Показатели клеточного иммунного ответа при иммунизации мышеи антираоическои вакцинои на фоне цитокинов Ж.И. Авдеева, С.Е. Акользина, Н.А. Алпатова, Т.Н. Никитина, Н.В. Медуницын ФГУН Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича Роспотребнадзора РФ, Москва
Экспериментальные исследования показали, что сочетанное использование при иммунизации культуральной антирабической вакциной концентрированной, очищенной методом ультрафильтрации(КОКАВ), рекомбинантных цитокинов человека IL-ip и TNFa в виде монопрепаратов, а также комплекса цитокинов (IL-ip, IL-2, TNFa) повышает протективное действие культуральной антирабическойвакцины. У животных, иммунизированных КОКАВ на фоне введения цитокинов, наблюдается усилениеантиген- и митоген-индуцированной и спонтанной пролиферации лимфоцитов, увеличение числаТ-хелперов и Т-клеток с цитотоксической/супрессорной активностью, повышение титра специфических вирус-нейтрализующих антител, а также увеличение числа Ia-положительных клеток во фракциилимфоцитов и макрофагов селезенки. (Цитокины и воспаление. 2008. Т. 7, № 4. С.15-20.)
Цитокины — естественные эндогенные регуляторы развития иммунного ответа, они осуществляют контроль за размножением и дифференци- ровкой предшественников иммунокомпетентных клеток, представлением антигена (АГ), диффе- ренцировкой Т- и В-лимфоцитов, пролиферацией антиген-сенсибилизированных лимфоцитов [2, 3, 6]. В литературе имеются сообщения об использовании цитокинов (IL-1, IL-2, IL-3, IL-6, IL-10, IL-12, G-CSF, IFNy) в качестве адLювантов, введение цитокинов при иммунизации приводит к усилению иммуногенных свойств вакцин [1, 4, 7-9, 13]. На экспериментальных моделях установлено стимулирующее действие IL-1 при вакцинации против гепатита В [14], IL-2 — при вакцинации против герпеса [15], IFNy — при вакцинации против малярии [11], TNFa — при иммунизации антирабической вакциной [5]. Показано, что профилактическое применение антирабической вакцины в сочетании с рекомбинантным человеческим IL-2 (рч^-2) обеспечивало протективный эффект у мышейлинии Swiss при их последующем заражении вирулентным штаммом «SAD», в то время как введение одной вакцины было не эффективно [10].
Цель работы — изучение протективного эффекта вакцинации и оценка показателей клеточного иммунного ответа экспериментальных животных, иммунизированных вакциной против бешенства на фоне введения цитокинов.
Материалы и методы
Экспериментальные исследования по изучению адLювантных свойств цитокинов и оценке показателей клеточного иммунного ответа проведены на 1546 беспородных белых мышах массой 12-14 г и 210 мышах линии CBA массой 12-14 г. Животные получены из Центрального питомника лабораторных животных РАМН «Биомодель».
В работе использована культуральная антирабическая вакцина концентрированная, очищенная методом ультрафильтрации (КОКАВ), инактивированная сухая. Экспериментальные исследования проведены с использованием коммерческих серийвакцины КОКАВ с иммуногенной активностью 13,80 МЕ и 5,62 МЕ (производство ИПВЭ РАМН им. М.П. Чумакова, г. Москва).
Использованы следующие препараты рекомбинантных цитокинов человека:
тимозин альфа 1 человека рекомбинантный (Та) (НИИ прикладной микробиологии, г. Оболенск);
гибридный белок «неотим», состоящий из рчTNFa и тимозина альфа 1 (Ta-TNF-Ta) (НИИ прикладной микробиологии, г. Оболенск).
Все указанные препараты условно объединены под термином «цитокины».
