загрузка...
 
В.З. Кривицкая, А.А. Соминина, В.Ф. Суховецкая, К.К. Милькинт, М.В. Сверлова ГУ Научно исследовательский институт  гриппа РАМН, Санкт Петербург Иммунопатологический аллергический Th2 тип противовирусного  гуморального иммунного ответа у детей с респираторносинцитиальной вирусной инфекцией
Повернутись до змісту

В.З. Кривицкая, А.А. Соминина, В.Ф. Суховецкая, К.К. Милькинт, М.В. Сверлова ГУ Научно исследовательский институт  гриппа РАМН, Санкт Петербург Иммунопатологический аллергический Th2 тип противовирусного  гуморального иммунного ответа у детей с респираторносинцитиальной вирусной инфекцией

 Цель исследования – выявление роли респираторно синцитиального вируса (РСВ) в формировании иммунопатологических аллергических состояний, характеризующихся развитием обструкции верхних и нижних отделов дыхательного  тракта. Изменение  содержания класс специфических (IgG,  IgA,  IgE) и суб класс специфических (IgG1, 2, 3, 4) антител (АТ) к РСВ определяли с помощью ИФА в  сыворотках крови 107 детей  с РСВ инфекцией (РСВИ), протекающей без осложнений, осложненной стенозом гортани (СГ) или острым обструктивным бронхитом (ООБ). Диагностирование РСВИ проводили методами выделения вируса в клеточных культурах, иммунофлуоресценции РСВ антигенов в клинических материалах, выявления  сероконверсий в РСК. Установлены достоверные прямые корреляции между развитием обструкции верхних или нижних отделов дыхательного тракта и высоким содержанием вирус специфических антител классов IgE и IgA в сыворотках крови детей, перенесших РСВИ, в отличие от  IgG4,  где  зависимость носила обратно пропорциональный характер. Предполагается, что IgG4 могут обладать антиконстрикторным эффектом, компенсируя  сенсибилизирующее действие  IgE при СГ, но не при ООБ. Установлено, что степень аллергизации к РСВ, показателем которой является высокий уровень анти РСВ IgE и  IgA в крови, увеличивается  с возрастом, вероятно, в  связи  с увеличением числа повторных эпизодов инфекции. У детей с осложненным течением РСВИ на фоне выраженных иммунопатологических реакций понижено  содержание противовирусных АТ  суб классов  IgG, обладающих вирус нейтрализующим действием (IgG2, IgG3), что может  способствовать остроте  заболевания, формированию обструкции и  замедленному клиренсу РСВ.  (Цитокины и воспаление. 2004.  Т. 3, № 3. С. 34–40.)

Ключевые слова: респираторно синцитиальная вирусная инфекция, дети, стеноз гортани, бронхооб  струкция, иммунопатология, иммуноферментный анализ, противовирусные антитела.

