загрузка...
 
Динамика гуморальных факторов естественной резистентности у больных хроническими обструктивными болезнями легких под влиянием иммунокоррекции Т.А. Кузнецова, М.Ф. Киняйкин, Е.Д. Буякова, Л.Г. Семеновых, Г.И. Суханова, Н.Н. Беседнова, Л.М. Эпштейн
Повернутись до змісту

Динамика гуморальных факторов естественной резистентности у больных хроническими обструктивными болезнями легких под влиянием иммунокоррекции Т.А. Кузнецова, М.Ф. Киняйкин, Е.Д. Буякова, Л.Г. Семеновых, Г.И. Суханова, Н.Н. Беседнова, Л.М. Эпштейн

 Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, г. Владивосток;Владивостокский государственный медицинский университет;Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр, г.  ВладивостокРабота посвящена изучению динамики гуморальных факторов иммунитета (спектра про- и противовоспалительных цитокинов, компонентов комплемента и уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) под влиянием иммунокорректора полипептидной природы тинростима, включенного в комплекс лечения больных хроническими обструктивными болезнями легких (ХОБЛ). Концентрацию цитокинов и количественное содержание С3-, С4- и С5-компонентов комплемента в сыворотке крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа, уровень ЦИК — путем селективной преципитации комплексов антиген-антитело с фотометрическим определением плотности преципитата. Выявлено повышенное содержание уровня про- (TNF?, IL-1?, IL-6) и противовоспалительных (IL-4, IL-10) цитокинов и ЦИК и сниженное содержание уровня IFN? и компонентов комплемента в сыворотке крови больных по сравнению с группой здоровых лиц. Применение тинростима в составе комплексной терапии больных ХОБЛ оказывает корригирующий эффект на состояние этих систем, что выражается в снижении сывороточного уровня TNF?, IL-6, IL-10, уровня ЦИК и повышении содержания исследуемых компонентов комплемента при отсутствии положительной динамики цитокинов в результате базисного лечения. Полученные результаты позволяют рекомендовать включение тинростима в лечебный комплекс при ХОБЛ и других заболеваниях с целью повышения эффективности патогенетического лечения. (Цитокины и воспаление. 2007. Т. 6, № 4. С. 59–63.)

Ключевые слова: ХОБЛ, цитокины, ЦИК, комплемент, иммуномодуляторы.

Ключевая роль в реализации воспалительных реакций принадлежит гуморальным факторам естественного иммунитета, в число которых входит система комплемента, провоспалительные цитокины и другие факторы первой линии иммунной защиты [10].

Динамика уровня цитокинов в сыворотке крови больных является определяющим показателем при оценке степени активности воспалительного процесса и эффективности проводимой терапии [3, 4, 9]. Важное прогностическое значение также имеет уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и содержание компонентов комплемента [3, 5]. Это положение в полной мере относится к болезням органов дыхания [3, 7]. Целью работы явилось изучение динамики гуморальных факторов иммунитета (спектра про- и противовоспалительных цитокинов, компонентов комплемента и уровня ЦИК под влиянием иммунокорректора полипептидной природы тинростима, включенного в комплекс лечения больных хроническими обструктивными болезнями легких (ХОБЛ).

Материалы и методы

Обследовано 60 больных ХОБЛ со среднетяжелым и тяжелым течением основного заболевания в стадии обострения. Среднийвозраст больных составил 67,3 ± 2,4 года. В контрольную группу вошли больные, которые получали базисный курс лечения, включающий ингаляционные симпатомиметики, холинолитики, кортикостероиды и, по необходимости, антибиотики. Опытная группа представлена пациентами, которые получали аналогичный курс терапии с включением тинростима два раза в сутки в течение 15 дней. Тинростим разрешен к применению Министерством здравоохранения РФ в качестве биологически активной добавки к пище как общеукрепляющее и стимулирующее иммунитет средство (регистрационное удостоверение 77.99.20.928.Б.000280.03.2004 от 02.03.2004).

