загрузка...
 
Эффективность полиоксидония, трекрезана и бемитила при экспериментальном бронхолегочном воспалении
Повернутись до змісту

Эффективность полиоксидония, трекрезана и бемитила при экспериментальном бронхолегочном воспалении

И.В. Зарубина, В.Н. Цыган, А.В. Болехан

Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург

Изучали влияние иммуномодуляторов полиоксидония, трекрезана и их комбинаций с антигипоксантом бемитилом на показатели иммунитета и энергетического обмена в ткани легких и клетках крови при остром бронхолегочном воспалении у крыс. Проведенное исследование обосновывает возможность метаболической защиты организма при бронхолегочном воспалении с помощью изученных иммуномодуляторов и их комбинаций с антигипоксантом. Полученные результаты могут служить предпосылкой для дальнейшего целенаправленного поиска новых иммуномодуляторов с выраженными энергостабилизирующими свойствами. (Цитокины и воспаление. 2008. Т. 7, № 1. С. 64-69.)

Ключевые слова: бронхолегочное воспаление, полиоксидоний, трекрезан, бемитил.

В формировании, течении и исходах легочного воспалительного процесса важную роль играют совокупность факторов неспецифической резистентности организма, а также метаболический и иммунный статус. Современные фармакологические средства, предназначенные для коррекции данных нарушений, обладают, как правило, парциальной активностью в отношении некоторых из них, что делает актуальным поиск более универсальных средств патогенетической терапии острых бронхолегочных заболеваний [11].

Разработка средств этиотропной терапии острых бронхолегочных заболеваний по-прежнему сохраняет приоритетное значение. Однако традиционные антибактериальные средства становятся все менее эффективными вследствие возрастающей резистентности патогенных микроорганизмов к ним и наличию у ряда препаратов иммуносупрессивных свойств, что в целом приводит к увеличению частоты затяжного течения заболевания и его хронизации. Эти обстоятельства делают актуальным поиск путей патогенетической фармакологической коррекции воспалительного процесса в легких [3].

Учитывая характер возникающих при бронхолегочных заболеваниях нарушений, связь их с

механизмами неспецифической резистентности и иммунологической защиты, метаболизмом, системой снабжения организма кислородом, в комплексной терапии целесообразно использовать средства с широким спектром фармакологической активности, способные корригировать нарушения метаболизма, иммунитета и стимулировать адаптационные возможности организма. В значительной мере этим требованиям отвечает бемитил, механизм действия которого состоит в быстро развивающейся активации синтеза РНК, ферментных и структурных белков в клетке. Бемитил обладает антигипоксантными и энергостабилизирующими свойствами, что важно в условиях развивающейся при бронхолегочных заболеваниях гипоксии [1].

Иммунопатогенетические механизмы развития острых бронхолегочных заболеваний обусловливают необходимость применения эффективных иммуномодуляторов полиоксидония и трекрезана [4, 8]. В то же время данных о применении полиок- сидония и трекрезана при остром бронхолегочном воспалении недостаточно, а сведения об их энергостабилизирующих свойствах в тканях легких и иммунокомпетентных клетках при бронхолегочном воспалении отсутствуют. Также нет данных о возможности комбинированного применения полиоксидония и трекрезана с бемитилом.

 

 

 


Подпись: 
40 - 20 -
Это послужило основанием для изучения влияния иммуномодуляторов полиоксидония, трекреза- на и их комбинации с антигипоксантом бемитилом на показатели иммунитета, энергетического обмена и структурные изменения легких при экспериментальном остром бронхолегочном воспалении у животных.

Материалы и методы

Эксперименты выполнены на 126 крысах самцах Вистар массой 200-250 г, полученных из питомника Рапполово РАМН (Ленинградская область). Исследования осуществляли в соответствии с «Руководящими методическими материалами по экспериментальному и клиническому изучению новых лекарственных средств» (1984) [10].

Все животные были разделены на группы: 1 — интактные;

— с острым бронхолегочным воспалением без терапии;

7 — с острым бронхолегочным воспалением, получавшие терапию: 3 — бемитил; 4 — полиоксидоний; 5 — трекрезан;

— бемитил в сочетании с полиоксидонием; 7 — бемитил в сочетании с трекрезаном. Все препараты вводили животным внутрибрюшинно ежедневно на протяжении пяти дней в оптимальной эффективной дозе: полиоксидоний — 0,75 мг/кг, трекрезан — 25 мг/кг, бемитил — 25 мг/кг массы тела. Контрольные группы животных получали в эквивалентном объеме физиологический раствор.