Респираторно синцитиальный вирус (РСВ) является распространенной причиной острых респираторных заболеваний  (ОРЗ) у детей, сопровождающихся у части пациентов осложнениями в виде бронхитов, бронхиолитов или пневмоний. Тяжелое течение РСВ инфекции (РСВИ) связано с длительно сохраняющимися изменениями дыхательных функций и легочной  гипер реактивностью. При этом возникает риск развития хронических обструктивных заболеваний и отдаленных последствий в виде бронхиальной астмы  (БА), а также сенсибилизации к бытовым аллергенам [7, 14]. Причины осложненного течения РСВИ до конца не выяснены. Однако появляется все больше данных, свидетельствующих о том, что ключевую роль в этих процессах играют иммунопатологические реакции, в том числе искажение баланса регуляторных механизмов [7]. По современным представлениям, характер иммунного ответа, в том числе при вирусных инфекциях, во многом зависит от типа цитокинной регуляции, обусловленной различными клетками, в том числе клонами СD4+ Т клеток хелперов (Th). Т клетки 1 го типа (Th1) экспрессируют интерферон гамма и  IL2, стимулируют клеточно  опосредованный иммунитет и синтез антител (АТ) субклассов IgG1, IgG2 и IgG3. Т клетки 2 го типа (Th2) продуцируют IL 4, IL 5, IL 10, IL 13, обуславливают аллергический ответ, регулируют синтез АТ классов IgE, IgG4 и IgA [10, 15]. Показано, что при первичной РСВИ у младен  цев и экспериментальных животных индуцируется Th1 , а при осложненном течении  (астма и бронхиолит)—преимущественно иммунопатологический Th2 опосредованный тип иммунного от  вета [9]. Причины формирования РСВ опосредованных аллергических проявлений, выраженных в виде обструкции дыхательных путей, до конца не выяснены. Th2 тип иммунного ответа, в том числе синтез вирус специфичных АТ класса IgE, может быть одной из них, поскольку в ряде исследований была показана связь между синтезом этого иммуноглобулина и развитием бронхообструкции при тяжелом течении РСВИ у младенцев с бронхиолитами [3, 18]. В свете этих данных правомерным становится вопрос о значимости АТ, синтез которых обусловлен Th2 типом регуляции, т. е. IgE, IgG4, IgA, при осложненном течении РСВИ и формировании обструкции дыхательного тракта. Биологическая роль вирус специфичных Th2 зависимых АТ практически не изучена. Однако, поскольку во многих лабораториях ведутся интенсивные исследования патофизиологии аллергических заболеваний, в том числе обструктивных, при которых АТ этого типа играют ключевую роль, получены некоторые представления о механизмах действия АТ этого типа, специфичных к вдыхаемым аллергенам. Так, например, известно, что взаимодействие мультивалентного аллергена с Fab фрагментами двух молекул IgE, связанных с Fc? рецепторами (Fc?RI) на поверхности тучной клетки, вызывает ее активацию и выброс растворимых факторов (гистамина, лейкотриенов), индуцирующих обструкцию дыхательных путей. РСВ индуцируемый бронхоспазм, возможно, формируется подобным образом, поскольку РСВ может способствовать высвобождению гистамина in vitro. Помимо этого экспериментально показано, что АТ класса IgE сами являются иммунорегуляторами и усиливают эффект воздействия неспецифических бронхо констрикторов  (гистамина) и аллергенов на гладкую мускулатуру дыхательного тракта [13]. В отличие от IgЕ АТ субкласса IgG4 выполняют при аллергиях не сенсибилизирующую, а «блокирующую» функцию. Блокирующие  IgG4  АТ конкурируют с IgE за связь с аллергеном, препятствуя тем самым IgE опосредованному высвобождению гистамина. В связи с этим толерантность к аллергену сопровождается высокой активностью аллерген специфического IgG4 и отсутствием ответа со стороны специфического IgE [5]. В то время как первостепенное значение в противовирусной защите секреторного IgA доказано, роль системного (сывороточного) IgA, в том числе при вирусных заболеваниях, мало понятна. Показано, что длительное выявление противовирусно  го IgA в крови коррелировало с наличием аллергических проявлений и предрасположенностью к развитию астмы [16]. Таким образом, наличие IgA в крови может быть, подобно IgE, маркером развития аллергии. Число работ, посвященных изучению РСВ специфического гуморального иммунитета у людей, особенно Th2 опосредованного, невелико. Наличие в крови Th2 зависимых вирус специфичных АТ (IgE, IgG4, IgA) у детей в возрасте до 2 лет выявлено в немногих случаях при РСВ опосредованном тяжелом бронхиолите. При более мягком течении первичной РСВИ у маленьких детей АТ этих типов не было обнаружено [3, 18]. Практически нет исследований, посвященных изучению вирус специфического гуморального иммунитета у детей старшего возраста при повторных эпизодах РСВИ. Поскольку существует прямая связь между типом цитокиновой регуляции и структурой  гуморального ответа при РСВИ [3], сопоставление активности РСВ специфичных АТ различных классов позволяет судить о характере индуцируемой вирусом иммунной регуляции и оценить возможную роль Th2 