загрузка...
 
Неравномерность апоптоза ТН1 и ТН2 в норме и при некоторых иммунопатологических процессах
Повернутись до змісту

Неравномерность апоптоза ТН1 и ТН2 в норме и при некоторых иммунопатологических процессах

Т.Ю. Григорьева, М.Ф. Никонов, М.Л. Станислав,

М.И. Варфоломеева, А.А. Ярилин

 аГНЦ Института иммунологии МЗ РФ;

Институт ревматологии РАМН, Москва

Дисбаланс Th1- и ТЪ2-клеток играет важную роль в патогенезе ряда заболеваний. Так, развитию ревматоидного артрита (РА) способствует преобладание Th1-, а условием развития атопических заболеваний, в частности, бронхиальной астмы (БА) является преобладание функциональной активности №2-клеток. Задача исследования состояла в установлении возможного вклада неравномерного вступления Th1- и ^2-клеток в активационный апоптоз в формирование дисбаланса Th1/Th2 при РА и БА. Субпопуляции Т-хел- перов в мононуклеарных клетках крови определяли по наличию внутриклеточных цитокинов — IFNy в Th1 и IL-4 в Th2. Клетки, выделенные на одноступенчатом градиенте фиколл-верографина, активировали форбол 12-миристат 13-ацетатом (ФМА) (Sigma) в концентрации 10 нг/мл и иономицином (Sigma) в концентрации

мкМ в присутствии ингибитора секреторного процесса GolgiPlug 1 мкг/мл (Becton Dickinson) и культивировали в течение 18 ч при 37 °С и 5 % CO2 в RPMI-1640 с добавлением 10 % сыворотки эмбрионов телят (Sigma) и 2мМ L-глютамина (Sigma) в концентрации 1х105 на лунку. После отмывания клетки фиксировали в течение 10 мин при +40 °С 4 %-м раствором параформальдегида (Sigma). После отмывания клетки пермеабилизировали в течение 20 мин при комнатной температуре в 0,1 %-м растворе сапонина (Sigma) в фосфатно-солевом буфере, рН = 7,2. Клетки окрашивали в течение 20 мин с помощью ФИТЦ-меченых моноклональных антител к IFNy или IL-4 (Caltag). Затем клетки отмывали от несвязавшихся антител в 0,1 %-м растворе сапонина на фосфатно-солевом буфере и фиксировали в 1 %-м растворе параформальдегида. К суспензии добавляли раствор пропидия йодида (Sigma) в конечной концентрации 5 мкг/мл, клетки подвергали проточной цитометрии на приборе «FACSCalibur» (Becton Dickinson). При активации мононуклеаров крови комбинацией ФМА и иономицина у здоровых доноров процент гиподиплоидных клеток во фракции Т-лимфоцитов, содержа- тих IL-4, составлял 16,47—8,5 %, а среди Т-клеток, содержащих IFNy — 5,58—2,9 %; для всей популяции Т-клеток этот показатель был равен 9,43—2,47 %. При РА наблюдали похожую картину: апоптоз среди ^-4+-клеток — 28,55—9,16 %, а среди IFNy+^леток — 8,31—3,28 %. При БА указанные величины составляли 8,43—2,25 % и 5,79—1,84 %. Всех больных БА (n = 14) можно разделить на 2 подгруппы, существенно различавшихся по изучаемым параметрам. У части больных (n = 7) в апоптоз вступали преимущественно ^-4+-клетки — 10,9-3,45 % при 3,31-2,13 % для №^+-клеток, в другой подгруппе больных (n = 7) апоптозу подвергались преимущественно IFNy+^летки (9,26-2,59 %), тогда как апоптоз у П,-4+-клеток был резко снижен (4,98-1,39 %).

При активации мононуклеаров крови здоровых людей, а также больных РА и половины больных БА апоптозу в большей степени подвержены Т-клетки, содержащие в цитоплазме IL-4 (Th2), чем Т-клетки, несущие в цитоплазме IFNy (Th1), тогда как у 50 % больных БА в апоптоз вступают преимущественно Thl-клетки. Это свидетельствует о возможном вкладе неравномерного апоптоза Thl и Th2 в формирование дисбаланса Th1/Th2 при данных заболеваниях.

Глиальный цитокин S100b и аутоантитела к нему у мышей MRL-lpr и MRL+/+ при развитии и экспериментальной модуляции системного аутоиммунного процесса

М.А. Грудень1, А.В. Пузырев1, З.И. Сторожева1, И.А. Костанян2,

В.В. Юрасов1,Н.Л. Яковлева1, Г.Н. Телегин1, В.В. Шерстнев1 Институт нормальной физиологии им. П.К. Анохина РАМН; 2Институт

биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова, Москва

В экспериментальных исследованиях на животных в качестве адекватной модели аутоиммунного заболевания — системной красной волчанки, используются линии MRL/MpJ-lpr/lpr (MRL- lpr) и MRL/MpJ+/+ (MRL+/+), близкие по многим параметрам (внешний вид, вес, репродуктивный возраст), но отличающиеся по времени развития проявлений lupus erythematosus. Для этих животных также характерны продукция антител к ДНК, изменения цитокинового статуса, проникновение лимфоидных клеток в паренхиму мозга с воспалительным процессом, изменения поведения , морфологические и биохимические признаки апоптоза в структурах мозга и иммунной системе, связанные с Fas-моду- лируемым истощением собственных реактивных клонов лимфоцитов. Мыши MRL-lpr манифестируют системные аутоиммунные нарушения на более ранних сроках (в 2—4 мес.) в сравнении с MRL+/+ (более 6—8 мес.). Изучали содержание белка S100b в мозге мышей линии MRL-lpr, продукцию антител к S100b на различных стадиях развития основного аутоиммунного заболевания и возможность его модуляции с помощью фактора апоптоза — пептида HLDF6. Установлено, что в возрасте 2—2,5 мес. у обеих линий мышей выявляются сывороточные аутоантитела (АТ) к белку S100b в титрах 1:256—1:512. К четырем месяцам наблюдали рост титров АТ к белку S100b, причем у линии MRL-lpr уровень аутоантител (титр 1:1024 ± 100) сохранялся неизменным до 6 мес. У мышей MRL+/+ уровень антител к белку S100b возрастал до 7—8 мес. (титр 1:3500 ± 500) с его снижением к 12 мес. их жизни (титр -1:512 ± 160). При внутрибрюшинном введении HLDF6 (1 мкг, 10 инъекций) животным обеих линий в различные критические сроки развития основного аутоиммунного заболевания показано, что по сравнению с уровнем АТ у одновозрастных контрольных мышей линий MRL+/+ и MRL-lpr, которым вводили физиологический раствор, после введения препарата HLDF6 у экспериментальных мышей обоих линий в возрасте 12—16 нед. наблюдали снижение уровня АТ к S100b. В более поздние сроки заболевания у мышей линии MRL-lpr отмечали дальнейшее снижение титров АТ к S100b вплоть до 28-недельного возраста, в то время как у мышей линии MRL+/+ пептид HLDF6 индуцировал рост титров АТ к S100b с максимальными их значениями от 1:512 до 1:5500 в период 24—52 нед. жизни мышей.

Показано, что у мышей обеих линий MRL содержание белка S100b остается стабильным и составляет 1,0 ± 0,4 нг/мг ткани на всех периодах развития заболевания. Однако, при введении пептида HLDF6 обнаружено незначительное увеличение S100b на 20—21-ю нед. жизни животных обеих линий. Данные указывают на участие белка S100b и антител к нему в механизмах развития аутоиммунного заболевания — системной красной волчанки.



загрузка...