загрузка...
 
АННОТАЦИЯ
Повернутись до змісту

АННОТАЦИЯ

Иммунологические последствия индукции антител к IFNy и IL-4 у мышей

С.В. Шевелев, А.Н. Митин, М.Ф. Никонова, А.А. Бабахин, А.А. Ярилин

Институт иммунологии ФМБА РФ, г. Москва

Оценивали различные формы иммунного ответа у мышей, в сыворотке которых присутствуют антитела к ключевым цитокинам Th1- и ^2-клеток (IFNy и IL-4), индуцированные иммунизацией пептидными фрагментами этих цитокинов. Обнаружено усиление спонтанной и митоген-индуцированной пролиферации лимфоцитов селезенки мышей, иммунизированных против IFNy. Способность CD4+ Т-клеток иммунизированных мышей дифференцироваться в Th1- и ^2-клетки in vitro не изменяется, но при введении в культуры спленоцитов аутологичных сывороток, содержащих антитела к IFNy или IL-4, подавляется дифференцировка Т-хелперов, продуцирующих соответствующие цитокины. Накопление антител к IFNy приводит к подавлению как клеточного, так и гуморального иммунного ответа на эритроциты барана, но не влияет на образование реагинов при иммунизации овальбу- мином. Накопление антител к IL-4 подавляет гуморальный, но не клеточный ответ на эритроциты барана. Ингибирующее действие антител к IL-4 на аллергический ответ выявляется при раздельном анализе уровня реагинов у мышей с высоким и низким содержании антител к IL-4. (Цитокины и воспаление. 2008. Т.7, № 3, с. 3-8)

Ключевые слова: цитокины, интерферон у, интерлейкин-4, антитела, иммунный ответ, дифференцировка.

Общеизвестно, что поляризация ТЫ/^2-ба- ланса в сторону одного из типов хелперных Т-кле- ток благоприятствует формированию иммунопатологии: преобладание ТЫ-клеток способствует развитию клеточных аутоиммунных процессов, ^2-клеток — аллергии [17]. На этом основаны методы антицитокиновой иммунотерапии, состоящие в избирательном подавлении того или другого Т-хелперного звена [7, 8]. Чаще всего с этой целью используют введение гуманизированных моноклональных антител к ключевым цитокинам №1- и №2-клеток или к цитокинам, ответственным за их дифференцировку [11, 18]. Хотя клиническая эффективность такого подхода пока незначительна [4, 5, 14], поиски в данном направлении продолжаются. В качестве альтернативы введению готовых экзогенных антител может быть предложен подход, основанный на индукции эндогенных антител.

Существует и другой аспект изучения эффектов эндогенных антител к цитокинам. Описаны случаи спонтанного и вызванного цитокинотерапией образования аутоантител к цитокинам у людей [16, 19].

Биологическое действие таких антител практически не изучено. Создание экспериментальной модели животных — носителей эндогенных антител к ци- токинам — позволило бы прояснить вопрос о биологической активности индуцированных и спонтанно возникающих антител к цитокинам и их влиянии на функционирование иммунной системы.

В данной статье представлен материал по оценке различных проявлений иммунного ответа у мышей, в сыворотке которых присутствуют антитела к №N7 или 1Ъ-4, индуцированные иммунизацией пептидными фрагментами этих цитокинов.

Материалы и методы

Работа выполнена на мышах линии BALB/c и гибридах (СВАхС57В1/6^1 массой 20-22 г, а также крысах Ш1^аг, полученных из питомника РАМН «Столбовая» и содержавшихся на обычном пищевом рационе.

Методы расчета иммунодоминантных эпитопов и синтеза соответствующих пептидов описаны ранее [1, 11, 12].

Мышей иммунизировали конъюгатами фрагмента 99-113 из ^у и 21-40 из К-4 внутримышечно 3 раза с интервалом в 1 месяц; первую иммунизацию осуществляли в полном, две последующие — в неполном адъюванте Фрейнда. Контрольным мышам в соответствующие сроки вводили физиологический раствор (контроль-1) или адъювант (контроль-2). Антитела к пептидным фрагментам, а также целым молекулам цитокинов определяли иммуноферментным методом с оценкой оптической плотности (ОП) при разведении сывороток 1:100 и титра антител (последнее разведение, при котором ОП превышала 0,25).

