загрузка...
 
В.Б. Мальханов, З.Р. Марванова, Н.Е. Шевчук Уфимский НИИ глазных болезней, г. Уфа Содержание IL1?, IL6, TNF?, IL4 в сыворотке крови больных в динамике развития  герпетического кератита
Повернутись до змісту

В.Б. Мальханов, З.Р. Марванова, Н.Е. Шевчук Уфимский НИИ глазных болезней, г. Уфа Содержание IL1?, IL6, TNF?, IL4 в сыворотке крови больных в динамике развития  герпетического кератита

Проведен сравнительный анализ содержания IL1?, IL6, TNF?, IL4 в сыворотке крови 67 больных в динамике развития  герпетического кератита. Определение уровня цитокинов проведено твердофазным иммуноферментным методом. Показано, что тяжесть герпетического кератита коррелирует с интенсивностью синтеза цитокинов. Более раннее повышение концентрации провоспалительных цитокинов характерно для поверхностных форм герпетического кератита, более позднее и более выраженное — для глубоких. (Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4, № 4. С. 50–53.)

Ключевые слова: вирус простого герпеса, офтальмогерпес, цитокины.

Известно, что вирус простого  герпеса  (ВПГ) вызывает до 50 % воспалительных заболеваний роговицы, нередко характеризующихся затяжным и рецидивирующим течением  [1, 2, 3]. В процессе первичного инфицирования им человека и реактивации ВПГ в тройничном ганглии он индуцирует нарушения клеточного звена иммунитета, влияет на спектр экспрессии рецепторов на мембране лимфоцитов крови и продукции цитокинов [4, 9]. Дисбаланс цитокинов является одной из причин утяжеления воспалительного процесса в роговице и развития осложнений, приводящих к слабовидению и слепоте. Целью настоящего исследования явилось определение уровней  IL1?,  IL6, TNF?,  IL4 в сыворотке крови у больных герпетическим кератитом в динамике заболевания.

Материалы и методы

Проведено комплексное клиникоиммунологическое обследование 67 больных  с  герпетическим кератитом  (ГК), находившихся на лечении в Уфимском НИИ глазных болезней. В обследовании  участвовало 38 мужчин  (57 %) и 29 женщин (43 %) от 27 до 62 лет (44,5 в среднем). Обследуемые больные  ГК были распределены по клиническим фор) мам в соответствии с классификацией А.А. Каспарова (1994). Среди них с поверхностными формами ГК (древовидный, ландкартообразный, краевой кератиты) 26  (39 %) пациентов,  с глубокими  (метагерпетический, дисковидный кератоиридоциклиты,  герпетическая язва роговицы  с  гнойной инфильтрацией)—41  (61 %). При постановке диагноза использовали данные анамнеза, клинической картины поражения роговицы и результаты положительного анализа соскоба с конъюнктивы методом флуоресцирующих антител (МФА). Критериями эффективности терапии являлись  эпителизация роговицы, рассасывание инфильтратов и повышение остроты  зрения. Больным было проведено стандартное противовирусное лечение (местно— мазь  зовиракс 3 %, внутрь—таблетки ацикловира по 0,2  г 5 раз в сутки в течение 5–7 дней). Контрольную группу составили 27 практически здоровых доноров  того же возраста. Взятие крови осуществляли натощак из локтевой вены обследуемых в  строго  стерильных условиях. Определение уровня интерлейкинов—IL1?, IL4, IL6, TNF? в сыворотке крови больных в динамике развития ГК было про) ведено  твердофазным иммуноферментным методом по  стандартной методике  с использованием  тест)систем ProCon  (ООО «Протеиновый контур», Санкт Петербург). Учет результатов проводили  с использованием автоматического фотометра «Униплан» при длине волны 450 нм. Результаты выражали в пкг/мл. В норме у здоровых людей содержание IL1?, IL4, IL6, TNF? в  сыворотке крови не превышает 50 пкг/мл. Статистическую обработку данных проводили с использованием  стандартных методов параметрической и непа) раметрической  статистики в рамках программы Statsoft Windows 4,0.