Острое бронхолегочное воспаление моделировали введением в трахею 0,1 мл скипидара [5]. Сразу после операции и далее на протяжении пяти дней животным опытной группы внутрибрюшинно вводили изучаемые фармакологические препараты. На пятые сутки эксперимента у животных забирали материал для гистологических, биохимических и иммунологических исследований. Выживаемость крыс оценивали на 7-е сутки.

Для гистологической обработки и исследования ткань легких размером 1 см2 и толщиной 0,2 см фиксировали в растворе 10%-ного нейтрального формалина, после чего проводили через автоматический универсальный аппарат для гистологической обработки и окраски тканей (АТ-4). Заливку осуществляли в парафин, срезы делали на микротоме толщиной 5 мкм. Окраску осуществляли гематоксилином — эозином.

Иммунологические исследования проводили, руководствуясь «Методическими материалами по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию иммуномодулирующего действия фармакологических средств» (1984) [6]. Состояние механизмов неспецифической защиты организма оценивали по уровню нейтрофильного фагоцитоза по отношению к микробной тест-культуре после их совместной инкубации. Степень активности кислород-независимых микробицидных систем фагоцита оценивали с помощью лизосомально-катионного теста (ЛКТ). Кислород-зависимые антиинфекционные системы фагоцитов определяли в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) [9].

Лимфоциты выделяли из цельной крови крыс в градиенте плотности фиколла — уротраста. Использовали взвесь лимфоцитов, содержащую 2 х 106 клеток в 1 мл. Осуществляли контроль их жизнеспособности. Содержание молочной и пировиноград- ной кислот определяли энзиматическим методом по E. Marbach, M. Weil (1967) [12]. Свободные аденин-нуклеотиды определяли с помощью восходящей тонкослойной хроматографии на пластинах «силуфол» и последующего сканирования на спектрофлу- ориметре MPF-4 «Hitachi» [2]. Величину энергетического заряда адениловой системы рассчитывали по формуле: АТФ + 0,5АДФ / АТФ + АДФ + АМФ.

Статистическую обработку результатов исследования проводили на персональном компьютере с использованием пакета программ Statistica for Windows стандартными методами с оценкой статистической значимости показателей и различий рассматриваемых выборок по критерию Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Введение в течение пяти дней крысам с острым бронхолегочным воспалением бемитила, полиоксидония, трекрезана и их комбинации с бемитилом увеличивало выживаемость животных с бронхолегочным воспалением (рис.).

При введении животным с бронхолегочным воспалением бемитила, полиоксидония, трекрезана и их комбинации с бемитилом изменялась микроскопическая картина ткани легких. При монотерапии любым из препаратов изменения были сходны и заключались в уменьшении утолщения межальве- олярных перегородок и их полнокровия. Просветы альвеол содержали жидкость с эозинофилами. Большинство альвеол были заполнены воздухом. Отсутствовали некротические участки ткани. В просветах альвеол отмечалось незначительное количество серозно-фибринозного экссудата. При применении комбинации бемитила с полиоксидо- нием и трекрезаном микроскопическая картина ткани легких приближалась к нормальной.

Введение крысам с острым бронхолегочным воспалением бемитила достоверно снижало в лимфоцитах крови содержание лактата на 50 % %


 

по сравнению с нелеченными животными (табл. 1). Количество пирувата в лимфоцитах крови крыс возрастало в 4,4 раза, что свидетельствует об уменьшении проявления лактатного ацидоза на фоне действия бемитила.

При этом в лимфоцитах крови содержание АТФ увеличивалось на 91 %, содержание АДФ снижалось на 32 %, АМФ — на 20 % (р < 0,05).

На фоне действия трекреза- на в лимфоцитах крови крыс с острым бронхолегочным воспалением содержание лактата уменьшалось на 40 %, АДФ — на 19 %, АМФ — на 13 % (р < 0,05).

Содержание пирувата достоверно возрастало в три раза,

АТФ — на 62 %.