Влияние цитокинов на протективный эффект антирабической вакцины определяли в тесте защиты иммунизированных мышей при заражении их фиксированным вирусом бешенства, штамм CVS (Challenge virus standart). Вакцину и цитокины вводили животным одновременно внутрибрюшинно. Опытным группам животных вакцину КОКАВ вводили в разведениях 1:50, 1:500, 1:5000 или в разведениях 1:25, 1:125, 1:625 в сочетании с цитокинами, вводимыми в виде монопрепаратов или комплекса отдельных цитокинов. При использовании монопрепаратов вводимая доза для каждого из цитокинов — рчК-1р, рчTNFа, Та или Ta-TNF-Ta — составляла 1,0 мкг на мышь. Дозы цитокинов при использовании их в комплексе составляли: для рчК-1Р — 10 нг, для рчК-2 — 10 МЕ, для рчTNFa — 10 ЕД из расчета на одну мышь. Контрольным группам животных вакцину КОКАВ вводили в тех же разведениях, что и опытным группам, но без цитокинов. Каждая группа, соответствующая одному из разведений вакцины, включала 10-15 мышей. Вакцину и цитокины вводили животным двукратно с интервалом в одну неделю.
На 8-й день после окончания иммунизации мышам вводили фиксированный вирус бешенства. Заражающая доза вируса при внутримозговом введении составляла 3,0-3,6 lg LD50 в обLеме 0,03 мл. Наблюдение за животными проводили в течение 14 дней, отмечая гибель животных, начиная с 6 дня после заражения. Эффективность вакцинации, при изолированном использовании вакцины КОКАВ или сочетанном ее применении с цитокинами, оценивали по числу выживших животных в каждой из групп, соответствующих разведению вакцины. Определяли процент выживших животных и величину предельно допустимого разведения вакцины, обеспечивающую 50 %-ную выживаемость животных после заражения вирусом бешенства (КР50), рассчитанную по методу Reed-Muench [12].
Титр вирус-нейтрализующих антител (АТ) в сыворотке крови вакцинированных животных определяли в реакции биологической нейтрализации на беспородных белых мышах, массой 7-8 г. Кровь для получения сыворотки брали у животных на 7-е сутки после окончания иммунизации. Постановку реакции осуществляли, используя постоянную дозу вируса бешенства, штамм CVS (38 LD50) и 5-кратные разведения предварительно инактивированной сыворотки. Равные обLемы вирус-со- держащей жидкости и тестируемой сыворотки смешивали и выдерживали при 37 °С в течение 1,5 часов. Указанную смесь после инкубации реагентов вводили в мозг животных в обLеме 0,03 мл. Наблюдение за мышами проводили в течение 14 дней, учитывая их гибель, начиная с 6 дня после инLекции. Определяли процент выживших животных и величину титра вирус-нейтрализующих антител.
Показатели клеточного иммунного ответа вакцинированных животных оценивали при тех условиях эксперимента, при которых было выявлено усиление протективного эффекта вакцины препаратами цитокинов. Клеточную форму иммунного реагирования оценивали по количественному содержанию Т-хелперов и Т-клеток с цитотоксической/супрессорной активностью, уровню экспрессии антигенов главного комплекса гистосов- местимости (МНС) II класса на иммунокомпетентных клетках, а также функциональной активности лимфоцитов (Лф), определяемой в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ). Показатели клеточного иммунного ответа оценивали на 5 сутки после введения препаратов.
Количественное содержание регуляторных субпопуляций Лф (Т-хелперов и Т-Лф с цитотоксической/супрессорной активностью), а также экспрессию продуктов генов МНС II класса (субрайонов IA и IE комплекса Н-2 мыши) на спленоцитарных Лф и макрофагах (Мф) мышей линии CBA определяли в реакции непрямой иммунофлюоресценции с использованием соответствующих специфических моноклональных антител (МкАТ). С этой целью были использованы анти^3Т4 и анти-Т1|у1,2 МкАТ («Becton Dickinson», USA), анти-IA (супернатант гибридомы 10-2.16), анти-IE МкАТ (супернатант гибридомы 13/4). Содержание специфического иммуноглобулина в супернатантах гибридом составляло не менее 2,5 мкг/мл. При постановке реакции взвесь клеток (концентрация 1 х 106 кл/мл в среде 199 с 5 °% сывороткой плодов коровы) инкубировали с препаратами соответствующих МкАТ в 96-луночных планшетах («Becton Dickinson», USA) в течение 30 минут при 4 °С. После отмывания клетки вновь инкубировали в течение 30 минут при 4 °С с препаратом FITC-меченных F(аb)2-фрагментов кроличьих антител, специфичных к иммуноглобулинам мыши («Becton Dickinson», USA). Затем клетки фиксировали 1 °% раствором параформаль- дегида («Merck», Germany) в течение 15 минут при комнатной температуре и хранили планшеты при 4 °С не более 2 суток. Результаты учитывали на лазерном проточном цитофлюориметре «Epics C» («Coultronics», France), определяя количество клеток, экспрессирующих указанные маркеры.