зависимых  вирус специфичных АТ в развитии иммунопатологии при РСВИ. Целью настоящего исследования являлось выявление связи иммунопатологического Th2 опосредованного противовирусного  гуморального иммунитета с формированием аллергического компонента (обструкции верхнего и нижнего отделов респираторного тракта) у детей с первичной и повторной РСВИ. Материалы и методы Клинические материалы Были исследованы парные сыворотки крови от 107 детей в возрасте от 7 месяцев до 14 лет с документированной РСВИ. У 27 детей инфекция протекала в не осложненной форме (ОРЗ). Осложнения в виде обструкции верхнего и нижнего отделов дыхательного  тракта—стенозагортани  (СГ)  I–II  cтепени и острого обструктивного бронхита (ООБ)—наблюдались у 34 и 46 пациентов соответственно. Из их числа первичная РСВИ была документирована у 28 детей: 9, 9 и 10 пациентов с ОРЗ, СГ и ООБ соответственно. РСВИ считали первичной, если сыворотки крови, взятые в первые 4 дня  заболевания, были отрицательными в ИФА по  содержанию анти РСВ АТ всех  суб  классов  IgG. В  связи  с  тем что после перенесенной РСВИ уровень специфических АТ класса IgG в крови, выявляемых в ИФА, остается повышенным в течение длительного времени (до 1 года) [12], пациенты, у которых в первые дни заболевания сыворотки были положительными по содержанию анти РСВ IgG, были включены в группу повторно инфицированных. Средний возраст детей  с первичной и повторной РСВИ  составил 1,3 ± 0,6 и 5,3 ± 2,5 года. Сыворотки были взяты в острый период (2–6 й дни от начала заболевания) и в период реконвалесценции (7–14 й дни). В контрольную  группу были включены парные  сыворотки от 118 детей с ОРЗ, СГ и ООБ без выявленной РСВИ—35, 47 и 36 пациентов соответственно. В связи с тем, что первичная инфекция во всех  случаях наблюдалась  у детей младше 2,5 лет, пациенты контрольной группы с каждой формой респираторной патологии были разделены на две возрастные категории— до 2,5 лет и  старше  (1,4 ± 0,7 и 7,1 ± 3,3  года). Дополнительным контролем  служили одиночные сыворотки 30  здоровых детей  старшего возраста  (10,4 ± 3,8 лет). Методы диагностирования вирусных инфекций (РСВИ,  гриппозных, аденовирусных, парагриппозных) Выделение вирусов из носоглоточных  смывов и  соскобов проводили  с использованием перевиваемой культуры  клеток почек обезьяны МА 104 и диплоидной культуры фибробластов легкого  эмбрионов человека. Детекцию вирусных антигенов (АГ) в эпителиальных клетках из нижних носовых ходов осуществляли методом прямого иммунофлуоресцентного анализа  с использованием ФИТЦ конъюгатов  [1], выпускаемых «Предприятием по производству диагностических препараов»  (Санкт Петербург). Серологическая диагностика РСВИ, гриппозных (типа А, В) и аденовирусных инфекций  состояла в выявлении  серокон  версий противовирусных АТ класса IgG в непрямом ИФА с использованием в качестве АГ очищенных  ультра центрифугированием цельно вирионных суспензий. Помимо этого наличие сероконверсий вирус специфичных АТ было проанализировано в реакции  связывания комплемента  (для РСВ и аденовирусов) и реакции  торможения  гемаглютинации  (для вирусов парагриппа) [1]. Наличие вирусной инфекции, в том числе РСВИ, считалось доказанным, если оно было подтверждено результатами, по крайней мере, двух диагностических методов. Выявление анти РСВ АТ классов IgA, IgE и субклассов IgG (IgG1, 2, 3, 4) в не прямом ИФА Планшеты сенсибилизировали цельновирионной суспензией очищенного концентрата РСВ, штамм  Long. Культивирование, очистка, концентрация вируса, процедура ИФА описаны ранее  [2]. Детекцию АТ, связавшихся с АГ, проводили с применением пероксидазных конъюгатов моноклональных антител к соответствующему классу АТ или субклассу IgG человека  (ООО «Полигност», Санкт Петербург). Субстратная  смесь содержала 3,3,5,5 тетраметилбензидин  (0,1 мг/мл) и 0,02 % Н2О2. Оптическую плотность  (ОП) измеряли на  спектрофотометре Anthos (Австрия) при длине волны 450 нм (ОП450). Для анализа активности АТ в парных  сыворотках были использованы данные, полученные при одном разведении  сывороток, предварительно определенном как оптимальные. Эти разведения для суммарного IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE со  ставили 1/400, 1/400, 1/20, 1/40, 1/80,  /100, 1/10  соответственно. Для  устранения отличий результатов различных опытов  среднегрупповой  уровень анти РСВ АТ представлен в виде нормализованного показателя, выраженного  как  средняя арифметическая отношений А/К+,  где А — показатель ОП450 исследуемой пробы, К+ —ОП450 положительной  сыворотки, используемой в  том же разведении в качестве референс препарата для выявления каждого из  типов АТ во всех опытах. Отрицательными по содержанию  специфических АТ считались сыворотки, в которых значения ОП450 при анализируемом разведении не превышали 0,25  («пороговое»  значение). Этот показатель был рассчитан ранее по результатам анализа сывороток детей в возрасте 8–10 