загрузка...
 
Нейтрофилзависимое воспаление на фоне дестабилизации внутрисосудистого гомеостаза
Повернутись до змісту

Нейтрофилзависимое воспаление на фоне дестабилизации внутрисосудистого гомеостаза

М.И. Заславская, А.Н. Маянский

Нижегородская медицинская академия

Исследованы функциональные ресурсы нейтрофилов крови и экссудата у крыс на фоне зимозан- индуцированной дестабилизации внутрисосудистого гомеостаза. Выявлено подавление миграции нейтрофилов к очагу воспаления в перитонеальной полости в течение 1 ч после внутривенной инъекции зимозана. Мобилизационная блокада нейтрофилов не зависела от типа внутрибрюшин- ного ирританта и носила системный характер. Временная мобилизационная блокада нейтрофилов не была связана со снижением количества циркулирующих клеток крови, а также не сопровождалась изменением способности к спонтанной миграции и способности к СЗЬ- и 1дС-рецепторзави- симым и неспецифическим адгезивным реакциям. (Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5, № 1. С. 50-52.)

Ключевые слова: нейтрофилы, воспаление, трансмиграция, адгезия, зимозан.

Одним из типовых патологических процессов, широко распространенных в клинике, является синдром внутрисосудистой активации крови [1]. Он возникает при септических состояниях, когда в кровь из очагов воспаления поступает значительное количество микробных клеток и/или их дериватов, дестабилизирующих внутрисосудис- тый гомеостаз. Это может приводить к изменению реактивности (кондиционированию) нейтрофилов

внутри кровяного русла, что отражается, в конечном итоге, на элиминационных ресурсах воспалительной реакции. В связи с этим, задачей настоящей работы было изучение эффекторных ресурсов нейтрофилов в условиях нарушения внут- рисосудистого гомеостаза.

Материалы и методы

Определяли мобилизационные и функциональные параметры нейтрофилов в экссудате брюшной полости, индуцированном на фоне внутривенной инъекции зимозана. В опытах использовали беспородных крыс-самцов массой 150-200 г. Под легким эфирным наркозом животным вводили 10 мг (в объеме 0,3 мл) зимозана (Sigma, USA), контрольным животным — такой же объем забуференного физиологического раствора (ЗФР).

Асептическое воспаление воспроизводили путем введения в брюшную полость ирритантов. В качестве основного ирританта использовали 5 мл 10%-ного изотонического стерильного раствора пептона, который вводили через 0,5-1-4-24 ч после внутривенной инъекции зимозана (опыт) или ЗФР (контроль). В ряде экспериментов для внутрибрюшинного введения применяли другой ирритант: взвесь лиофилизированных клеточных стенок Staphylococcus aureus, штамм ССМ 885 (5 мг/мл; 5 мл). Перитонеальный экссудат с максимальным содержанием ней- трофилов получали через 4 ч после инъекции ирританта путем промывания брюшной полости ЗФР (20 мл). В экссудате подсчитывали количество нейтрофилов.

Функциональные параметры нейтрофилов определяли по уровню латексиндуцированной люминолзависимой хемилю- минесценции (ХЛ) [3] и способности к адгезии [2]. Специфическую (C3b- и IgG-зависимую) адгезию оценивали по количеству клеток, связанных с сефадексом G-25 «Fine» или сефарозой 4B (Farmacia, Sweden), конъюгированных соответственно с СЗЬ-фактором комплемента и агрегированным IgG крысы, а неспецифическую адгезию — по прикреплению к гранулам полиметилметакрилата (ПММА) [2].

Спонтанную миграцию нейтрофилов крови оценивали по площади миграции клеток из капилляров после 24-часовой инкубации при 37 °С [6]. Площадь зоны миграции определяли планиметрически в условных единицах.