Результаты и обсуждение

Полученные результаты показали, что при поверхностных формах ГК (рис. 1) имеет место достоверное  (p < 0,01) повышение среднего уровня IL1? и TNF? (соответственно 61,3 ± 10,4 пкг/мл и 86,8 ± 11,3 пкг/мл) в сыворотке крови с 1 го по 5 й день от начала заболевания по сравнению с контролем  (соответственно 34,3 ± 5,6 пкг/мл и 40,5 ± 9,3 пкг/мл). Содержание IL1? нормализовалось, начиная с 6 го дня заболевания, продолжая оставаться в пределах нормы до конца наблюдения. Постепенное снижение концентрации TNF? отмечали в течение двух недель, его нормализация происходила только к 16–20 м суткам от начала развития герпетической инфекции глаз. Концентрация  IL6 была достоверно повышена с 1 го по 15 й дни наблюдения с максимальными значениями  (216,5 ± 17,4 пкг/мл) на 6–10 й день. Это в 4,8 раза выше показателей в  группе контроля (44,6 ± 7,0 пкг/мл) и в 2,4 раза выше, чем в начале заболевания  (91,7 ± 18,6 пкг/мл). В последующие дни уровень  IL6 постепенно нормализовался. Что касается содержания IL4, то оно возрастало (97,4 ± 18,1 пкг/мл, p < 0,01) с 11 х суток от начала заболевания и достигало максимальных значений  (148,4 ± 14,3 пкг/мл, p < 0,01) на 21–30 е сутки, в 4 раза превышая этот показатель в контроле (37,8 ± 5,8 пкг/мл). Следовательно, для поверхностных форм ГК в первые 5 дней заболевания характерно выраженное повышение содержания провоспалительных IL1? и TNF? в сыворотке крови с последующей их нормализацией. Максимальные уровни  IL6 наблюдались на 5 дней позже, чем максимальные уровни IL1? и TNF?  (на 6–10 е сутки). В отличие от провоспалительных цитокинов, наиболее высокие значения противовоспалительного  IL4 отмечали в период ранней реконвалесценции  (на 21–30 й день). При глубоких формах ГК (рис. 3) подъем уровня цитокинов также наблюдали в первые дни заболевания. Однако в отличие от поверхностных форм, он характеризовался более существенным (p < 0,01) накоплением  IL1?,  IL6 и TNF? в сыворотке  крови, причем таким он сохранялся  дольше—до 20–30 дней (рис. 2). При этом максимальные уровни IL1? и TNF? (соответственно 101,3 ± 15,2 пкг/мл и 127,5 ± 23,4 пкг/мл, p < 0,01) отмечались на 6–10 й день, что на 5 дней позже по сравнению с поверхностными ГК. На 11–15 й день болезни происходило  снижение концентрации этих двух цитокинов и отмечалось максимальное накопление IL6 (387,5 ± 35,2 пкг/мл), что нашло отражение в обратной корреляционной взаимосвязи между уровнями IL6 и IL1?  (r = –0,69, p < 0,01). Нормализация содержания IL1? и TNF? происходила к 21–30 му дню наблюдения, тогда как IL6— только к 31–40 му дню от начала заболевания. Содержание противовоспалительного  IL4 при глубоких формах ГК, в отличие от поверхностных форм, когда его уровень был высоким с 11 го дня заболевания, повышалось, начиная с 16 го дня, и достигало максимальных значений (186,3 ± 26,7 пкг/мл, p < 0,01) только на 31–40 сутки. Наиболее высокое содержание  IL4 у пациентов с  глубокими формами ГК наблюдалось в среднем на 10 дней позднее, чем у больных с поверхностными формами. Итак, сопоставление содержания изучаемых цитокинов с клинической картиной офтальмогерпеса выявило увеличение содержания изучаемых цитокинов в сыворотке крови больных ГК, особенно выраженное при глубоких его формах. Гиперпродукция изучаемых цитокинов, связанная с содержанием субпопуляций лимфоцитов в крови при  глубоком поражении роговицы  [5, 6], вероятно, является результатом активации антигеном вируса герпеса дендритных клеток. При обеих формах ГК отмечается одинаковая динамика накопления цитокинов в сыворотке крови, однако увеличение содержания провоспалительных цитокинов при  глубоком поражении роговицы ВПГ происходит в среднем на 5 дней, а противовоспалительного IL4—на 10 дней позже по сравнению с поверхностным, что коррелировало с клиническими особенностями течения ГК. Так, у 24 из 26  (92 %) пациентов с поверхностными формами ГК было отмечено выздоровление на 8–10 е сутки от начала заболевания, продолжительность полной эпителизации роговицы составила в среднем 5,7 ± 1,1 дней, рассасывание инфильтратов—8,2 ± 1,5 дней, острота зрения повысилась у 23 (88,5 %) пациентов. Тогда как в группе больных с глубокими формами ГК выздоровление было отмечено у 32 из 41  (78 %) пациента в сред' нем на 16–20 е сутки (рис. 4). У остальных 9 пациентов выздоровление в более поздние сроки—на 25–30 е сутки—коррелировало (r = 0,67, p < 0,05) с высоким уровнем TNF? и IL6 на 16–20 е сутки. Эпителизация роговицы наступала в среднем на 12,5 ± 1,2 день, резорбция инфильтратов заканчивалась к 19,8 ± 2,1 дням, признаки иридоциклита исчезали на 17,6 ± 1,6 день, повышение остроты зрения отмечали у 34 (83 %) пациентов. Высокие значения IL6 как при поверхностных, так и при глубоких формах ГК сохраняются в течение более продолжительного времени, чем IL1? и TNF?. Это, вероятно, как и при других вирусных инфекциях [8, 10, 11, 12], связано с ингибирующим действием  IL6 на продукцию провоспалительных цитокинов и подтверждается обратной корреляционной связью содержания IL1? и IL6 при глубоких формах ГК (на 11 15 е сутки от начала заболевания). Более позднее повышение содержания противовоспалительного  IL4 при  глубоких формах ГК по сравнению с поверхностными может объясняться ростом продукции  IFN?  [7], подавляющего его синтез на первых этапах заболевания, и быть причиной углубления воспалительного процесса в роговице.

