Фактор некроза опухоли а (TNF) — один из ключевых цитокинов, обладающих способностью разрушать клетки раковых опухолей, в том числе и резистентных к другим цитокинам с аналогичными свойствами. Проведенные нами исследования показали, что местный (в слезной и стекловидной жидкости) и системный (в сыворотке) дефицит TNF играет важную роль в патогенезе увеальной меланомы (УМ) и ассоциируется с прогрессированием заболевания. Это и послужило основанием для использования рекомбинантного TNFa (rTNF) в качестве терапевтического агента. Известно, что чувствительность к rTNF различных опухолей неодинакова. Она определяется биологическими характеристиками опухоли, точный спектр которых не установлен. Терапевтические возможности rTNFa при УМ — опухоли забарьерного органа, а, следовательно, идеальной модели для изучения локальных эффектов цитокина, не изучены.
Цель работы — исследование возможности и эффективности интратуморального применения rTNFa при УМ. Пятерым пациентам с УМ, размеры которой (высота более 7 мм и/или диаметр более 19 мм, стадии T3-4N0M0) не позволяли проводить органосохранное лечение, вводили в строму опухоли 100 000 ЕД препарата rTNFa (Альнорин, фирма «Вектор», Бердск). Спустя 72 ч после введения препарата больной глаз энуклеировали, исследовали гистоморфологически и иммуногистохимически, в том числе и TUNEL-методом (Boeringer Manheim, Германия), позволяющим визуализировать активацию ядерных каспаз при апоп- тозе. Проведенные исследования позволили выявить как общие эффекты rTNFa при интратуморальном введении в УМ, так и индивидуальные, зависящие от особенностей конкретной опухоли. Так, макроскопически в строме всех леченных УМ выявляли гигантские кисты размерами до S объема опухоли. Гистоморфологически отмечали выраженную инфильтрацию моноцитами/ макрофагами и лимфоцитами зоны, пограничной месту введения препарата; лимфоцитарный вал вокруг основания УМ, краевое стояние лимфоцитов в лакунах. Особенностью этих опухолей также являлся тромбоз новообразованных сосудов. Очаги некробиоза чередовались с зонами ишемии; вокруг лакун — места депонирования TNF — отмечали обширную зону цитолиза. В клетках УМ, окружающих лакуны, фиксировали необратимую активацию ядерных каспаз — доказательство происходящего апоп- тоза. Вместе с тем наблюдали индивидуальные различия в объеме лизированных клеток к тромбозу новообразованных сосудов, а также — по площади зон некробиоза, ишемии и апоптоза. В одних УМ апоптические клетки располагались гнёздами, в других они равномерно чередовались со «здоровыми» функционирующими клетками; в-третьих — апоптоз охватывал всю зону просмотра. По-видимому, неоднозначность эффектов rTNFa объясняется индивидуальными характеристиками конкретной опухоли конкретного больного (неоангиогенез, чувствительность или резистентность к апоптозу, индуцированному через TNF, внутриклеточное соотношение белков-регуляторов апоптоза, уровень рецепции к TNF и т.д.). Трёхлетнее наблюдение за больными, получавшими Альнорин, показало отсутствие метастазирования.
Выводы: 1. УМ является опухолью, чувствительной к воздействию rTNFa. 2. Эффективность rTNFa коррелирует со степенью васкуляризации УМ. 3. Для оптимизации эффекта (полной деструкции УМ) и сохранения глаза как органа после интрату- морального воздействия Альнорином необходимы дальнейшие исследования по подбору доз препарата.
Удержание цитокинов в стекловидной жидкости глаза с увеальной меланомой
В.Г. Лихванцева, О.С. Слепова НИИ глазных болезней им. Гельмгольца, Москва
Увеальная меланома (УМ) — одна из наиболее часто встречающихся внутриглазных опухолей у взрослого населения. В свете современных концептуальных представлений о роли цитокинов в патогенезе различных типов рака представляло интерес изучить их содержание в стекловидной жидкости (СТЖ), находящейся в тесном контакте с УМ, и сопоставить его с показателями цитокинов в сыворотке крови (СК) и в слёзной жидкости (СЖ). Исследовали (ИФА) концентрации TNFa, IFNa, IFNy, IL-2, sIL-2R, IL-6, sIL-6R, IL-4, IL-8, IL-1P в пробах СТЖ энуклеированных глаз (n = 49) с УМ больших размеров (стадии Тэ^М0) в сопоставлении с СК и СЖ тех же больных. TNFa обнаружили в 5 из 7 тестируемых проб СТЖ (71,5 %) — от 218 до 590 (среднее значение — 375 ± 124) пкг/мл, в то время как в СК и СЖ у тех же больных этот цитокин отсутствовал. Присутствие TNF в СТЖ мы объяснили тем, что его могут синтезировать клетки тканей глаза, окружающих опухоль, как фактор местной противоопухолевой защиты. Продолжительные наблюдения за обследуемыми больными показали, что у 5 пациентов с позитивными пробами СТЖ клиническое течение УМ было относительно благоприятным (без метастазов), а две негативные пробы СТЖ принадлежали пациентам, находящимся в стадии скрытого метастазирования. Это согласуется с ранее представленными нами доказательствами тесной связи между сочетанным системным и местным дефицитом TNFa и развитием метастазов УМ. Тестируемые пробы СТЖ содержали и другие цитокины, участвующие в противоопухолевых реакциях, например, IL-8 (n = 9, 100 % случаев, от 76 до 1500 пкг/мл, среднее значение — 614 ± 234), обуславливающий инфильтрацию опухоли иммуноцитами, а, следовательно, запуск клеточных реакций замедленного типа — основного механизма деструкции опухолей. Минимальную концентрацию IL-8 также определяли на фоне метастазирования. В отдельных случаях в СТЖ обнаруживали IL-6 (37,5 %), обладающий антипролиферативными свойствами, уровни 25-560 пкг/мл (среднее — 103 ± 51). sIL-2R — косвенный показатель супрессии/активации местного иммунитета
оказался на неожиданно высоком уровне (от 4800 до 8000 пкг/мл; среднее — 6600 ± 1400), что значительно превышало содержание цитокина в сыворотке (« в 2 раза) и в СЖ, где он не выявлялся (чувствительность теста — 390 пкг/мл). Вместе с тем ни в одной из тестируемых проб СТЖ (n = 12), как и в СЖ (n = 45) или в СК (n = 132) не были обнаружены IL-1P — иммуномедиатор антиген-презентирующих функций макрофагов, IL-2 — ключевой регулятор иммунного, в том числе противооопухолевого, ответа, а также — IL-4 (чувствительность тестов — 5, 8 и 20 пкг/ мл соответственно). Сопоставление концентрации различных ци- токинов в трёх тест-пробах (СК, СЖ, СТЖ) позволило заключить, что их продукция в СТЖ является самостоятельным и независимым процессом и может быть отражением или следствием опухолевого процесса в глазу, а возможно, компенсаторной иммунной реакцией на опухоль. Однако интенсивность этой реакции, по-видимому, оказывается недостаточной, особенно на фоне характерного для УМ ослабления общей системной и местной, например, в СЖ и/или СТЖ продукции цитокинов, необходимых для обеспечения противоопухолевой защиты.
Полученные данные могут служить обоснованием для локального, в частности, интратуморального введения rTNF или препаратов, способствующих его секреции (rIL-2).