Комплексный аллографт—модель для анализа эффективных анти ВИЧ соединений ex vivo Д.В. Субботин, Н.Г. Перминова, И.В. Тимофеев Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», наукоград Кольцово, Новосибирская обл.
Комплексный аллографт—модель для анализа эффективных анти ВИЧ соединений ex vivo Д.В. Субботин, Н.Г. Перминова, И.В. Тимофеев Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», наукоград Кольцово, Новосибирская обл.
К настоящему времени в мире не разработано адекватной экспериментальной модели ВИЧ инфекции in vivo. Это связано с тем, что ВИЧ не вызывает идентичного заболевания даже у близких к человеку видов приматов (шимпанзе, орангутан), при этом более далекие эволюционно виды млекопитающих не восприимчивы к данному типу ВИЧ!1/2. В тоже время эксперименты, выполняемые на моделях ВИЧ инфекции in vitro, не могут адекватно передать условия распространения инфекции, патогенез заболевания и предоставить возможность полноценного тестирования новых анти ВИЧ препаратов. Одним из вариантов экспериментальной модели, приближающейся к условиям in vivo, можно считать предложенную L. Margolis et al. (1997) методику культивирования фрагментов лимфоидной ткани человека с сохранением цитоархитектоники и клеточного состава исходного образца. С нашей точки зрения, на этом направлении, возможно создать промежуточный вариант модели ВИЧ инфекции ex vivo, который может быть выполнен на фрагментах различных тканей и органов (аллографтах), переживающих в искусственной питательной среде. В данной работе использована технология создания ацеллюлярного графта (разработанного НИИ ПК) с последующим заселением его культурами клеток реципиента (стволовые клетки CD34+, эндотелиальные предшественники CD133+/ CD34! , CD133+/CD34+; лимфоидные клетки CD3+/CD4+) и созданием комплексного аллографта (КА). Анализ клеточных маркеров проводили с помощью моноклональных антител в реакции НИФ. Проведена оценка ВИЧ 1инфекции индивидуальных популяций реплантируемых в КА клеток и воздействия на них оригинальных анти ВИЧ соединений. Планируется использовать КА в качестве модели ex vivo для оценки оригинальных противовирусных мембранотропных анти ВИЧ соединений. В настоящее время на модели аллографта совместно с ИТПМ. СО РАН разработаны методы характеристики и его контроля на этапах децеллюляризации с помощью методов лазерно индуцированной флюоресценции (ЛИФ). В основе ЛИФ лежит известное свойство белков и входящих в их состав аминокислот люминесцировать под воздействием УФ излучения. Люминесцентный метод исследования белков позволяет определять их структуру, состав, состояние, динамические характеристики и др. Использование в качестве источника возбуждения УФ излучения позволяет исследовать люминесценцию образца в широком спектральном интервале, наблюдать перестройку спектров ЛИФ при развитии патологических изменений в нем. Проанализирована возможность изготовления «графта» из аорты 15 экспериментальных животных — кролики породы Шиншилла. Метод ЛИФ позволяет провести экспрессную оценку жизнеспособности КА и выполнить анализ динамики его состояния во время наблюдения в течение последующих дней наблюдения.