загрузка...
 
Острая ВИЧ инфекция in vitro и продукция цитокинов лимфоцитарными клетками человека Н.А. Вараксин , Т.Г. Рябичева , Н.В. Тимофеева , Н.Г. Перминова , И.В.  Тимофеев  ЗАО «ВекторБест»;  2  ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора,  Кольцово, Новосибирская обл.
Повернутись до змісту

Острая ВИЧ инфекция in vitro и продукция цитокинов лимфоцитарными клетками человека Н.А. Вараксин , Т.Г. Рябичева , Н.В. Тимофеева , Н.Г. Перминова , И.В.  Тимофеев  ЗАО «ВекторБест»;  2  ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора,  Кольцово, Новосибирская обл.

В патогенезе ВИЧ?инфекции дисбаланс цитокинов, продуцируемых Th1? и Th2?лимфоцитами и моноцитами, занимает центральное место, оказывая влияние на силу ответа иммунной системы на специфические антигены вируса. Цитокиновая сеть задействована практически на всех этапах взаимодействия вирус — клетка, распространения вируса в макроорганизме, формирования иммунодефицита и развития оппортунистических инфекций. Рост ВИЧ?инфицированных в мире и в России стимулирует поиск эффективных лекарственных препаратов и противовирусных анти?ВИЧ?препаратов местного мембранотропного действия — микробицидов. Модельной системой для изучения in vitro противовирусной активности мембранотропных препаратов является первичная культура стимулированных фитогемагглютинином  (ФГА) лимфоцитов периферической крови человека. Целью работы было изучение спектра цитокинов, вырабатываемых  при  инфекции  ВИЧ?1  лимфоцитами  периферической крови здоровых доноров. Для анализа цитокинов использовали иммуноферментные тест системы производства  ЗАО  «Вектор?Бест»:  TNF?  (чувствительность — 2 пг/мл, 0–250 пг/мл);  IFN?  (чувствительность — 5 пг/мл, 0–2000 пг/мл);  IL?4  (чувствительность—2 пг/мл, 0–400 пг/мл;  IL?8  (чувствительность—2 пг/мл, 0–250 пг/мл); рецепторного антагониста  IL?1  (чувствительность —  20 пг/мл, 0–2500 пг/мл);  IFN?  (чувствительность—10 пг/мл, 0–1000 пг/мл); аутоиммунных антител к  IFN?  (чувствительность—2 нг/мл, 0–500 нг/мл). Лимфоцитарную фракцию крови выделяли из гепаринизированной крови здоровых доноров в  градиенте плотности фиколла верографина. Была изучена продукция цитокинов лимфоцитами периферической крови человека при инфекции ВИЧ?1 без предварительной стимуляции и при стимуляции ФГА. Максимальная концентрация TNF для нестимулированных клеток наблюдается через 48 ч, для ВИЧ?инфицированных клеток отмечается запаздывание начала продукции и достижение максимума на 120 ч. Для ФГА?стимулированных максимум продукции приходится на 24 ч при концентрации 1000 пг/мл. Аналогично и для  IL?1?, максимальная продукция наблюдается для ФГА?стимулированных лимфоцитов и  составляет 500 пг/мл через 24 ч после начала стимуляции. Для ВИЧ? инфекции характерна быстрая  продукция  IL?1? — уже через 3 ч после заражения 75 пг/мл, тогда как при нестимулированной продукции максимум  приходится на 3?и сутки и достигает 58 пг/мл.  IFN? не продуцируется не? стимулированными лимфоцитами, при ФГА?стимуляции максимум концентрации достигает 69 пг/мл на 3?и сутки, при ВИЧ?инфекции максимум приходится на 4?е сутки и достигает значения 90 пг/мл.  IFN? практически не нарабатывается спонтанно и при ФГА?стимулированной индукции. При ВИЧ?инфицировании через 96 ч  значение концентрации  IFN? достигает 90 пг/мл. Вместе  с  увеличением концентрации  IFN? в супернатантах ВИЧ?инфицированных клеток нарабатываются антитела к  IFN?. При ФГА? стимуляции концентрация  IL?8 плавно нарастает в течение всего эксперимента и достигает 100 тыс. пг/мл за 2 суток. При  спонтанной продукции максимум—46 тыс. пг/мл—достигается на 4?е сутки. А при ВИЧ?инфекции максимум продукции на 4?е сутки выражен не ярко, и концентрация  IL8 при этом практически в 10 раз ниже. ФГА?стимулированные лимфоциты нарабатывают рецепторный антагонист к  IL1 втечение первых суток до 4  тыс. ME, и далее концентрация не меняется. При ВИЧ?инфекции нарастание до 1000 пг/мл происходит практически за 3 ч, тогда как при спонтанной индукции этот уровень достигается за 60 ч. Во всех экспериментах  IL4 не нарабатывался. ВИЧ?инфекция вызывает: наработку  IFN? и антител к нему; значительное увеличение продукции  IFN? и TNF?; подавление продукции  IL8 и рецепторного антагониста  IL1.



загрузка...