Обследование больных проводили до и по окончании курса лечения. В комплекс обследования включали определение концентрации цитокинов, а также уровня ЦИК и С3-, С4- и С5-компонентов комплемента в сыворотке крови. Результаты сравнивали с такими же показателями у 22 здоровых лиц.Концентрацию цитокинов (IL-1?, TNF?, IL-4, IFN?, IL-4, IL-10) и количественное определение С3-, С4- и С5-компонентов комплемента в сыворотке крови больных проводили твердофазным иммуноферментным методом с применением коммерческих тест-систем (ООО «Цитокин», Санкт-Петербург) в соответствии с прилагаемой к наборам инструкцией. Результаты регистрировали по уровню оптической плотности, измеряемой при 450 нм на спектрофотометре Multiscan RC (Labsystems).Уровень ЦИК в сыворотке крови определяли путем селективной преципитации комплексов антиген-антитело 3,7%-ным полиэтиленгликолем с фотометрическим определением плотности преципитата при длине волны 450 нм. Результаты выражали в единицах оптической плотности. Концентрацию иммуноглобулинов классов IgM, IgG, IgA в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини.Собственный эффект тинростима (в процентах) рассчитывали по формуле [1]: [(Рис – Рт /Рис) – (Рис – Рм /Рис)] ?  100, где Р — значение параметра в абсолютных величинах, Рис — до лечения, Рт — после традиционной терапии, Рм — после традиционной терапии с применением тинростима.Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета программ «Биостат», достоверность различий оценивали с использованием t-критерия Стьюдента, критическое значение уровня значимости принимали равным 5%.

Результаты и обсуждение

Исходные уровни цитокинов TNF?, IL-1?, IL-6, IL-4, IL-10 в группе больных, получавших базисную терапию и лечение с применением иммунокорректора, были сопоставимы и существенно (5–10-кратно) превышали средние показатели нормы. Содержание IFN? в сыворотке крови больных контрольной и опытной групп было ниже среднего значения нормы (р = 0,033 и 0,001 соответственно) (табл. 1).В процессе лечения в группе больных, получавших традиционную терапию, уровень провоспалительных цитокинов TNF?, IL-1? и IL-6 статистически значимо не изменялся. В опытной группе наблюдалась следующая динамика цитокинов: уровень TNF? снижался в 1,7 раза (р = 0,041), а уровень IL-6 — в 1,5 раза (р = 0,03), понижение уровня IL-1? не было статистически значимым. Показатель собственного эффекта тинростима в отношении этих цитокинов составил 30, 21 и 25%, соответственно. Эффект тинростима на содержание противовоспалительных цитокинов (IL-4, IL-10) был выражен в меньшей мере (8 и 18%). Содержание IFN? в сыворотке крови повышалось как в контрольной (р = 0,005), так и в опытной группе (р = 0,014), достигая показателя среднего значения нормы. Соотношение IFN?/IL-4, свидетельствующее об уровне цитокинового дисбаланса, до лечения составило 0,18–0,2 (при его значении у здоровых лиц 3,2), после курса терапии с применением тинростима этот показатель незначительно повышался (до 0,3) (см. табл. 1).Результаты исследования содержания ЦИК у больных, представленные в табл. 2, свидетельствуют о том, что исходная (до лечения) их концентрация была значительно (в среднем в 1,8 раза, р = 0,001) выше по сравнению со средним значением нормы (62,4 ± 5,4 ЕД). Количественное определение С3-, С4- и С5-компонентов комплемента в сыворотке крови больных до лечения выявило их дефицит по сравнению с этими показателями у здоровых, со снижением в среднем в 1,5–1,6 раза (р = 0,001).После лечения уровень ЦИК снижался по сравнению с исходным в обеих группах (р = 0,048 для контрольной и р = 0,001 для опытной группы), при этом показатели ЦИК приближались к норме только у больных опытной группы (р = 0,34). Содержание исследуемых компонентов комплемента статистически значимо не изменялось, хотя отмечалась тенденция к их повышению (при р = 0,06–0,07) по окончании стандартного лечения (контрольная группа). У больных этой группы содержание С3- и С5-компонентов оставалось ниже нормы, а количество С4-компонента не отличалось от соответствующих показателей у здоровых лиц. В группе больных, получавших в курсе лечения тинростим, содержание С3-, С4- и С5-компонентов комплемента достоверно повышалось по сравнению с исходным (р = 0,002–0,004), приближаясь к соответствующим показателям нормы, при этом собственный эффект тинростима составил 17, 27 и 24 %, соответственно (см. табл. 2). Определение уровня сывороточных иммуноглобулинов выявило сниженное содержание IgA, которое повышалось в процессе лечения под влиянием тинростима (р = 0,026); уровень IgM и IgG статистически значимо не отличался от показателей нормы (табл. 2).