мес., не болевших РСВИ и  уже  утративших материнские противовирусные АТ. К положительным по содержанию РСВ специфических АТ относили  сыворотки,  у которых ОП450 превышала пороговое  значение в 2 раза и более. Сероконверсии признавались достоверными, если  значения ОП450 между парными  сыворотками различались не менее чем на 0,3. Статистическая обработка результатов Обработку данных проводили  с применением программы STATISTICA  for Windows, 1999. Достоверность отличий между показателями определяли  с применением критериев Стьюдента и Манна — Уитни. Для выявления  связи между двумя качественными признаками  (наличие в крови синхронно высокого и, наоборот, низкого  содержания двух различных  типов АТ) использовали коэффициент ассоциации Пирсона (RA). Результаты и обсуждение В сравнительном плане были обследованы три группы детей, у которых РСВИ имела различные клинические проявления: без осложнений (ОРЗ); инфекция, осложненная обструкцией верхних дыхательных путей  (СГ), или обструкцией нижних дыхательных путей  (ООБ). В связи с тем что иммунный ответ может существенно отличаться при первичной и повторной вирусной инфекции, пациенты с каждой формой респираторной патологии были разделены соответственно на две группы. Расчет средне групповых показателей уровня АТ с соответствующей статистической обработкой данных показал следующее. При первичной РСВИ у детей в группах с ОРЗ и СГ активность всех трех классов Th2 зависимых АТ к РСВ в острой и реконвалесцентной фазах не превышала контрольных значений, тогда как у детей с ООБ на второй неделе заболевания средне групповые показатели анти РСВ IgE и IgA были значительно выше (р < 0,01), чем в контрольных группах. Уровень вирусспецифических АТ субкласса IgG4 после первичной инфекции не повышался. При повторном инфицировании Th2 опосредованный  гуморальный ответ приобретал определенные отличия. Вне зависимости от клинической формы инфекции уровень анти РСВ IgE в рекон  валесцентной фазе заболевания достоверно превышал  (р < 0,01) показатели контрольных  групп (дети без РСВИ и здоровые дети старшего возраста). Активность анти РСВ IgA в остром и реконвалесцентном периодах была выше контрольных показателей только у детей с обоими типами обструкции (р < 0,05). При этом у пациентов с РСВИ, протекающей с обструкцией как верхних, так и нижних дыхательных путей, активность вирус  специфических АТ классов IgE и IgA была достоверно выше (р < 0,05), чем при не осложненном течении (ОРЗ), как в острый, так и в реконвалесцентный периоды заболевания. У детей с ООБ уровень IgE АТ в острый период был, в свою очередь, выше, чем при СГ (р < 0,01). Достоверные приросты уровня АТ классов IgE и  IgA в целом по  группе регистрировали только при тяжелой первичной РСВИ, протекающей с явлениями ООБ. При повторных РСВИ, осложненных бронхообструкцией, таких конверсий не выявлено вследствие высокого содержания АТ этих классов в острой фазе заболевания. Активность АТ субкласса IgG4 во всех группах пациентов с повторной РСВИ достоверно превышала контрольные показатели  (р < 0,01), однако была достаточно высокой лишь у пациентов с СГ, у которых, кроме того, в среднем по группе была выявлена выраженная сероконверсия (рис. 1). Согласно полученным результатам, можно считать, что степень аллергизации к РСВ антигенам усиливается с возрастом, вероятно, в связи с увеличением числа повторных эпизодов инфекции: независимо от формы патологии активность всех трех типов Th2 зависимых АТ была достоверно ниже  (р < 0,01) у детей с первичной РСВИ, чем при повторном инфицировании (см. рис. 1). Если  предположить, что при респираторных вирусных инфекциях АТ субкласса IgG4 способны компенсировать иммунопатологическое действие IgE, как показано при аллергии, вызванной вдыхаемыми аллергенами, то для патогенеза РСВИ могут иметь важное значение не только активность этих типов АТ, но и  соотношение уровня IgE и IgG4 друг относительно друга. Выявление антиРСВ  IgE и  IgG4 в динамике заболевания у детей старшего возраста при повторных РСВИ (рис. 2) и сопоставление этих данных с клинической тяжестью заболевания дало следующие результаты. Наиболее тяжелое и длительное течение заболевания наблюдалось в группе детей с ООБ, у которых РСВИ индуцирует длительно сохраняющиеся изменения дыхательных функций. В этой группе пациентов активность антиРСВ IgE значительно превышала таковую со стороны  IgG4 на протяжении всего времени наблюдения за ходом заболевания (до 12–14 го дня). Сходная картина наблюдалась при ООБ и у детей с первичной РСВИ. ОРЗ, осложненные СГ I–II степени, расцениваются обычно как заболевания средней тяжести. При повторной РСВИ, проходящей с СГ, в острой фазе заболевания синхронно наблюдалась высокая активность антиРСВ  IgE и  IgG4. На поздних сроках  (9–12 й дни), когда обструкция уже была компенсирована, содержание IgE в крови начинало снижаться, однако сохранялась высокая активность IgG4

