Способность базофилов крови человека к повторной дегрануляции и выбросу гистамина А.С. Трулев, П.Г. Назаров ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН, г. Санкт-Петербург
Способность базофилов крови человека к повторной дегрануляции и выбросу гистамина А.С. Трулев, П.Г. Назаров ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН, г. Санкт-Петербург
Базофилы, описанные Эрлихом в 1879 г., являются наименее изученными клетками среди лейкоцитов, что можно обLяснить сложностью их изучения, но не отсутствием интереса исследователей. Базофилы участвуют в аллергических реакциях, противопаразитарном иммунитете. Кроме того, обладая способностью секретировать IL-4 и IL-13, они вовлечены в переключение иммунного ответа по ТЬ2-пути. Есть сведения о способности регуляции свойств базофилов медиаторами нервной системы. В настоящее время мало данных о выживаемости базофилов в культуре и способности осуществлять синтез своих медиаторов de novo. Изучение этого вопроса стало целью данной работы.
Для выполнения исследования использовали свежую донорскую гепаринизированную кровь. В культуры помещали либо цельную кровь (перед культивированием ее разводили в три раза средой RPMI 1640), либо фракцию лейкоцитов (их культивировали в среде RPMI 1640 с 10 % эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС)). Затем кровь или лейкоциты разделяли на равные части, к каждой из которых добавляли реагенты, способные вызвать деграну- ляцию базофилов. В качестве стимуляторов использовали агрегированный иммуноглобулин человека (агрегировали прогреванием при 63°С в течение 10 мин), конканавалин А (Кон А) или карбамоилхолин (КХ). В качестве контроля к клеткам добавляли равный объем забуференного фосфатами физиологического раствора (ЗФР). Клетки инкубировали в течение 40 мин при 37°С, затем центрифугировали (300 g, 10 мин), надосадок замораживали. Отмытые клетки ресуспендировали в смеси донорской плазмы с RPMI 1640 1:2 (в случае цельной крови) или в среде RPMI 1640 с 10 %о ЭТС. На следующий день к клеткам добавляли те же реагенты, инкубировали 40 мин при 37°С, центрифугировали, надосадок замораживали.
Концентрацию гистамина в надосадке определяли методом Шора с флюориметрической детекцией.
Единственным источником гистамина считали базо- фильные гранулоциты, так как тучные клетки в периферической крови человека отсутствуют. Полученные данные интерпретировали как продукцию гистамина именно базофилами.
Наши опыты показали, что базофилы выживают в культурах и сохраняют способность к секреции гистамина в течение, по крайней мере, 48 ч, и условия культивирования (присутствие или отсутствие эритроцитов и мононуклеарных клеток) не влияют на выживаемость и дегрануляцию базофилов in vitro. Базофилы, подвергшиеся дегрануляции и выбросившие гистамин, способны за сутки восстановить содержание гистамина в гранулах и секретировать его снова при повторной стимуляции in vitro. При холинергической активации базофилов КХ развивается «десенсибилизация», которая проявляется в потере базофилами способности отвечать на повторное воздействие этим активатором.