Таблица 1 Уровень цитокинов в сыворотке крови больных ХОБЛ, M ± m

 

Таблица 2Содержание ЦИК, компонентов комплемента и иммуноглобулинов в сыворотке крови больных ХОБЛ, M ± m

 

Примечание к табл. 1 и 2.   р1 — значимость различий при сравнивании показателей до и после лечения; использован параметрический t-критерий Стьюдента для двух попарно связанных между собой вариационных рядов; р — значимость различий по отношению к среднему значению нормы; ЭТ — эффект тинростима.Повышенное содержание в сыворотке крови про- (TNF?, IL-1?, IL-6), противовоспалительных (IL-4, IL-10) цитокинов и ЦИК, сниженный уровень IFN? и комплементарной активности у обследованных больных ХОБЛ свидетельствует о нарушении гуморальных механизмов иммунитета.

Цитокины принимают активное участие в развитии воспалительного процесса при ХОБЛ, о чем свидетельствует повышение их уровня какв сыворотке крови, так и в бронхоальвеолярном лаваже больных ХОБЛ в период обострения [6, 13, 14].

Значительное превалирование провоспалительных цитокинов, особенно TNF?, определяет формирование брохообструктивных изменений и способствует неблагоприятному течению воспалительного процесса [8, 14]. Провоспалительным цитокинам (TNF?, IL-1?, IL-6) также принадлежит ведущая роль в развитии нарушений гемостаза, имеющим место у больных ХОБЛ. Основным  цитокином, активирующим процессы коагуляции, является IL-6; TNF? также оказывает влияние на процессы коагуляции, действуя опосредованно через IL-6. В регуляции свертывания крови участвует и IL-1, продуцируемый эндотелиальными клетками, путем влияния на продукцию и секрецию лимфоцитами прокоагулянтной активности, активности антикоагулянтов, активаторов и ингибиторов плазминогена [11, 12]. Под влиянием тинростима, включенного в лечебный комплекс больных ХОБЛ, происходило снижение сывороточных уровней TNF? и IL-6. Отсутствие динамики цитокинов в результате базисного лечения, вероятно, объясняется тем, что воспаление не было купировано. Способность тинростима ингибировать избыточную продукцию провоспалительных цитокинов обусловливает его противовоспалительный эффект. Снижение уровня IL-6 под влиянием этого иммуномодулятора, вероятно, позволяет также уменьшить степень нарушений в системе гемокоагуляции.Выявленное нами пониженное содержание С3-, С4- и С5-фракций комплемента у больных ХОБЛ, по-видимому, связано с их активным потреблением в процессе воспаления, что может приводить к снижению процессов опсонизации и фагоцитоза чужеродных антигенов, нарушению процессов элиминации ЦИК. Об этом свидетельствует наличие обратной корреляционной связи между исходным содержанием ЦИК и уровнем С3- (r = – 0,688, р = 0,028),  С4-  (r = – 0,707,  р = 0,022)  и  С5-компонентов комплемента  (r = – 0,741, р = 0,014). Как известно, с увеличением количества ЦИК в кровотоке усиливается процесс активации системы комплемента, что приводит к активации иммунокомпетентных клеток и сопровождается выбросом медиаторов воспаления; ЦИК оседают на сосудистом эндотелии, способствуя нарушению микроциркуляции и гемодинамики [10]. Наши исследования показали, что под влиянием тинростима содержание ЦИК снижалось, а уровень активности компонентов комплемента повышался, что свидетельствует о благоприятном влиянии этого препарата на состояние гуморального иммунитета у больных ХОБЛ и о возможности снижения гнойно-септических и коагулопатических осложнений.

Таким образом, при функциональной оценке гуморального звена иммунитета выявлено повышенное содержание уровня про- и противовоспалительных (TNF?, IL-1?, IL-6, IL-4, IL-10) цитокинов и ЦИК и сниженное содержание уровня IFN? и С3-, С4- и С5-компонентов комплемента в сыворотке крови больных ХОБЛ по сравнению с группой здоровых лиц. Применение полипептидного иммуномодулятора тинростима в составе комплексного лечения больных ХОБЛ оказывает положительный корригирующий эффект на состояние этих систем. Учитывая представленные в настоящем сообщении и полученные нами ранее результаты о нормализующем влиянии тинростима на показатели системы иммунитета и гемостаза [2], можно рекомендовать включение этого препарата в состав комплексного лечения больных ХОБЛ, а также других заболеваний, сопровождающихся подобными нарушениями, с целью повышения эффективности патогенетической терапии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Земсков В.М., Караулов А.В., Земсков А.М. Иммуномодуляторы в терапии легочной патологии. — М.: Кубань. — 1995. — 320 c.