 

Рис. 1. Активность  анти РСВ  IgE,  IgG4 и  IgA в  сыворотках  крови РСВ инфицированных детей  с различными формами респираторной патологии

По оси ординат – средние арифметические уровня анти РСВ АТ в виде условных единиц (А/К+ ); вертикальные линии – стандартные отклонения величин; горизонтальные линии – контрольный уровень антиРСВ АТ у детей cоответствующего воз  раста с различными клиническими формами респираторной патологии иной (не РСВ) этиологии; по оси абсцисс – группы обследованных пациентов: 1, 3, 5 — первичная РСВИ у детей младшего возраста с ОРЗ, СГ и ООБ; 2, 4, 6 — повторная РСВИ у старших детей с ОРЗ, СГ и ООБ; 7 — здоровые дети старшей возрастной группы; а, б, в — активность IgE, IgG4 и IgA соответственно

При не осложненной обструкцией РСВИ значительного подъема уровня антивирусных  IgE и IgG4 не отмечали. Таким образом, была выявлена прямая связь между формированием обструкции респираторного тракта, клинической тяжестью заболевания и активностью в крови анти РСВ  IgE, тогда как связь с активностью противовирусных АТ типа IgG4 носила обратный характер. Эти наблюдения дают основания предполагать, что РСВ специфичный IgG4, подобно анти аллергенному, может играть блокирующую роль и снижать иммунопатологическое действие IgE, заключающееся в индукции спастических явлений. Сниженная активность  IgG4 на фоне значительно повышенного содержания IgЕ в крови, наблюдаемая у детей с ООБ как при первичной, так и повторной РСВИ, может способствовать формированию бронхообструкции и длительной бронхиальной гиперреактивности, как это показано для вдыхаемых аллергенов [5]. При СГ высокая  активность  IgE, вероятно, компенсировалась повышением уровня IgG4.

 

Рис. 2. Динамика выявления  анти РСВ  IgE и  IgG4 в  сыворотках крови повторно РСВ инфицированных детей старшей возрастной  группы  с различными формами респираторной патологии

По оси ординат — обозначения см. рис. 1; по оси абсцисс — сроки заболевания в днях; К1 и К2 — уровень антиРСВ IgE и IgG4 в сыворотках крови здоровых детей старшего возраста; а, б, в — дети с ОРЗ, СГ и ООБ соответственно

Снижение содержания анти РСВ IgE в крови наблюдалось параллельно с исчезновением обструктивного синдрома. Полученные нами данные дополняют существующие представления о том, что специфические АТ субкласса  IgG4 синтезируются только после длительного воздействия аллергенов или при хронических инфекциях [4]. Нами установлено, что при повторных эпизодах острой РСВИ синтез вирус специфичных АТ этого типа может индуцироваться уже на ранних сроках заболевания. Высокий уровень противовирусного IgA в крови прямо коррелировал с клинической тяжестью заболевания и наличием обструкции как гортани, так и бронхов. Кроме того, выраженность реакции анти РСВ IgA и IgЕ была практически идентична во всех группах пациентов как с первичной, так и повторной РСВИ. Коэффициент ассоциации Пирсона (RA) составил 0,53 (р < 0,01), что показало наличие прямой связи между содержанием в крови РСВ специфичных АТ классов IgE и IgA. На этом основании можно предположить, что выявление в крови вирус специфических  IgA АТ, подобно IgE АТ, является отражением развития аллергических реакций при РСВИ. Анализ активности анти РСВ АТ, обладающих вируснейтрализующим протективным действием (IgG1, IgG2, IgG3) [8, 10], синтез которых зависит преимущественно от Th1 типа иммунной регуляции, не выявил достоверных отличий между группами детей с различными формами первичной инфекции. У детей с повторными эпизодами РСВИ также не было показано межгрупповых отличий уровня анти РСВ  IgG1. При этом, однако, ответ антиРСВ IgG2 был достоверно (р < 0,05) снижен у детей с СГ и ООБ по сравнению с группой с не осложненным течением инфекции. У детей с ООБ, помимо это  го, была снижена  (р < 0,05) активность анти РСВ IgG3 по сравнению с группой ОРЗ (рис. 3). Можно предположить, что пониженное содержание вирус нейтрализующих АТ на фоне выраженных иммунопатологических реакций способствует формированию индуцируемых РСВ осложнений.

