А.Л. Позняк1, Ю.В. Лобзин1, В.П. Сухинин2, В.М. Мудрицкий1 аВоенно-медицинская академия МО РФ, С.-Петербург; 2НИИ гриппа РАМН, С.-Петербург
С целью выявления хламидий в спинномозговой жидкости нами проведено исследование ликвора у 26 больных с вторичными менингитами при генерализованных формах хламидий- ной инфекции. Для этих целей нами использована электронная микроскопия методом негативного контрастирования. Группа больных была однородная. Все обследованные больные были в возрасте 20—35 лет. Стандартными методами были исключены другие нейротропные инфекции. Генерализованная форма хла- мидийной инфекции с преимущественным поражением центральной нервной системы подтверждена современными методами диагностики: ПЦР, ПИФ, НРИФ, культуральным методом.
Спинномозговую жидкость больных получали методом люмбальной пункции в первые дни заболевания сразу при поступлении больных в стационар до начала антибиотикотера- пии. Ликвор больных в объеме 5 мл замораживали при температуре -6—-10°С в бытовом холодильнике (с целью образования кристаллов льда, разрушающих клеточные структуры). После оттаивания детрит осаждали на ультрацентрифуге при ускорении 100000 g в течение 1 ч. Затем супернатант сливали. Осадок ресуспензировали в 0,05 мл остаточной жидкости и помещали на тефлоновое покрытие. На каплю сверху помещали сеточку 200 меш с нанесенной на ней угольной подложкой. Через 3—4 мин сорбции каплю жидкости отсасывали и под нее помещали каплю
%-го раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты (рН 6,7). Через 10—15 с контакта сеточку поднимали пинцетом и под углом с каплей касались фильтровальной бумагой, жидкость уходила в нее. После высушивания образцов сетки просматривали в просвечивающем электронном микроскопе JEM-100S (Jeol, Japan) при увеличении 10—50 тыс. раз. Съемку проводили на пленку ФТ41МД. В препаратах определялись характерные для цикла развития хламидий элементарные (ЭТ) и ретикулярные тельца (РТ). ЭТ (очерченные) размером от 0,1 до 0,5 мкм, РТ (неочерченные) — в виде рыхлых скоплений нитевидного, губчатого материала. Часть из них нередко была прикреплена к наружной поверхности ЭТ в виде «плаща». Обе формы существования хла- мидий определялись на разных стадиях своего развития, имели различный размер и интенсивность окрашивания. Полученные данные свидетельствуют об активном размножении и развитии хламидий в «забарьерном» пространстве. Анализируя полученные результаты, можно сделать следующие выводы: хламидии способны не только проникать через гематоэнцефалический барьер, но и активно размножаться, присутствуя в ликворе больных как в виде элементарных, так и виде ретикулярных (вегетативных) телец на разных стадиях развития.
Результаты исследования позволяют рекомендовать данный метод для более широкого использования в медицинской практике, в том числе для диагностики хламидийной нейроинфекции, а также разработки более рациональных схем антихлами- дийной терапии с учетом цикла развития возбудителя.