Постановку РБТЛ проводили с использованием оптимальных концентраций митогенов (ФГА — 10 мкг/мл, Кон А — 10 мкг/мл, ЛПС — 50 мкг/мл, «Sigma», USA) или специфического антигена вакцины против бешенства. Лимфоциты селезенки мышей (в конечной концентрации 1 х 106 кл/мл в среде RPMI-1640, содержащей 10 °% сыворотки плодов коровы, 2 мМ L-глутамина, 5 х 106 М 2-меркаптоэтанола, 1 мМ буфера HEPES и антибиотики), с добавлением указанных выше митогенов или антигена, культивировали в 96-луночных планшетах («Becton Dickinson», USA). Взвесь клеток инкубировали в течение 72 ч при 37 °С в атмосфере 5 °% СО2. Пролиферативный ответ оценивали по интенсивности синтеза ДНК, с этой целью за 16 ч до окончания культивирования в культуры клеток вносили метил-3Н-тимидин (74 кБк/мл). Счет радиоактивности проводили ?-счетчиком «BetaTrak», уровень пролиферации спленоцитов оценивали по числу импульсов в одну минуту. Статистическую обработку данных проводили на ПК с использованием стандартного пакета статистических программ. Достоверность уровня различия сравниваемых величин оценивали с помощью 1>критерия Стьюдента.
Результаты и обсуждение
Результаты экспериментальных исследований показали, что введение при иммунизации животных одновременно с вакциной КОКАВ комплекса цитокинов, включающего рчIL-1?, рчIL-2 и рчTNF?,, повышает иммуногенную активность вакцины. Животные, которые были иммунизированы вакциной на фоне введения комплекса цитокинов, были в большей степени защищены при их последующем заражении фиксированным вирусом бешенства по сравнению с контрольной группой, иммунизированной вакциной без цитокинов (рис. 1). Как видно из рис. 1, процент выживших животных, иммунизированных вакциной в разведении 1:50 и 1:500 в сочетании с комплексом цитокинов, существенно превышал показатели контрольной группы. При использовании вакцины в разведении 1:50 процент выживших животных в опытной группе в 2,0 раза превышал показатели контроля (83,4 и 40,0 %, соответственно). При использовании вакцины в разведении 1:500 в опытной группе выжило 46 % животных, в контрольной группе все погибли. Доза вакцины, определяемая как величина ее предельного разведения, обеспечивающая 50 %-ную выживаемость животных при заражении вирусом бешенства (показатель КР50), для опытной группы, получившей вместе с вакциной КОКАВ комплекс цитокинов, была в 7,3 раза ниже по сравнению с дозой вакцины, используемой без цитокинов (1:365 и 1:50, соответственно). Таким образом, иммунизация экспериментальных животных вакциной в сочетании с комплексом цитокинов (рч1L-1, рч1L-2, рчТМЕа) сопровождалась повышением протективного эффекта вакцинации.