2. Кузнецова Т.А., Суханова Г.И., Киняйкин М.Ф. и др. Применение пептидного иммуномодулятора тинростима для коррекции нарушений в системе гемостаза у больных с хроническими обструктивными болезнями легких // Дальневосточный мед. журн. — 2005. — № 3. — С. 109–112.

3. Маркелова Е.В. Система цитокинов у больных с острыми повреждениями легких и клинико-иммунологическое обоснование терапии лейкинфероном: Дисс. … д-ра мед. наук. — Владивосток, 2000.

4. Медуницын Н.В. Медиаторы иммунного ответа // Russ. J. Immunol. — 1999. — Vol. 4, suppl. 1. — Р. 43–46.

5. Назаров П.Г. Комплемент и реактанты острой фазы воспаления в процессах неспецифической резистентности и иммунорегуляции // Russ. J. Immunol. — 1999. — Vol. 4, suppl. 1. — Р. 79–84.

6. Славянская Т.А. Особенности иммунореабилитации больных с нарушенной функцией иммунной системы: Автореф. дисс. … д-ра мед. наук. — М., 1999.

7. Система цитокинов и болезни органов дыхания / Под ред. Б.И. Гельцера, Е.В. Просековой. — Владивосток: Дальнаука, 2005. — 255 с.

8. Федосеев Г.Б. Механизмы обструкции бронхов. — М.: Медицинское информационное агентство, 1995. — 336 с.

9. Фрейдлин И.С. Цитокины в клинике // Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. — М., 1998. — С. 104–112.

10.  Ярилин А.А. Основы иммунологии: Учебник. — М.: Медицина, 1999. — 608 с.

11. Kerr R., Stirling D., Ludlam C.A. Interleukin 6 and haemostasis // Br. J. Haematol. — 2001. — Vol. 115, № 1. — P. 3–12.

12. Levi M., Ten Cate H. Disseminated intravascular coagulation // N. Engl. J. Med. — 1999. — Vol. 341, № 8. — Р. 586–592.

13. Pesci A, Balbi B., Majori M. et al. Inflammatory cells and mediators in bronchial lavage of patients with chronic obstructive pulmonary disease // Eur. Respir. J. — 1998. — Vol. 12, № 2. — P. 380–386.

14. Wilson R. Bacterial infection and chronic obstructive pulmonary infection// Eur. Respir. J.— 1999. — Vol. 13, № 2. — P. 233–235.

Dynamic changes of humoral immunity in patients with chronic obstructive pulmonary diseases under the influence of immunocorrection T.A. Kuznetsova1, M.F. Kinaykin2, E.D. Buyakova2, L.G. Semenovich2, G.I. Sukhanova2, N.N. Besednova1 L.M. Epshtein3

Recearch Institute of Epidemiology and Microbiology, Siberian Branch RAMS, Vladivostok;

Vladivostok State Medical University;

Pacific Research Fishery Economic Center, Vladivostok

The paper is devoted to studying the dynamics of humoral factors of immunity (cytokines, circulating immune complexes (CIC), and complement) in patients with chronic obstructive pulmonary diseases (COPD) treated with «tinrostim», a novel immunomodulatory polypeptide, included into common treatment scheme. Serum levels of cytokines and С3, С4 и С5 components of complement wеre measured by ELISA, CIC — by PEG precipitation. Increased levels of proinflammatory (TNF?, IL-1?, IL-6) and anti-inflammatory (IL-4, IL-10) cytokines and CIC, and decreased levels of IFN? and complement components were registered in COPD patients. Tinrostim showed significant beneficial effect: it lowered TNF?, IL-1?, IL-6 and CIC concentrations and increased the levels of complement components. Patients who didn’t receive tinrostim had no positive dynamics of these humoral parameters. Taking into account these results we recommend to include tinrostim into complex treatment of patients with COPD as well as with other inflammatory conditions for enhancing the effect of pathogenetic therapy. (Cytokines and Inflammation. 2007. Vol. 6, № 4. P. 59–63.)

Key words: COPD, cytokines, CIC, complement, immunomodulators.



загрузка...