Пролиферацию клеток оценивали по разведению флюоресцентной метки CFSE [5(6)-carboxyfluoresceindiacetate N-succinimidyL ester]. Для мечения флюорохромом мононуклеары инкубировали с 5 мкМ CFSE («Fluka») 10 мин при 37° и 5 % СО2, трижды отмывали охлажденной (4 °С) средой RPMI 1640, содержащей 10 % сыворотки эмбрионов телят (СЭТ, «Sigma», USA), и доводили до нужной концентрации [15]. Мононуклеары, меченные CFSE, культивировали в концентрации 2х106/мл в 96-луноч- ных плоскодонных планшетах («Nunc», Дания) в присутствии конканавалина А (КонА, 5 мкг/мл) или без митогена в течение 3 суток при 37°С и 5 % СО2. С помощью проточной цитометрии на лазерном цитофлюориметре FACSCalibur («Becton Dickinson», USA) определяли процент клеток, прошедших, по меньшей мере, одно деление (т. е. содержащие, как минимум, в 2 раза меньше флуорохрома, чем исходно меченые клетки).

Для оценки продукции цитокинов [13] клетки селезенки мышей (после лизиса эритроцитов и отмывания клеток) стимулировали in vitro форбол-12-миристат-13-ацетатом (ФМА) («Sigma», USA, 10 нг/мл) и иономицином («Sigma», 2 мкМ) в присутствии ингибитора секреторного процесса брефелдина («Becton Dickinson», USA, 1 мкг/мл) и культивировали в концентрации 1 х 105 клеток на лунку в течение 18 ч при 37 °С и 5 % CO2 в RPMI 1640 c добавлением 10 % СЭТ и 2 мМ L-глютамина («Sigma»). После завершения культивирования клетки отмывали, фиксировали 4%-ным параформальдегидом («Sigma») и пермеабилизировали в течение 20 минут при комнатной температуре в 0,1% растворе сапонина («Sigma») на забуференном физиологическом растворе, рН 7,2. Клетки окрашивали в течение 20 минут с помощью моноклональных антител к IFNy или IL-4, меченых флюоресце- инизотиоцианатом (ФИТЦ) и моноклональных антител к CD3, меченых фикоэритрином (ФЭ) («Caltag»). Отмытые клетки анализировали на проточном цитофлуориметре FACSCalibur.

Для индукции гуморального иммунного ответа мышей иммунизировали внутрибрюшинно эритроцитами барана (108). На 5-е сутки после иммунизации в селезенке мышей методом бляшкообразования определяли число клеток, секретирующих антитела [6]. Рассчитывали число антителообразующих клеток (АОК) на селезенку и на 1 млн кариоцитов.

Клеточный иммунный ответ оценивали по выраженности гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана. Для ее индукции мышей иммунизировали эритроцитами барана внутрибрюшинно в дозе 5х108. Через 6 суток им в стопу вводили эритроциты (108 в объеме 30 мкл); в контрлатеральную стопу вводили физиологический раствор в том же объеме. Через 24 ч измеряли толщину обеих стоп с помощью штангенциркуля. Рассчитывали индекс ГЗТ — (О-К)/К, где О — толщина опытной, К — контрольной лапки.

Аллергический ответ мышей индуцировали иммунизацией куриным овальбумином («Sigma») в алюминиевых квасцах (50 мкг белка в 2,5 мг квасцов на мышь) [9]. Иммунизацию осуществляли 3 раза с интервалом 2 недели. Через 14 суток после последней инъекции у мышей брали кровь и определяли титр реагинов в реакции пассивной кожной анафилаксии (РПКА). Для этого 30 мкл сыворотки крови в серийных разведениях вводили внутрикожно в кожу живота крыс. В качестве контроля вводили сыворотку неиммунизированных мышей. Через 24 ч крысам вводили внутривенно 250 мкг овальбумина в 0,5 % растворе синьки Эванса. Через 30 минут крыс забивали под эфирным наркозом и регистрировали наличие пятна, окрашенного синькой, на внутренней поверхности кожи (в контроле окрашенное пятно не формируется). Титр РПКА оценивали как логарифм последнего разведения сыворотки, вызвавшего развитие реакции.