 

Рис. 1.  Содержание цитокинов в  сыворотке  крови больных в динамике развития поверхностных форм герпетического  кератита

 

Рис. 2.  Содержание цитокинов в  сыворотке  крови больных в динамике развития  глубоких форм герпетического  кератита

 

Рис. 3. Больной К. Метагерпетический  кератоиридоциклит правого  глаза до лечения

 

Рис. 4. Больной К. Метагерпетический  кератоиридоциклит правого  глаза после лечения

Вышеизложенное свидетельствует о связи изменений содержания цитокинов в сыворотке крови с динамикой развития ГК и его клинической формой, что открывает новые возможности для иммунодиагностики и разработки эффективной иммунокорригирующей терапии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Дегтяренко Т.В., Гайдамака Т.Б., Драгомирецкая Е.И. Особенности иммунологической реактивности организма у больных с различным течением рецидивирующего герпетического кератита // Офтальмол. ж. — 2000. — № 5. — С. 30–35.

2. Каспаров А.А. Офтальмогерпес. — М.: Медицина, 1994. — 224 с.

3. Майчук Ю.Ф. Герпетические кератиты // Росс. мед. ж. — 1998. — № 6. — С. 3–6.

4. Мальханов В.Б. Офтальмогерпес хронического течения: клиника, диагностика, лечение. — Автореф. дис. … д-ра. мед. наук. — Самара, 1997. — 40 с.

5. Мальханов В.Б., Шевчук Н.Е., Марванова З.Р. Количественная характеристика  субпопуляций лимфоцитов крови при офтальмогерпесе  // Вопр. вирусол. — 2003. — № 5. — С. 38–41.

6. Мальханов В.Б., Шевчук Н.Е., Марванова З.Р. Цитокиновый статус больных офтальмогерпесом // Вопр. вирусол. — 2004. — № 1. — С. 28–30.

7. Марванова З.Р., Шевчук Н.Е. Продукция цитокинов и оценка тяжести течения герпетических кератитов // Сб. науч. тр. «Актуальные проблемы воспалительных заболеваний глаз». — М., 2001. — С. 193–195.

8. Носик Н.Н. Цитокины при вирусных инфекциях // Вопр. вирусол. — 2000. — № 1. — С. 4–10.

9. Шевчук Н.Е. Особенности иммунного ответа при вирусных и хламидийных офтальмоинфекциях. — Автореф. дис. … канд. биол. наук. — Уфа, 2002. — 22 с.

10. Biglino A., Sinicco A., Forno B. et al. Serum cytokine profiles in acute primary HIV1 infection and in infectious mononucleosis // Clin. Immunol. Immunopathol. — 1996. — Vol. 78, № 1. — P. 61–69.

11. Ghanekar S., Zheng L., Logar A. et al. Cytokine expression by human peripher) al blood dendiritic cells stimulated in vitro with HIV1 and herpes simplex vi) rus // J. Immunol. — 1996. — Vol. 157, № 9. — P. 4028–4036

12. Tilg H., Dinarello C.A., Mier J.W. IL6 and APPs: anti inflammatory and immunosuppressive mediators // Immunol. Today. — 1997. — Vol. 18, № 9. — P. 428–432.

Serum IL1?, IL6, TNF? and IL4 cytokine content in the course of herpetic keratitis V.B. Malhanov, Z.R. Marvanova, N.E. Shevchuk Ufa Research  Institute of Eye Diseases, Ufa Data are reported on the content of proand anti inflammatory cytokines in blood serum of 67 patients with ophthalmoherpes. Severity of herpetic keratitis correlated with cytokine production. Epithelial keratitis is characterized by earlier increase in pro inflammatory cytokines, stromal keratitis — by later and more intensive cytokine  increase. (Cytokines and Inflammation. 2005. Vol. 4, № 4. P. 50–53.)

Key words: herpes  simplex virus, ophthalmoherpes, cytokines.



загрузка...