Таким образом, полученные нами результаты свидетельствуют о том, что РСВИ, протекающая без осложнений, как первичная (у маленьких детей), так и повторная  (у детей старшего возраста), индуцировала преимущественно нормальный Th1 тип противовирусного  гуморального иммунного ответа. Первичная РСВИ, осложненная СГ, также не сопровождалась выраженным Th2 типом иммунного ответа. Формирование стенозирующего синдрома в данном случае не являлось, вероятно, следствием иммунопатологических реакций, связанных с синтезом Th2 зависимых противовирусных АТ, а объяснялось другими факторами. Так, например, показано, что РСВ может вызывать нейрогенное воспаление респираторного тракта в первые  годы жизни на фоне еще неполноценной нервной регуляции дыхания, потенцируя бронхо констрикторное воздействие тахикининовых нейропептидов на гладкую мускулатуру.

 

Рис. 3. Выявление  анти РСВ АТ  субклассов  IgG2 и  IgG3 в  сыворотках  крови детей  старшей возрастной  группы с повторными РСВИ

По оси кординат — обозначения см. рис. 1; по оси абсцисс: 1, 2, 3 — уровень анти  РСВ IgG2 в сыворотках детей с ОРЗ, СГ и ООБ соответственно; 4, 5, 6 — уровень анти РСВ IgG3 в сыворотках детей с ОРЗ, СГ и ООБ соответственно; К1, К2 — уровень анти РСВ  IgG2 и  IgG3 в  сыворотках  здоровых детей  старшего возраста Вертикальные и горизонтальные линии — см. подпись к рис. 1

Это приводит к увеличению эндотелиальной проницаемости, отеку слизистой, дегрануляции тучных клеток, высвобождению из них медиаторов воспаления [11]. Однако можно предположить, что с возрастом, при увеличении числа эпизодов РСВИ, вклад иммунопатологических АТ в развитие СГ увеличивается, поскольку, по нашим данным, у старших детей этой  группы активность Th2 зависимых противовирусных АТ повышалась. Формирование обструкции нижних дыхательных путей коррелировало с наличием Th2 зависимых аллергических процессов, показателем которых являлась высокая активность вирус специфических АТ классов IgE и IgA как при первичном, так и при повторных эпизодах РСВИ. Предполагается,  что  индукция  вирусами Th2 типа иммунопатологического ответа является эволюционным механизмом, способствующим выживанию патогена в организме хозяина, в частности, за счет того, что IL 4 подавляет функциональную активность вирус специфичных цитотоксических CD8+ Т лимфоцитов [6]. Проведенное нами исследование подтверждает эту теорию: клиренс РСВ был замедлен у пациентов с Th2 типом  гуморального ответа. Так, детекция РСВ антигенов методом иммуно флуоресценции показала, что вирусные белки в клетках эпителия носоглотки у детей с не осложненным течением РСВИ обнаруживались только до 3 сут заболевания, тогда как при осложнении СГ и бронхо обструкцией—до 5–6 го и 7–8 го дня соответственно. Обследование контрольных групп детей с различными типами респираторной патологии, вызванной иными (не РСВ) инфекционными агентами, предоставило нам редкую возможность оценить in vivo связь иммунопатологического течения перенесенной ранее РСВИ с клинической картиной последующего заболевания и чувствительностью к инфицированию другими возбудителями ОРЗ. Поскольку антиРСВ IgE и IgA могут сохраняться в крови на высоком уровне в течение длительно  го времени  (до 3–12 мес.) после заболевания  [12], повышенное содержание этих АТ у детей при отсутствии документированной РСВИ служило показателем иммунопатологического  течения  предшествующей инфекции. Было показано, что у детей старшего возраста при осложненном обструкцией  (СГ или ООБ) течении иной, не РСВ, патологии уровень анти РСВ  IgE и  IgA был значительно выше (р < 0,01), чем у здоровых детей соответствующе  го возраста. При не осложненном течении ОРЗ та  кой закономерности не было выявлено (см. рис. 1). Возможно, формирование обструкции при других респираторных инфекциях, является, хотя бы частично, следствием иммунопатологического течения предшествующей РСВИ. Помимо этого частота выявления аденовирусных и парагриппозных  (но негриппозных) инфекций была повышена у детей с высоким содержанием в крови анти РСВ IgE (таблица). Эти результаты дополняют данные, полученные в экспериментах на лабораторных животных, свидетельствующие о том, что Th2 опосредованное течение РСВИ может способствовать увеличению чувствительности к последующим РСВ реинфекциям  [6]. В соответствии с нашими данными развитие иммунопатологии при РСВИ у детей повышает восприимчивость к другим респираторным патогенам. Поскольку синтез антиген специфичного  IgE традиционно рассматривается как признак аллергии к данному антигену, способность РСВ индуцировать АТ этого типа свидетельствует о том, что РСВ может выступать в качестве аллергена. Полученные нами данные о повышенной активности вирус специфических АТ классов  IgE,  IgG4, IgА, характеризующей иммунопатологический аллергический тип иммунного ответа у РСВ инфицированных детей с обструктивными заболеваниями респираторного тракта, позволяет рассматривать РСВ индуцируемую обструкцию как форму опосредованной вирусом аллергии. Аллергенным белком может быть, например, G гликопротеин оболочки РСВ, поскольку введение лабораторным животным рекомбинантного G белка индуцировало иммунный ответ преимущественно Th2 типа и приводило к формированию выраженных иммунопатологических аллергических проявлений, в том числе легочной эозинофилии [7]. Дети с высокой активностью анти РСВ АТ классов IgE и IgA, являющейся показателем развития иммунопатологии, требуют пристального дальнейшего наблюдения, поскольку длительная высокая некомпенсированная активность Th2 опосредованных реакций, особенно у маленьких детей, является фактором риска для формирования в дальнейшем астмы и атопии