Статистическую обработку результатов проводили методами вариационной статистики (с применением программы Microsoft Excel) с использованием критерия t Стьюдента. Кроме того, осуществляли корреляционный и регрессионный анализ.

Результаты и обсуждение

Иммунизация мышей линии BALB/c пептидным фрагментом 99-113 из IFNy привела к образованию антител, реагирующих с пептидом (с ОП > 0,25) при разведении сыворотки 1:100), у всех животных, причем у 10 из 12 мышей антитела взаимодействовали с целой молекулой IFNy. Иммунизация пептидом 21-40 из IL-4 также вызвала образование антител у всех мышей, но с меньшим уровнем связывающей способности (по данным ИФА), однако с целой молекулой IL-4 реагировали сыворотки лишь половины иммунизированных животных. Подробнее эти данные отражены в сопутствующей статье [2].

Через 2 недели после окончания курса иммунизации мышей и в опытных группах (введение пептидов), и в контроле-2 с введением адъювантов без пептида регистрировали спленомегалию. При культивировании спленоцитов мышей контроля-2 обнаружено 4,4-кратное усиление спонтанной пролиферации клеток по сравнению с мышами, которым вводили физиологический раствор (контроль-1). У мышей, иммунизированных пептидом из IL-4, спонтанная пролиферация спленоцитов выражена в такой же степени, а у мышей, иммунизированных пептидом из IFNy, она усилена дополнительно в 2 раза (в 8,2 раза по сравнению с контролем-1). При культивировании клеток селезенки с КонА индекс стимуляции составлял в контроле-1 — 7,6, в контроле-2 — 1,3, при иммунизации против IFNy-1,4, при иммунизации против IL-4 — 2,0. Абсолютные величины пролиферации клеток под влиянием КонА в опытах с иммунизацией против IFNy и IL-4 были соответственно в 11,4 и 9,7 раза выше, чем в контроле-1, и в 1,4 и 2,0 раза выше, чем в контроле-2 (рис. 1). Таким образом, введение полного, а затем неполного адъюванта Фрейнда вызывает резкое усиление пролиферации лимфоцитов селезенки с утратой способности до
полнительно реагировать на митоген. На этом фоне эффект индукции антител к цитокинам состоит в частичном восстановлении ответа на митоген, а эффект иммунизации против №N7, кроме того, — в еще большем усилении спонтанной пролиферации (т. е. антитела к №N7 усиливают абсолютные уровни как спонтанной, так и индуцированной пролиферации спленоцитов).

В период, когда вес селезенок в основном нормализовался (через месяц после иммунизации), у мышей групп опыта и контроля-2 извлекали селезенку и цитофлюориметрически оценивали способность Т-клеток продуцировать №N7 и ІЬ-4 в ответ на стимуляцию ФМА и иономицином. Процент Т-клеток, продуцирующих №N7 и ІЬ-4, а также их соотношение были одинаковым у опытных и контрольных мышей. Поскольку в целом организме Т-клетки испытывают воздействие антител к цитокинам, процент цитокин-продуци- рующих клеток определялся также в присутствии сыворотки. Введение аутологичных сывороток в культуры спленоцитов иммунизированных мышей приводило к снижению процента клеток, образующих соответствующий цитокин: сыворотки, содержащие антитела к №N7, снижали процент ІЕ^-продуцентов, а сыворотки, содержащие антитела к ІЬ-4, — процент ІЬ-4-продуцентов (рис. 2). Процент клеток, вырабатывающих оппозитный цитокин, при этом не изменялся (данные не представлены). Введение аутологичных сывороток в культуры спленоцитов контрольных мышей не влияло на процент Т-клеток, образующих оба ци- токина. Таким образом, эффективная иммунизация пептидными фрагментами цитокинов, сама по себе, не влияет на способность Т-клеток вырабатывать цитокины, но образующиеся при этом антитела подавляют образование соответствующего (но не альтернативного) цитокина.