Интерплантарное воспаление вызывали путем введения в подушечки лап 0,04 мл (10 мг/мл) агрегированного (63 °С, 30 мин) коммерческого препарата иммуноглобулина человека (НИИЭМ,

Н.   Новгород). В противоположную лапку (контроль) вводили аналогичную дозу неагрегированного препарата. Через 5 ч животным давали летальную дозу эфирного наркоза, лапки отсекали на уровне сустава и определяли разницу веса с контролем в условных единицах.

Достоверность различий в результатах оценивали по критерию Стъюдента. Различия считали достоверными при р < 0,05.

Результаты и обсуждение

Обнаружена острая мобилизационная блокада нейтрофилов на фоне внутривенного введения зи- мозана, что проявлялось в снижении миграции клеток в очаг внутрибрюшинного воспаления.

Число нейтрофилов в перитонеальных экссудатах, индуцированных через 0,5 и 1 ч после внутривенной инъекции зимозана, было существенно ниже, чем на тех же сроках в контроле (таблица). В дальнейшем (4 ч) разница между контролем и опытом сглаживалась, и через 24 ч результаты в обоих случаях были одинаковы. Снижение миграции нейтрофилов в перитонеальную полость проявлялось в выраженном ослаблении ХЛ экссудата в течение 0,5-1 ч после внутривенного введения зимозана (см. таблицу).

На феномен мобилизационной блокады не влияла природа индуктора местного воспаления. При использовании клеточных стенок S. aureus в качестве ирританта наблюдали существенное снижение количества нейтрофилов, рекрутированных в брюшную полость через 0,5 ч после внутривенного введения зимозана: 6,5 ± 0,2 X 105 (опыт)

± 17,2 X 105 (контроль) (p < 0,05).

Сокращение притока нейтрофилов в очаг воспаления не было связано со снижением их количества в крови на момент проведения эксперимента. Хотя внутривенное введение зимозана сопровождалось исчезновением большинства нейтро- филов из крови через 1 мин, их количество полностью восстанавливалось к 30-й мин, т.е. к моменту внутрибрюшинной инъекции ирританта (результаты не показаны).

Внутрисосудистая активация крови не нарушала способность нейтрофилов крови к спонтанной миграции. Через 0,5 ч после внутривенной инъекции зимозана результаты в контрольной и опытной групп не отличались друг от друга: 19,1 ±2,7 и 18,6 ± 3,0 соответственно (p > 0,05).

Мобилизационная блокада нейтрофилов носила системный характер, не связанный с локализацией очага воспаления. На модели интерплантарного воспаления было показано, что в опыте (введение агрегированного иммуноглобулина через 0,5 ч после внутривенного введения инъекции зимозана) наблюдалась более слабая реакция, чем в контроле, хотя различия были недостоверными:

± 14,5 и 79,25 ± 28,3 ф > 0,05) соответственно.

Для суждения об адгезивных реакциях нейтрофилов была изучена их способность прикрепляться к объектам, несущим специфические лиганды (СЗЬ, IgG), а также к сорбентам, фиксирующим клетки через гидрофобные контакты (ПММА). Через 0,5 ч после внутривенного введения зимозана число нейтрофилов, закрепившихся на СЗ^сефа- дексе, в опыте и контроле было соответственно

± 4,3 % и 43,7 ± 5,0 % ф > 0,05). Количество клеток, прикрепившихся к IgG-сефарозе также достоверно не отличалось от контроля: 44,0 ± 4,8 % и 43,2 ± 5,1 % ф > 0,05). Для ПММА эти показатели находились в пределах 50,3 ± 5,2 % и

± 6,7 % ^ > 0,05). Это говорит о сохранении ряда адгезивных потенций у нейтрофилов на фоне внутрисосудистой активации, но не исключает изменений по другим адгезивным контактам, обеспечивающим взаимодействие с эндотелием [8, 9].