Частота выявления различных респираторных вирусных инфекций у детей с респираторными заболеваниями не РСВ этиологии в зависимости от содержания в крови анти РСВ IgE

 

Примечание.  p — достоверность отличий частоты выявления вирусных инфекций между  группами пациентов  с высоким и низким  уровнем  анти РСВ  IgE.

Кроме того, в экспериментах на животных было показано, что если при первичной РСВИ по каким либо причинам наблюдался Th2 тип иммунного ответа, то после  дующая реинфекция активировала клетки памяти Th2 цитокинового профиля, что приводило к осложненному течению заболевания. Если же первичная РСВИ протекала нормально, с иммунным ответом Th1 типа, то последующие инфекции также индуцировали Th1 клетки памяти [17].

Таким образом, клиническая картина и тип иммунного ответа при повторных РСВИ может определяться характером иммунных реакций на предшествующее инфицирование. Это явление получило название иммунологического запечатления (immunological imprinting). Предлагаемая нами трактовка РСВ индуцируемых обструктивных процессов как проявления опосредованной вирусом аллергии определяет необходимость формирования новых подходов к стратегии противовирусной профилактики и терапии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Методические указания по работе опорных баз Всесоюзного центра по гриппу и острым респираторным заболеваниям. — Л., 1986.

2. Кривицкая В.З., Сироткин А.К., Самойлович М.П., Соминина А.А. Разработка новых подходов к стандартизации иммуноферментных тестсистем для детекции антител к респираторно синцитиальному вирусу с использованием электронной микроскопии и моноклональных антител // Вопр. вирусол. — 1999. — № 6. — С. 279–284.

3. Aberle J.H., Aberle S.W., Dworzak M.N. et al. Reduced interferon gamma expres  sion  in peripheral blood mononuclear  cells of  infants with  severe  respira  tory syncytial virus disease // Am. J. Respir. Crit. Care Med. — 1999. — Vol. 160. — P. 1263–1268.

4. Carvalho Nicacio de C., Biorling E., Lundkvist A. Immunoglobulin A responses to Puumala hantavirus // J. Gen. Virol. — 2000. — Vol. 81. — P. 1453–1461.

5. Custovic A., Woodcoch A. Exposure and sensitization  in  infants and children // Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. — 2001. — Vol. 1, № 2. — P. 125–126, 133–138.

6. Fischer J.E., Johnson J.E., Kuli Zade R.K. et al. Overexpression of interleukin  4 delays virus clearance in mice infected with respiratory syncytial virus // J. Virol. — 1997. — Vol. 71, № 11. — P. 8672–8677.

7. Graham B.S., Rutigliano J.A., Johnson T.R. Respiratory syncytial virus immuno  biology and pathogenesis // Virology. — 2002. — Vol. 297, № 1. — P. 1–7.

8. Hornsleth A., Bech Thomsen N., Friis B. Detection by ELISA of  IgG subclass  specific antibodies  in primary  respiratory  syncytial  (RS)  virus  infections  // J. Med. Virol. — 1985. — Vol. 16. — P. 321–328.