Оценивали влияние преиммунизации против цитокинов на гуморальный и клеточный иммунный ответ мышей линии БЛЬБ/с на один и тот же модельный антиген — эритроциты барана. Результаты отражены на рис. 3. Иммунизация против №N7 снижала выраженность ГЗТ по сравнению с «адъювантным» контролем (в котором, в свою очередь, ответ были ниже, чем у интактных мышей), тогда как при иммунизации против ІЬ-4 уровень клеточного ответа не изменялся. При оценке гуморального ответа в реакции бляшкооб- разования его снижение по сравнению с контролем зарегистрировано в обеих опытных группах. При оценке эффекта преиммунизации против ІЬ-4 значимое подавление гуморального иммунного ответа (в 2 раза) наблюдалось лишь у тех мышей, у которых иммунизация вызывала образование антител, реагирующих с целой молекулой ІЬ-4. У мышей с неэффективной иммунизацией показатели не отличались от таковых в контроле. Таким образом,

Процент пролиферирующих клеток 35 -I

30 - 25 - 20 - 15 - 10 - 5 - 0 -

ІРМу   II         і

і і спленоциты мышей из группы контроля

то же в присутствии аутологичнои сыворотки

спленоциты мышей из группы опыта 8 отсутствие аутологичной сыворотки

I I то же в присутствии аутологичной сыворотки

Представлены проценты Т-клеток, продуцирующих ^N7 и 11.-4, в суспензии активированных спленоцитов.

Усредненные данные трех экспериментов.


иммунизация против обоих цитокинов ослабляла гуморальный иммунный ответ на эритроциты барана при условии индукции антител, реагирующих с целой молекулой цитокина; клеточный иммунный ответ на этот антиген подавляла только иммунизация против №N7.

После второго курса иммунизации пептидом 21-40 мышей сенсибилизировали куриным оваль- бумином. Титры реагинов (по данным РПКА) в группе мышей, иммунизированных против №N7 были несколько ниже, чем в группе контроля, но различия не были статистически значимы; они не коррелировали с активностью антител к №N7 При сравнении уровней реагинов между группой мышей, иммунизированных пептидом 21-40 из 1Ъ-4, и контрольными мышами различий также не было выявлено. Более информативным оказался корреляционный анализ (рис. 4), которому были раздельно подвергнуты данные, полученные на мышах с высоким (ОП > 1,0) и более низким (ОП < 1,0) уровнями ответа на пептид из 1Ъ-4 (соответственно, подгруппы 1 и 2). В подгруппе 1

Рис. 4. Обратная корреляция содержания антител к пептиду из К-4 в сыворотке мышей и их способности вырабатывать реагины при иммунизации овальбумином

По оси абсцисс — оптическая плотность по данным иммуноферментного анализа (разведение сывороток 1:100, в качестве антигена использован пептид 21-40); по оси ординат — титр реагинов в РПКА. Вертикальная штриховая линия разделяет области высокого и низкого ответа на пептид из И-4 (ОП > 1 и < 1,0). Кружками обозначены значения, соответствующие высокому (подгруппа 1), крестиками — низкому (подгруппа 2) ответу на пептид из И-4.

Крестик, обведенный кружком — данные для единственной мыши с низким ответом на пептид из ИЛ-4, которые соответствуют первой «корреляционной группе» и поэтому отнесены к подгруппе 1.

Цифры на графике означают номера подгрупп. Линии регрессии описываются уравнениями — для подгруппы 1: у = 9,44 — 2,69 x, для подгруппы 2: у = 5,52 — 2,95 x.

выявлена высокозначимая отрицательная корреляция между ОП для антител к пептиду из 1Ъ-4 и логарифмом титра реагинов, специфичных к овальбумину: г = - 0,97 (р < 0,001); для подгруппы 2 отрицательная корреляция находилась на границе достоверности: г = - 0,54 (р = 0,05). Линии регрессии, описывающие взаимосвязи исследованных показателей в подгруппах 1 и 2, характеризуются сходным наклоном (коэффициенты «Ь» составили соответственно - 2,69 и - 2,95), но резко различаются положением на оси абсцисс: (коэффициенты «а» равны 9,44 и 5,52). Величины «а» соответствуют уровню реагинового ответа в отсутствие антител к 1Ъ-4, а коэффициент «Ь» (наклон линии регрессии) служит мерой влияния, которое оказывают антитела к 1Ъ-4 на уровень реагинового ответа. Таким образом, накопление антител к 1Ъ-4 ингибирует образование реагинов в ответ на иммунизацию овальбумином, однако этот эффект выявляется лишь при раздельном анализе данных, полученных на мышах с различным уровнем антител к 1Ъ-4. Параллельная оценка IgG-антител к овальбумину


не выявила каких-либо связей между активностью и уровнем антицитокиновых антител.

