Диагностика хламидийной инфекции центральной нервной системы при помощи электронной микроскопии А.Л. Позняк , Ю.В. Лобзин , В.П. Сухинин , В.М. Мудрицкий

Диагностика хламидийной инфекции центральной нервной системы при помощи электронной микроскопии А.Л. Позняк , Ю.В. Лобзин , В.П. Сухинин , В.М. Мудрицкий

Военномедицинская академия МО РФ, С.Петербург;  2 НИИ гриппа РАМН, С.Петербург

С целью выявления хламидий в спинномозговой жидкости нами проведено исследование ликвора у 26 больных с вторичными менингитами при  генерализованных формах хламидийной инфекции. Для этих целей нами использована электронная микроскопия методом негативного контрастирования. Группа больных была однородная. Все обследованные больные были в возрасте 20–35 лет. Стандартными методами были исключены другие нейротропные инфекции. Генерализованная форма хламидийной инфекции с преимущественным поражением центральной нервной системы подтверждена современными методами диагностики: ПЦР, ПИФ, НРИФ, культуральным методом. Спинномозговую жидкость больных получали методом люмбальной пункции в первые дни заболевания сразу при поступлении больных в стационар до начала антибиотикотерапии. Ликвор больных в объеме 5 мл замораживали при температуре 6–10°С в бытовом холодильнике (с целью образования кристаллов льда, разрушающих клеточные структуры). После оттаивания детрит осаждали на ультрацентрифуге при ускорении 100000 g в течение 1 ч. Затем супернатант сливали. Осадок ресуспензировали в 0,05 мл остаточной жидкости и помещали на тефлоновое покрытие. На каплю сверху помещали сеточку 200 меш с нанесенной на ней угольной подложкой. Через 3–4 мин сорбции каплю жидкости отсасывали и под нее помещали каплю 1,5 %го раствора фосфорновольфрамовой кислоты (рН 6,7). Через 10–15 с контакта сеточку поднимали пинцетом и под углом с каплей касались фильтровальной бумагой, жидкость уходила в нее. После высушивания образцов сетки просматривали в просвечивающем электронном микроскопе JEM100S  (Jeol, Japan) при увеличении 10–50 тыс. раз. Съемку проводили на пленку ФТ41МД. В препаратах определялись характерные для цикла развития хламидий элементарные  (ЭТ) и ретикулярные тельца (РТ). ЭТ  (очерченные) размером от 0,1 до 0,5 мкм, РТ  (неочер ченные) — в виде рыхлых скоплений нитевидного, губчатого материала. Часть из них нередко была прикреплена к наружной поверхности ЭТ в виде «плаща». Обе формы существования хла мидий определялись на разных стадиях своего развития, имели различный размер и интенсивность окрашивания.

Полученные данные свидетельствуют об активном размножении и развитии хламидий в «забарьерном» пространстве. Анализируя полученные результаты, можно сделать следующие выводы: хламидии способны не только проникать через гематоэнцефалический барьер, но и активно размножаться, присутствуя в ликворе больных как в виде элементарных, так и виде ретикулярных (вегета тивных) телец на разных стадиях развития. Результаты исследования позволяют рекомендовать данный метод для более широкого использования в медицинской практике, в том числе для диагностики хламидийной нейроинфекции, а также разработки более рациональных схем антихламидийной терапии с учетом цикла развития возбудителя.