Введение животным полиоксидония приводило к достоверному снижению уровня лактата на 28 %, АДФ — на 16 %, АМФ — на

%; увеличению в лимфоцитах крови содержания пирувата на

%, АТФ — на 41 %. Изменение содержания аденин-нуклеотидов сопровождалось достоверным увеличением энергетического заряда адениловой системы.

Применение бемитила, по- лиоксидония и трекрезана оказывало энергостабилизирующее действие и в ткани легких. Так, при действии бемитила уровень лактата достоверно снижался на 54 %, содержание АДФ — на 45 %, АМФ — на 29 %. При этом увеличивалось содержание пирувата в 6,5 раз, АТФ — на 129 %, энергетического заряда аденин- нуклеотидов — на 37 % (табл. 2).

На фоне действия трекрезана уровень лактата в ткани легких достоверно снижался на 49 %, АДФ — на 40 %, АМФ — на 22 % на фоне увеличения содержания пирувата в пять раз, АТФ — на 98 % (р < 0,05). При этом величина энергетического заряда аденин-нуклеотидов достоверно возрастала на 30 %.

При введении полиоксидония в легких снижалось содержание лактата на 39 %, АДФ — на 32 %, АМФ — на 22 % (р < 0,05). Наряду с этим достоверно увеличивалось содержание пирувата в четыре раза, АТФ — на 69 %, а также значение энергетического заряда аденин-нуклеотидов — на 20 %.

Таким образом, при монотерапии острого бронхолегочного воспаления метаболические нарушения в легких и лимфоцитах крови крыс в большей степени корригировал бемитил. Это обусловлено


в лимфоцитах крови и ткани легких крыс с острым бронхолегочным воспалением, чем при монотерапии.

При комбинации бемитила с трекрезаном в лимфоцитах крови содержание лактата снижалось на 61 %, АДФ — на 35 %, АМФ — на 42 % (р < 0,05). Содержание пирувата в лимфоцитах возрастало в 4,4 раза, АТФ — в два раза. Величина энергетического заряда адениловой системы достоверно возрастала по сравнению с нелеченными животными на 38 % (табл. 3).

При сочетанном применении бемитила с полиоксидонием в лимфоцитах крови крыс содержание лактата снижалось на 57 %, АДФ — на 51 % и АМФ — на 49 % (р < 0,05). Содержание пирувата достоверно увеличивалось в четыре раза, а содержание АТФ — в два раза. Значение энергетического заряда аденин-нуклеотидов увеличивалось на 42 % по сравнению с нелеченными животными (р < 0,05).

В ткани легких при сочетанном введении бемитила и трекрезана уровень лактата достоверно снижался на 66 %, АДФ — на 55 % и АМФ — на 52 % на фоне увеличения содержания пирувата в 9,6 раз и АТФ — на 177 %

(р < 0,05). Изменение содержания аденин- нуклеотидов сопровождалось увеличением на 49 % их энергетического заряда (табл. 4).

Применение бемитила в сочетании с по- лиоксидонием сопровождалось снижением в ткани легких содержания лактата на 62 %, АДФ — на 28 %, АМФ — на 18 %. При этом увеличивалось содержание пирувата в 6,6 раза, АТФ — на 146 % (р < 0,05). Эти изменения сопровождались достоверным увеличением величины энергетического заряда адениловой системы.

Таким образом, при монотерапии острого бронхолегочного воспаления у крыс изученные препараты располагались по возрастанию энергостабилизирующего действия в ряду: полиоксидоний, трекрезан, бемитил. Применение комбинаций иммуномодулятора с антигипоксантом при бронхолегочном воспалении у крыс оказывало более выраженный эффект в лимфоцитах и ткани легких, чем монотерапия. Энергостабилизирующее действие комбинации бемитила с полиоксидонием или трекрезаном были сопоставимы.

Внутрибрюшинное введение бемитила крысам с острым бронхолегочным воспалением приводило к достоверному повышению лимфокин-продуциру- ющей функции лимфоцитов в реакции торможения миграции лейкоцитов с конканавалином А (КонА) на 19 %, с фитогемагглютинином (ФГА) — на 10 % (табл. 5). Фагоцитарная активность нейтрофилов увеличивалась на 7 %, при этом фагоцитарное

%. Фагоцитарная активность увеличивалась на 12 % на фоне снижения фагоцитарного числа на 16 %, показателя завершенности фагоцитоза — на 17 %

(р < 0,05).