Итак, индукция антител, способных связывать целую молекулу цитокина, оказывает разнообразное действие на функциональную активность иммунной системы. Эффекты индуцированных антител могут реализоваться, прежде всего, путем связывания секретируемых цитокинов — при условии проникновения антител в ткани, прежде всего, в тимус-зависимые зоны вторичных лимфоидных органов. Изучение биораспределения моноклональных антител, используемых в иммунотерапии, свидетельствует о том, что, хотя ограничения в проникновении антител в лимфоидные органы существуют, тем не менее, антитела способны проникать в ткани, в частности, в очаги воспаления [3, 10].

Нельзя исключить также влияние индуцированных антител на рецепторы Т-клеток-продуцентов цитокинов, о чем свидетельствует их влияние на выработку цитокинов Т-клетками in vitro. Присутствие антител к цитокинам в организме не вызывает стойких изменений дифференциров- ки Т-хелперов: перенесенные в культуру CD4 + Т-клетки дифференцировались в продуценты IFNy и IL-4 в той же пропорции, как клетки контрольных животных. Однако непосредственный контакт с антителами, внесенными в культуру в составе аутологичной сыворотки, подавляет синтез соответствующих цитокинов. Очевидно, аналогичный процесс реализуется во вторичных лимфоидных органах, в которые попадают антицитокиновые антитела.

Следствие изменений дифференцировки Т-хел- перов in vivo и/или связывания продуцируемых ими цитокинов — наблюдавшиеся изменения интенсивности различных форм иммунного ответа. Накопление антител к IFNy подавляет ГЗТ, тогда как накопление антител к IL-4 не влияет на эту форму клеточного иммунного ответа. Этот результат является вполне ожидаемым, поскольку известно участие в его осуществлении Thl-клеток и IFNy. Ожидаемым является и усиление спонтанной и КонА-индуцированной пролиферации спленоцитов, полученных от мышей, иммунизированных против IFNy, поскольку IFNy обладает антипролиферативным действием.

Накопление антител к обоим изучавшимся ци- токинам подавляло гуморальный иммунный ответ, оценивавшийся в прямом тесте бляшкообразо- вания. Контроль гуморального ответа со стороны Т-хелперов проявляется преимущественно в реализации ростового и дифференцировочного эффектов по отношению к В-лимфоцитам, а также в обеспечении переключения изотипов антител. Эффект антител к IL-4 в данной ситуации понятен хотя бы потому, что IL-4 является основным фактором роста В-клеток и ответственен за переключение синтеза антител на главный изотип — IgGl. Труднее истолковать аналогичное действие антител к IFNy. По-видимому, Thl-клетки могут участвовать в индукции антителообразования путем контактного взаимодействия с В-лимфоцитами (известно, что IFNy у мышей ответственен за переключение синтеза антител на изотип IgG2a).

Присутствие в организме антител к IFNy не препятствовало развитию аллергического ответа на овальбумин и не усиливало его. У мышей с антителами к IL-4 были зарегистрированы определенные изменения, которые трактованы нами как проявление ингибирующего действия на образование реагинов. Влияние антител регистрировали только при раздельной оценке эффекта у мышей с высокими и низкими титрами анти-^-4-анти- тел и сильнее проявлялось при высоком титре анти-^-4-антител; оно не распространялось на IgG-антитела к овальбумину. Результаты анализа заставляют предположить, что две выделенные нами подгруппы животных существенно различаются по способности к ответу как на пептид из IL-4, так и на овальбумин.

