16 малых квадратов, количество клеток в которых суммируется.

Определение количества. Число лейкоцитов на 1 л крови: умножить число клеток в четырех квадратах на 50 х 106 (Один квадрат содержит 0,1 мм3 крови, разбавленной в пропорции 1:20). Если расчет производится только по двум квадратам, то все умножается на 100х 106 (быстрее, но менее точно).

Альтернатива: электронная машина для подсчета клеток. Рентабельность — ср. гл. 4.1.5.

Гемограмма

Процентное количество отдельных видов лейкоцитов в общем количестве лейкоцитов. Значения и интерпретацию см. в гл. 17.1.

Приготовление мазка крови

Для равномерного распределения клеток крови на мазке необходимы хорошо очищенные, обезжиренные предметные стекла. Они уже поставляются в таком виде, при необходимости их очищают алкогольным эфиром (1:1).

Проведение: маленькую капельку крови непосредственно из иглы для взятия крови или из пробирки для крови, хорошо перемешанную при помощи микропипетки, нанести на внешнюю треть предметного стекла. Нижняя кромка стекла Ундритца (возможно, обезжиренного покровного стекла или другого предметного стекла) осторожно подносится к капельке крови, пока та не распределится вдоль его нижней кромки. Теперь покровное стекло двигается по предметному и таким образом равномерно размазывает приставшую к нему кровь. Мазок должен распределиться по средней трети предметного стекла, в крайнем случае немного выступить на внешнюю треть. При слишком больших каплях крови за счет одно- или двукратного поднимания покровного стекла перед размазыванием количество приставшей крови уменьшается так, чтобы получить мазок нужных размеров {рис. 4.5). Размазывание крови по предметному стеклу должно осуществляться за один прием, кровь не должна находиться перед кромкой стекла Ундритца.

Мазки высушиваются при комнатной температуре на воздухе. Их никогда не следует класть на солнце или искусственно подогревать.

Методы окраски

М + О Бг//0.тк®. Рациональное, простое и быстрое окрашивание, которое дает хорошие результаты.

ТеМятрШх®. Это предметные стекла, которые уже покрыты слоем красящего вещества. Тем самым отпадает необходимость окрашивания. Вполне достаточно нанести на них приготовленный мазок крови и подождать определенное время (см. руководство по использованию). Устойчивость этих препаратов не очень велика. Однако дифференциация клеток все же вполне возможна.

Паноптическая окраска по Паппегейму, окраска Май- Грюнвальда-Гимзы. Несколько лет назад это был метод выбора, который и сегодня позволяет получить весьма хорошие результаты. Но окраска по этому методу требует больших затрат времени и слишком сложна для практического применения в клинике.

Дифференциация. (Рис. 4.6 — 4.11, см. цветную вклейку I): Клетки окрашенного мазка крови подвергаются морфологической классификации, то есть дифференцируются по признакам и форме, н подсчитываются. Окрашивающий препарат сначала тщательно просматривается при незначительном увеличении для того, чтобы получить представление о качестве окраски и равномерности распределения кровяных телец. Если мазки недостаточно тонкие, со слишком интенсивной окраской, то об отдельных клетках уже нельзя судить с достаточной степенью достоверности. Вслед-

направление размазывания

 

меньших размеров Рис. 4.5. Приготовление мазков крови


 

ствие этого для подсчетов используют только такие мазки и, соответственно, такие участки мазка, где эритроциты расположены достаточно плотно, но все же не перекрывают друг друга. Для дифференциации кровяного мазка надо рассмотреть по меньшей мере 200 лейкоцитов с погружением в масло. Удобнее всего проводить дифференциацию лейкоцитов при 500-кратном увеличении (окуляр 10х, объектив 50х масло). Морфологические тонкости распознаются в деталях при использовании объектива со 100-кратным увеличением. Для того, чтобы избежать повторного просмотра одного и того же поля, предметное стекло сдвигается по правильной зигзагообразной линии (меандр). При оценке мазка необходимо обращать внимание также и на изменения формы и величины, цветовые особенности эритроцитов и на соотношение числа эритроцитов к числу тромбоцитов. Дифференциация лейкоцитов требует большого опыта. Если подобные навыки отсутствуют, то тогда надежнее и выгоднее с точки зрения экономии времени отправить высушенный на воздухе мазок крови для дифференциации в исследовательскую лабораторию.

Ретикулоциты и нормобласты

Ре тикулоцита ми называются безъядерные молодые полихроматические большие эритроциты (проэритроциты) с поддающимися окрашиванию остатками исходной протоплазмы кровяных клеток (переходная форма между нормобластами и созревшими эритроцитами).

Количество ретикулоцитов позволяет оценить активность красного костного мозга (регенеративные или нерегенеративные анемии, гл. 16.2).

Методы окрашивания

Смешать 1 часть 0,5%-ного метиленового синего раствора и 1 часть крови, обработанной этилендиаминтет- рауксусной кислотой, в реагентной пробирке, оставить на 10 мин для окрашивания, приготовить мазок (ср. гл. 4.3.7).

Прижизненная окраска по Вольферу (бриллиантово- кресилово-синий метод).

Стеклянной палочкой насыщенный 5%-ный щелочной бриллиантово-кресилово-синий раствор нанести на предметное стекло, дать ему высохнуть и шелковой тряпочкой растереть тонким слоем. Затем поместить 4—5 капель крови на предметное стекло, при помощи второго предметного стекла хорошо перемешать кровь путем многократного опускания и поднимания. Через 1—2 мин происходит окрашивание. Верхним предметным стеклом кровь собирается, и на чистом предметном стекле приготавливаются мазки.

Подсчет

Осуществляется на самом тонком и удачном мазке в иммерсионном поле. Эритроциты окрашиваются в светло-зеленый цвет, а ретикулоциты распознаются по синим сетчатым структурам (ретикулярная формация). Подсчитывается 1000 эритроцитов. Количество ретикулоцитов указывается в промилле или процентах.

Нормобласты—это имеющие ядра проэритроциты, которые при дифференциации лейкоцитов следует подсчитываться отдельно (гл. 16.2).

Коэффициентные показатели эритроцитов

а)   Коэффициент окрашенности, цветной показатель (МСН). Коэффициент окрашенности показывает среднее содержание гемоглобина в одном эритроците в виде пикограммы (пг, старая единица). МСН = “mean corpuscular hemoglobin” Единицей СИ для МСН является фемтомоль (фмоль)

гемоглобин (г / л)

количество эритроцитов (Т / л)

б)   Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС). МСНС = “mean cell hemoglobinconcentration” Старая единица = г/100 мл, единица СИ = г/л или ммоль/л

»    гемоглобин    (г   /    л    или ммоль / л)

МСНС =    —    -—-

гематокрит

в)   Средний объем эритроцитов (MCV). MCV - средний корпускулярный объем, “mean cell volume” Старая единица и единица Си совпадают = фемтолитр (фл)

гематокрит

количество эритроцитов (Т / л)




загрузка...