загрузка...
 
Иммуноблоттинг -анализ
Повернутись до змісту

Иммуноблоттинг -анализ

Суть этого метода, применяемого для идентификации белков, заключается в следующем (ил. 60). Содержащие белки суспензии подвергают электрофорезу в соответствующем геле. Затем на гелевую пластинку накладывают пластинку из сорбирующего пористого материала (чаще всего целлюлозный или нитроцеллюлозный фильтр) и создают условия для переноса на нее белков из геля. В силу того, что перенос происходит за счет естественной или усиленной тем или иным способом диффузии в направлении гель-фильтр, расположение мест сорбции белков на фильтре будет соответствовать их расположению в геле после фореза. Фактически такой перенос на фильтр необходим для улучшения условий обработки анализируемых белков мечеными антителами. Манипулируя с фильтром, легче создать условия для взаимодействия антиген-антитело, легче отмывать от несвязавшихся антител и, главное, легче визуализировать результаты. В зависимости от желания и возможностей исследователя можно применить любой современный вариант визуализации - РИФ, ИФА или РИА.

В первом случае обнаружить искомый антиген можно будет, просматривая обработанный фильтр под источником света соответствующей длины волны. Нужная полоса будет флюоресцировать. Во втором случае в месте локализации антигена на белом фильтре будет визуально регистрироваться окрашенное пятно. Для выявления результатов при применении радиоактивно меченых антител необходимо совместить фильтр с фотопластинкой, после экспонирования и проявления которой на месте, соответствующем расположению антигена на фильтре, будет темное пят-но засвеченной фотоэмульсии.

Заканчивая этот раздел курса, хочется еще раз подчеркнуть, что выбор конкретного метода исследования с применением антител определяется спецификой проводимых исследований и возможностями их осуществления в реальных условиях. Кроме того, следует учитывать, что эти методы во многих случаях требуют тщательной подготовки и значительных финансовых затрат.

 



загрузка...