Общая тенденция к снижению мобилизационных ресурсов нейтрофилов на фоне дестабилизации крови позволяет предположить, что этот феномен связан с нарушением механизмов, обеспечивающих выход нейтрофилов в экстрава- зальное пространство, таких как избыточная продукция хемокинов [4, 5, 7, 10], которая способна вызывать функциональную перестройку нейтрофилов или эпителиоцитов, приводя к блокаде направленной миграции нейтрофилов в очаг повреждения.

 

 

ЛИТЕРАТУРА

 

Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. — Новосибирск: Наука, 1989. — 344 с.

Невмятуллин А.Л. Люминолозависимая хемилюминесценция нейтрофила в условиях гомологичной и гетерологичной рестимуляции // Моделирование

и клиническая характеристика фагоцитарных реакций: Республ. сб. науч. труд. / Под ред. А.Н. Маянского, 1989. — С. 146-151.

Чеботарь И.В., Конышкина Т.М. Специфическая и неспецифическая адгезия нейтрофилов человека: особенности сорбционного и десорбционного процессов // Моделирование и клиническая характеристика фагоцитарных реакций: Республ. сб. науч. труд. / Под ред. А.Н. Маянского, 1989. — С. 212-219.

Coenjaerts F.E., Walenkamp A.M., Mwinzi P.N. et al. Potent inhibition of neutrophil migration by cryptococcal mannoprotein-4-induced desensitization // J. Immunol. — 2001. — Vol. 167, № 7. — P. 3988-3995.

Cuschieri J., Gourlay D., Garcia I. et al. Modulation of endotoxin-induced endothelial activity by microtubule depolymerization // Trauma. — 2003. — Vol. 54, № 1. — P. 104-112.

David J.R., Al-Askari.S., Lawrence H.S., Thomas L. Delayed hypersensitivity in vitro. I. The specificity of inhibition of cell migration by antigens // J. Immunol. — 1964. — Vol. 93, № 2. — P. 264-273.

Hechtman D.H., Cybulsky M.I., Fuchs H.J. et al. Intravascular IL-8. Inhibitor of polymorphonuclear leukocyte accumulation at sites of acute inflammation // J. Immunol. — 1991. — Vol. 147, № 3. — P. 883-892.

Radi Z.A., Kehrli M.E., Ackermann M.R. Cell adhesion molecules, leukocyte trafficking, and strategies to reduce leukocyte infiltration // J. Vet. Intern. Med. — 2001. — Vol. 15, № 6. — P. 516-529.

Williams M.A., Cave C.M., Quaid G., Solomkin J.S. Chemokine regulation of neutrophil function in surgical inflammation // Arch. Surg. — 1999. — Vol. 134, № 12. — P. 1360-1366.

Xythalis D., Frewin M.B., Gudewicz P.W. Inhibition of IL-8-mediated MAPK activation in human neutrophils by beta1 integrin ligands // Inflammation. —

— Vol. 26, № 2. — P. 83-88.

 

Neutrophil-dependent inflammation under intravenous homeostasis destabilization

M.I. Zaslavskaia, A.N. Mayanskii Nizhny Novgorod Medical Academy, Nizhny Novgorod

The functional resources of blood and peritoneal exudation rat neutrophils were investigated under zy- mozan-induced intravascular homeostasis destabilization. Suppression of neutrophil migration into the site of peritoneal inflammation within 1 hour after intravascular injection of zymozan was detected. The mobilization blockade of neutrophils did not depend on the type of abdominal irritant and the site of inflammation. The temporary neutrophil mobilization blockade did not a result of circulating blood cell decrease, and also was not accompanied by change in the ability to spontaneous migration, specific (C3b-, IgG- dependent) and nonspecific adhesion. (Cytokines and Inflammation. 2006. Vol. 5, № 1. P. 50-52.)

Key words: neutrophils, inflammation, transmigration, adhesion, zymozan.

Государственное учреждение Научно-исследовательский институт клинической иммунологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

630099, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14 Телефон (3832) 22-26-74, факс (3832) 22-70-28

 



загрузка...