загрузка...
 
Разработка набора реагентов для количественного определения фактора некроза опухолей альфа в биологических жидкостях А.М. Одегов, А.А. Сизов, Л.Р. Лебедев, С.А. Федосов, И.Н. Чернова, В.О. Максимова, В.И. Масычева
Повернутись до змісту

Разработка набора реагентов для количественного определения фактора некроза опухолей альфа в биологических жидкостях А.М. Одегов, А.А. Сизов, Л.Р. Лебедев, С.А. Федосов, И.Н. Чернова, В.О. Максимова, В.И. Масычева

Научно!исследовательский  конструкторскотехнологический институт биологически активных веществ ГНЦ ВБ «Вектор», Бердск, 2 ВосточноСибирский  государственный  технологический  университет, УланУде

Разработка методов тестирования цитокинов человека, TNF? в частности, вызывает значительный интерес у многих специалистов в связи с ключевой ролью, которую играют данные белки в функционировании иммунной системы. При развитии различных патологических состояний (инфекционные, онкологические, аутоиммунные заболевания, иммунодефицитные состояния) наблюдается изменение уровня TNF? в крови и других биологических жидкостях, причем эти изменения коррелируют с тяжестью заболевания. Появляется все больше свидетельств существенной роли, которую играет TNF? в патогенезе таких заболеваний, как рассеянный склероз и сахарный диабет. Оценка уровня TNF? в биологических жидкостях, следовательно, является важным моментом диагностики заболевания, определения его фазы, контроля за течением патологического процесса и эффективностью терапии. Расширение работ по созданию новых противоопухолевых препаратов на основе рекомбинантного человеческого TNF? также привело к необходимости тестирования его уровня в процессе лечения. Импортные тестсистемы для определения уровня TNF? очень дороги. В отечественных наборах реагентов при построении калибровочного  графика по стандартному образцу TNF? отсутствует прямолинейная зависимость значений оптической плотности от концентрации, что приводит к искажению результатов анализа. При этом для анализа используют неразбавленные образцы сывороток и плазмы крови. По нашим данным, это дополнительно приводит к искажению результата определения уровня TNF? в сыворотке крови на 30–40 % в сторону уменьшения за счет блокирующего действия большого количества балластных белков. В связи с этим, нами разработан набор реагентов для определения уровня TNF? в биологических жидкостях человека, в котором сыворотка исследуется в оптимальном разведении, исключающем искажение результатов. Чувствительность определения TNF? в неразбавленных образцах биологических жидкостей составляет 15 пг/мл, а в сыворотке крови (разбавление в два раза) — 30 пг/мл. В интервале концентраций стандартного образца TNF? от 500 до 15 пг/мл калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации имеет прямолинейный характер. Во многих профильных импортных тестсистемах также используется разведение сывороток при анализе. В основе разработки лежит метод твердофазного  гетерогенного непрямого иммуноферментного анализа с использованием пары моноклональных антител (МКА) к независимым эпитопам TNF? и биотинстрептавидинового комплекса для связывания фермента (пероксидазы хрена) со вторы ми МКА. С применением разработанного набора компонентов в научных целях проводятся лабораторные исследования образцов сывороток крови больных аутоиммунными заболеваниями. Созданы стандартные панели TNF? на основе стабилизированных солевых растворов и сывороток.

Результаты анализа показали, что соответствующие уровни TNF? стандарта набора компонентов и обеих стандартных панелей коррелируют между собой. Стандартные панели, содержащие различные уровни TNF?, могут использоваться для проведения научноисследовательских работ и для контроля качества отечественных и импортных тестсистем.



загрузка...