9. Hussell T., Spender L.C., Georgiou A. et al. Th1 and Th2 cytokine induction in pulmonary T cells during  infection with respiratory syncytial virus // J. Gen. Virol. — 1996. — Vol. 77, Pt. 10. — P. 2447–2455.

10. Imaoka K., Miller C.J., Kubota M. et al. Nasal immunization of nonhuman pri  mates with simian immunodeficiency virus p55gag  and cholera toxin adjuvant induces Th1/Th2 help  for  virus   specific  immune  responses  in  reproductive tissues // J. Immunol. — 1998. — Vol. 161. — P. 5952–5958.

11. Piedimonte G. Neural mechanisms of  respiratory  syncytial  virus induced  in  flammation and prevention of  respiratory  syncytial  virus  sequelae  // Am.  J. Respir. Crit. Care. Med. — 2001. — Vol. 163. — P. S18–S21.

12. Popow Kraupp T., Lakits E., Kellner G., Kunz C. Immunoglobulin class specific immune  response  respiratory  syncytial  virus  structural proteins  in  infants, children, and adults // J. Med. Virol. — 1989. — Vol. 27. — P. 215–223.

13. Rabe K.F. Mechanisms of immune sensitization of human bronchus // Am. J. Respir. Crit. Care Med. — 1998. — Vol. 158. — P. S161–S171.

14. Schauer U., Hoffjan S., Bittscheidt J. et al. RSV bronchiolitis and risk of wheeze and allergic sensitisation in the first year of life // Eur. Respir. J. — 2002. — Vol. 20, №5. — P. 1277–1283.

15. Snapper C.M., Paul W.M. Interferon g and B cell stimulatory factor 1 reciprocally regulate Ig isotope production // Science. — 1987. — Vol. 236. — P. 944–947.

16. Strannegard O., Cello J, Bjarnason R. et al. Association between pronounced IgA  response  in RSV bronchiolitis and development of allergic  sensitization // Pediatr. Allergy. Immunol. — 1997. — Vol. 8, № 1. — P. 1–6.

17. Waris M.E., Tsou C., Erdman D.D. et al. Respiratory syncytial virus infection in BALB/c mice previously  immunized with  formalin inactivated  virus  induces enhanced pulmonary inflammatory response with a predominant Th2 like cy  tokine pattern // J. Virol. — 1996. — Vol. 70, № 5. — P. 2852–2860.

18. Welliver R.C., Wong D.T., Sun M. et al. The development of respiratory syncytial virus  specific IgE and the release of histamine in nasopharyngeal secretions after infection // N. Engl. J. Med. — 1981. — Vol. 305. — P. 841–846.

Immunopathological allergic Th2 associated pattern of virusspecific humoral response in children with respiratory syncytial virus infection V.Z. Krivitskaya, A.A. Sominina, V.F. Sukhovetskaya, K.K. Milkint, M.V. Sverlova Research Institute of Influenza, RAMS, St. Petersburg Objective: to study the role of respiratory syncytial virus (RSV)  in the development of  immunopatho logical allergic  complications  (upper and  lower airways obstruction). Materials and methods:  classspecific (IgG, IgE, IgA) and subclassspecific (IgG1, 2, 3, 4) antibodies (Abs) to RSV conversions were detected by ELISA in sera from 107 RSV infected children with noncomplicated upper respiratory disease, laryngeal obstruction (croup) and acute obstructive bronchitis (AOB). RSV diagnosis was verified using virus  isolation  in cell culture,  immunofluorescence detection of viral antigens  in clinical speci mens, detection of virusspecific Abs’ conversions by complement fixation test. Results: high levels of RSVspecific  IgE and  IgA positively, whereas  IgG4 negatively  correlated with  the development of  la ryngeal and bronchial obstruction in RSVinfected children. The data allow to propose that IgG4 could play the anticonstricting role in croup, but not in AOB. The degree of sensitization to RSV associated with high virusspecific IgE and IgA activity  ircreased with age. That may be explained by cumulative effect of numerous episodes of RSV  infection.  The decreased  levels of  virusneutralizing Abs  (IgG2, IgG3) accompanied by increased immunopathological response (IgE, IgA) may contribute to severity of illness, obstruction development and delayed virus  clearance  in  children with  complicated  forms of RSV  infection. (Cytokines and Inflammation. 2004. Vol. 3, No. 3. P. 34–40.)

Key words: respiratory syncytial virus infection, children, laryngeal and bronchial obstruction, immunopa  thology,  ELISA, virus specific antibodies.



загрузка...