Наряду с этим снижались показатели спонтанного НСТ-теста на 25 %, стимулированного — на 10 %, при этом активность кисло- род-независимых микробицид- ных систем фагоцитов увеличивалась на 7 %. По сравнению с нелеченными крысами, введение животным полиоксидония приводило к достоверному повышению лимфокин-продуцирующей функции лимфоцитов в РТМЛ с КонА на 30 %, в РТМЛ с ФГА — на 22 %. Наблюдалось увеличение фагоцитарной активности на 14 % при снижении фагоцитарного числа на

% и показателя завершенности фагоцитоза на 22 % (р < 0,05).

Активность кислород-независимых микро- бицидных систем фагоцитов увеличивалась на 9 % (р < 0,05). Показатели кислород-зави- симых антиинфекционных систем лимфоцитов, характеризующие степень активации гексозомонофосфатного шунта и связанное с этим образование свободных радикалов, в спонтанном НСТ-тесте снижались на 27 %, в стимулированном — на 13 % (р < 0,05).

Несмотря на то, что по иммуномодулирующим свойствам бемитил уступал полиоксидо- нию и трекрезану, его применение при острых бронхолегочных заболеваниях весьма перспективно в силу его выраженных энергостабилизирующих свойств. Иммуномодулирующее действие бемитила в настоящее время используется при часто повторяющихся острых респираторных вирусных инфекциях, рецидивирующей роже, затяжных пиодермиях, при гепатите А [7]. При этих заболеваниях препарат вызывал заметный лечебный и/или профилактический противореци- дивный эффект путем активации специфических и неспецифических иммунных реакций.

Введение крысам с острым бронхолегочным воспалением комбинации бемитила и трекрезана сопровождалось повышением показателей РТМЛ с КонА на 37 %, с ФГА — на 2 6% (табл. 6). Фагоцитарная активность возрастала на 17 % на фоне снижения фагоцитарного числа на 29 %, показателя завершенности фагоцитоза — на 25 % (р < 0,05). Снижались показатели спонтанного НСТ-теста на 40 %, стимулированного — на 19 %, при этом увеличивалась активность лизосомально-катионного теста на 12 %.


данных, при монотерапии исследуемые препараты можно расположить в ряду по возрастанию их иммунотропных свойств: бемитил, трекрезан, полиоксидоний. Применение комбинированной терапии сопровождалось более выраженным иммуномодулирующим действием. При этом эффекты комбинации бемитила с полиоксидонием или трекрезаном были сопоставимы.

Таким образом, результаты проведенного исследования обосновывают новые возможности метаболической защиты организма при бронхолегочных воспалениях с помощью полиоксидония, трекрезана и их комбинации с бемитилом и могут служить предпосылкой для дальнейшего целенаправленного поиска новых иммуномодуляторов с выраженными энергостабилизирующими свойствами. При монотерапии препараты располагаются в ряду по возрастанию их энергостабилизирующего действия: полиоксидоний, трекрезан, бемитил, а по возрастанию иммунотропных свойств: бемитил, трекрезан, полиоксидоний. Комбинации трекре- зана или полиоксидония с бемитилом наиболее предпочтительны в лечении бронхолегочных заболеваний как средства выбора для коррекции проявлений вторичного иммунодефицита и нарушений энергетического обмена. Оптимизация указанных процессов обеспечивает полноценность лечения при бронхолегочном воспалении.

 

 

 

ЛИТЕРАТУРА:

 

 

 

Зарубина И.В., Шабанов П.Д. Молекулярная фармакология антигипоксан- тов. — СПб.: Издательство Н-Л, 2004. — 368 с.

Зарубина И.В., Криворучко Б.И. Разделение и прямое количественное определение адениннуклеотидов на силуфоле // Укр. биохим. ж. — 1982. — Т. 54, № 4. — С. 437-439.

Клочко Р.В. Клинико-фармакологическое обоснование применения противовоспалительной терапии при внебольничной пневмонии: автореф. дис. ... канд. мед. наук. — СПб., 2006.