Возвращаясь к предпосылкам данного исследования, сформулированным во вступлении, можно сделать ряд заключений. Из данных, представленных в работе, следует, что антицитокиновые антитела, появляющиеся в сыворотке людей спонтанно или в результате предварительного введения ци- токина, могут быть небезразличны для иммунной системы. Они смещают баланс Thl- и №2-клеток за счет подавления дифференцировки клеток, продуцирующих соответствующий цитокин, и оказывают влияние на уровень гуморального и клеточного иммунного ответа. С другой стороны, результаты работы могут быть рассмотрены в контексте экспериментальной антицитокиновой терапии. Поиск путей антицитокиновой терапии как аутоиммунных, так и аллергических заболеваний продолжается. Результаты нашей работы свидетельствуют о принципиальной возможности использования иммунизации пептидными фрагментами IL-4 для ослабления аллергического ответа без существенных изменений клеточного иммунного ответа и выработки IgG-антител на растворимый белковый антиген. Аналогичный подход к индукции антител против IFNy позволяет ослабить гиперчувствительность замедленного типа, т. е. клеточную форму аллергии. Данный подход позволяет избежать введения в организм экзогенных антител, дорогостоящих и имеющих ограниченный срок пребывания в циркуляции. Вместо этого в организм вводятся пептиды, не оказывающие побочных эффектов. При этом достаточно высокий уровень антител сохраняется в организме мышей в течение нескольких месяцев, и процесс антителообразования может быть поддержан реиммунизацией. Однако мы осознаем, что
наша работа в прикладном аспекте значима лишь как этап на пути поиска эффективных методов антицитокиновой терапии.

Выводы

Накопление в сыворотке мышей антител к ^N7 усиливает спонтанную и КонА-индуцированную пролиферацию спленоцитов сверхвысокого фона, вызванного введением адъюванта Фрейнда.

Присутствие в крови мышей антител, способных связывать молекулы №N7 и 1Ъ-4, не влияет на направление дифференцировки Т-хелперов, однако введение аутологичных сывороток, содержащих антитела к цитокинам, в культуру спленоцитов вызывает подавление дифференцировки Т-клеток, секретирующих соответствующий цитокин.

Наличие в циркуляции у мышей антител к №N7 подавляет как клеточный, так и гуморальный ответ на эритроциты барана, наличие антител к 1Ъ-4 — только гуморальный иммунный ответ.

При раздельной статистической обработке данных для мышей с высоким и более низким титром антител к 1Ъ-4 обнаружена отрицательная корреляция связывающей способности антител к 1Ъ-4 в ИФА с титром аллергических антител к овальбумину в РПГА. Корреляция титра реагинов со связывающей активностью антител к №N7 отсутствует.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант 05-04-49867-а).

 

 

ЛИТЕРАТУРА

 

 

 

Шевелев С.В., Харченко Т.Ю., Митин А.Н. и др. Индукция антител к ИФН-у путем иммунизации пептидом, воспроизводящим иммунодоминантный эпитоп IFN-y, влияние на дифференцировку Th1- и ТЬ2-клеток // Иммунология. — 2006. — Т. 27, № 5. — С. 288-292.

Шевелев С.В., Митин А.Н., Андреев С.М., Ярилин А.А. Индукция антител к IFN y и IL-4 у мышей иммунизацией пептидами, воспроизводящими иммунодоминан- тные В-эпитопы // Цитокины и воспаление. — 2008. — Т. 7, № 2. — С. 23-27.

Barrera P., Oyen W.J., Boerman O.C., van Riel P.L. Scintigraphic detection of tumour necrosis factor in patients with rheumatoid arthritis // Ann. Rheum. Dis. — 2003. — Vol. 62, № 9. — 825-828.

Blease K., Jakubzick C.,Westwick J. et al. Therapeutic effect of IL-13 immu- noneutralization during chronic experimental fungal asthma // J. Immunol. —

— Vol. 166, № 8. — P. 5219-5224.

Borish L.C., Nelson H.S., Corren J. et al. Efficacy of soluble IL-4 receptor for the treatment of adults with asthma // J. Allergy Clin. Immunol. — 2001. — Vol. 107, № 6. — P. 963-970.

Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibody- forming cells // Nature. — 1965. — Vol. 207, Vol. 5001. — P. 1106-1107.