Колесникова О.П., Кудаева О.Т., Сухенко Т.Г. и др. Трекрезан как модулятор гемо- и иммунопоэза // Докл. акад. наук. — 2003. — Т. 391, № 3. — С. 306-308.

Кулик А.М. Регуляция дыхания и легочного кровообращения при экспериментальной пневмонии // Бюлл. эксп. биол. мед. — 1986. — № 2. — С. 144-146.

Методические материалы по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию иммуномодулирующего действия фармакологических средств. — М., 1984. — 37 с.

Оковитый С.В., Безбородкина Н.Н., Зарубина И.В. и др. Исследование гепато-протекторного эффекта бемитила на модели длительного токсического поражения печени // Эксп. клин. фармакол. — 2006. — Т. 69, № 2. — С. 52-57.

Пинегин Б.В., Некрасов А.В., Хаитов Р.М. Иммуномодулятор полиоксидоний: механизмы действия и аспекты клинического применения // Цитокины и воспаление. — 2004. — Т. 3, № 3. — С. 41-47.

Потемкина Е.Е., Позднякова Р.З., Манукян Л.М. Пособие по лабораторной клинической иммунологии. — М.: Изд-во РУДН, 2003. — 287 с.

Руководящие методические материалы по экспериментальному и клиническому изучению новых лекарственных средств. — М.: [Б.и.], 1984. — 192 с.

Andes D. Pharmacokinetic and pharmacodynamic properties of antimicrobials in the therapy of respiratory tract infections // Curr. Opin. Infect. Dis. — 2001. — Vol. 14, № 2. — P. 165-172.

Marbach E.P., Weil M.H. Rapid enzymatic measurement of blood lactate and pyruvate. Use and significance of metaphosphoric acid as a common precipitant // Clin. Chem. — 1967. — Vol. 13, № 4. — P. 314-325.

 

 

 

The effectiveness of polyoxidonium, trekrezan and bemitil in experimental bronchopulmonary inflammation

V. Zarubina, V.N. Tsygan, A.V. Bolekhan S.M. Kirov Military Medical Academy, St. Petersburg

The influence of immuno-modulating agents polyoxidonium, trekrezan and their combinations with an- tihypoxic compound bemitil upon the immune indices and parameters of energy metabolism in the lung tissue and blood cells in acute bronchopulmonary inflammation in rats was studied. Results of the study give a ground for metabolic defense in bronchopulmonary inflammation using studied immuno-modulat- ing agents and their combinations with antihypoxic compound bemitil. The results obtained may serve as a stimulus for further research for new immuno-modulators with prominent energostabilizing properties. (Cytokines and Inflammation. 2008. Vol. 7, № 1. P. 64-69.)

Key words: bronchopulmonary inflammation, polyoxidonium, trekrezan, bemitil.


 

ЗАО «БиоХимМак»

эксклюзивный дистрибьютор в России и СНГ компаний «Bender MedSystems» и «BCM Diagnostics»

ЗАО «БиоХимМак» предлагает широкий спектр ИФА тест-систем для количественного определения цитокинов, факторов роста, молекул адгезии и молекул, связанных с апоптозом, в сыворотке, плазме, супернатанте клеточных культур и других биологических жидкостях человека, крысы, мыши, а также различные рекомбинантные пептиды, антитела компаний Bender Medsystems (Австрия) и BCM Diadnostics (США).

Принцип метода

Данные тесты основаны на твердофазном, неконкурентном методе иммуноферментного анализа и разработаны для определения цитокинов и молекул межклеточной адгезии непосредственно в биологических жидкостях человеческого организма (сыворотка, ЭДТА- и гепариновая плазма, супернатант культуры клеток и др.). Большинство тест-систем включают контроли качества и нормы (значения, полученные для здоровой популяции людей).

 

 

 

Сигналы трансдукции p38MAPK, JNK, JAK1, JAK2, Akt, APP, ATF-2, FAK, c-Kit, LAT и др.

Новая линия продукции компании «Bender Medsystems» связана с разработкой тест-систем для одновременного определения цитокинов, молекул адгезии в сыворотке и супернатанте клеточных культур с помощью проточного цитофлуориметра. Возможна различная комбинация цитокинов.

Данные, полученные на проточном цитофлуориметре, анализируются с помощью программного обеспечения FlowCytomix, входящего в состав набора.

 

 

 




загрузка...