Dinarello C.A. Anti-cytokine strategies // Eur Cytokine Netw. — 1992. — Vol. 3, № 1. — P. 7-17.

Feldmann M., Miotla J., Paleolog E. et al. () Future prospects for anti-cytokine treatment // . Ann. Rheum. Dis. — 2000. — Vol. 59, suppl. 1. — P. 119-122.

Fox D.A., Chiorazzi N., Katz D.H. Hapten-specific IgE antibody response in mice. V. Differential resistance of IgE and IgG B lymphocytes to X-irradiation // J. Immunol. — 1976. — Vol. 117, № 5 pt. 1. — P. 1622-1628.

Genberg H., Hansson A., Wernerson A., Wennberg L., Tyden G. Pharmacodynamics of rituximab in kidney allotransplantation // Am. J. Transplant. — 2006. — Vol. 6, № 10. — P. 2418-2428.

Holgate S.T. Cytokine and anti-cytokine therapy for the treatment of asthma and allergic disease // Cytokine. — 2004. — Vol. 28, № 4-5. — P. 152-157.

Hopp T.P., Woods K.R. A computer program for predicting protein antigenic determinants // Mol. Immunol. — 1983. — Vol. 20, № 4. — P. 483-489.

Jung T., Schauer U., Heusser C.et al. Detection of intercellular citokines by flow cytometry // J. Immunol. Meth. — 1993. — Vol. 159, № 1-2. — P. 197-207.

Leckie M.J., ten Brincke A., Khan J. et al. Effects of an IL-5 blocking monoclonal antibody on eosinophils, airway hyperresponsiveness, and the late asthmatic response // Lancet. — 2000. — Vol. 356, № 9248. — P. 2144-2148.

Lyons A.B., Parish C.R. Determination of lymphocyte division by flow cytometry // J. Immunol. Meth. — 1994. — Vol. 171, № 1. — P. 131-137.

Revoltella R.P. Natural and therapeutically-induced antibodies to cytokines // Biotherapy. — 1998. -Vol. 10, № 4. — P. 321-331.

Romagnani S. Human Th1 and Th2 subsets: regulation of differentiation and role in protection and immunopathology // Int. Arch. Allergy Immunol. — 1992. — Vol. 98, № 4. — P. 279-285.

Simon H.U. Cytokine and anti-cytokine therapy for asthma // Curr. Allergy Asthma Rep. — 2006. — Vol. 6, № 2. — P. 117-121.

van der Meide P.H., Schellekens H. Anti-cytokine autoantibodies: epiphenomenon or critical modulators of cytokine action // Biotherapy. — 1997. — Vol. 10, № 1. — P. 39-48.

 

 

 

Immunological consequences of anti-IFNY and anti-IL-4 antibodies induction in mice

5.1/. Shevelev, A.N. Mitin, M.F. Nikonova, A.A. Babahin, A.A. Yarilin Institute of Immunology of the Federal Medical-Biological Agency, Moscow

Certain forms of immune response were evaluated in mice having serum antibodies against key Th1 and Th2 cytokines IFNy and IL-4, induced by peptide immunization. The increase of spontaneous and mitogen- induced proliferation of splenic lymphocytes was found in mice immunized against IFNy. The ability of CD4+ T cells to differentiate into Th1 and Th2 did not change, but the autologous serum containing anti- IFNy or anti-IL-4 antibodies added to splenocyte culture suppressed differentiation of T helpers producing corresponding cytokines. Uptake of anti- IFNy antibodies leads to the suppression of both cellular and humoral immune response to ram erythrocytes, but does not influence anaphylactic antibody synthesis after immunization with ovalbumin. Uptake of anti-IL-4 antibodies suppresses humoral, but not cellular response to ram erythrocytes. Inhibitory influence of anti-IL-4 antibodies upon allergic response becomes clear when the anaphylactic antibodies are analyzed separately in mice with the high and the low anti-IL-4 antibodies levels (Cytokines and Inflammation. 2008. Vol. 7, № 3. P. 3-8.).

Key words: cytokines, interferon y, interleukin 4, antibodies, immune response, differentiation.




загрузка...