При указанной схеме иммунизации у экспериментальных животных исследовали показатели клеточного иммунного ответа. Результаты оценки функциональной активность Лф селезенки мышей в РБТЛ представлены в табл. 1. Как видно из табл. 1, в группе животных, иммунизированных вакциной КОКАВ в сочетании с комплексом цитокинов, наблюдается усиление как индуцированной антигеном и митоге- ном, так и спонтанной пролиферации Лф по сравнению с контрольной группой интактных мышей (p < 0,05). В контрольной группе животных, иммунизированных только КОКАВ, также отмечено повышение уровня пролиферации Лф по сравнению с интактными животными, однако средние значения исследуемых показателей были ниже, чем в группе мышей, иммунизированных КОКАВ в сочетании с цитокинами. Введение животным только цитокинов без вакцины не вызывало статистически значимого изменения уровня пролиферативного ответа спле- ноцитарных Лф мышей на ФГА и специфический антиген (p > 0,05).
Рис. 1. Процент выживших животных, иммунизированных вакциной в разведении 1:50 и 1:500 в сочетании с комплексом цитокинов, по сравнению с контролем
Результаты определения численности субпопуляций Т-Лф (Т-хелперов и Т-Лф с цитотоксической/супрессорной активностью) во фракции спленоцитарных Лф мышей линии СВА, иммунизированных вакциной КОКАВ, представлены в табл. 2. Как видно из табл. 2, в опытной группе животных, иммунизированных вакциной в сочетании с комплексом цитокинов, включающим рч1L-^, рч1L-2 и рчТМЕа, наблюдается статистически достоверное увеличение процентного содержания Т-хелперов и Т-Лф с цитотоксической/супрессорной активностью (p < 0,05).
Таблица 1 Пролиферативный ответ спленоцитарных лимфоцитов мышей, иммунизированных вакциной КОКАВ или КОКАВ в сочетании с цитокинами
Примечание
(к табл. 1 и 2). Достоверность различий (p < 0,05): * — по отношению к группе интактных мышей, ** — по отношению к группе мышей, иммунизированных КОКАВ без цитокинов. В таблице представлены результаты 3-х экспериментов.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что при вакцинации КОКАВ, используемой изолированно или в сочетании с цитокинами, не наблюдается изменения иммунорегуляторного индекса, поскольку увеличение процентного содержания Т-хелперов сопровождается повышением количества цитотоксических/супрессорных Т-Лф селезенки экспериментальных животных. Проведено исследование количественного содержания клеток, экспрессирующих антигены МНС класса II (продукты генов ІА- и ІЕ-субрайонов), в популяции Лф и Мф селезенки животных, иммунизированных вакциной КОКАВ в сочетании с цитокинами. Оценивали соотношение указанных показателей у животных, вакцинированных КОКАВ, и интактных животных (контрольная группа), которым вводили физиологический раствор.Количество 1а-положительных клеток среди Лф селезенки интактных животных составляло 18-21 %, а среди Мф — 46-53 %. При введении цитокинов, вакцины КОКАВ или вакцины в сочетании с комплексом цитокинов (рчІL-ір, рчІL-2 и рчТМЕа) количественное содержание Іа-положительных клеток возрастало по сравнению с группой интактных животных. Наиболее выраженноестимулирующее действие на содержание клеток,экспрессирующих ІА- и, особенно, ІЕ-антигеновна спленоцитарных Лф и Мф, отмечено в группеживотных, которым вводили комплекс цитокинов.Количество Іа-положительньїх клеток в исследуемых популяциях составило 30-36 % среди Лф и78-85 % среди Мф.В табл. 3 представлены относительные показатели, характеризующие соотношение количестваІа-положительних клеток (ІА- и ІЕ-специфичности) среди спленоцитарных Лф и Мф в опытных иконтрольных группах мышей линии СВА. Контролем служила группа интактных животных, которым вводили физиологический раствор. Как видноиз табл. 3, в группе животных, иммунизированныхвакциной КОКАВ в сочетании с комбинацией цитокинов (рчІL-ір, рчІL-2 и рчТМЕа), выявлено увеличение числа клеток, несущих ІА- и !Е-антигены,по сравнению с контрольной группой интактныхмышей. В группе животных, иммунизированныхКОКАВ без цитокинов, наблюдается увеличениеколичества клеток, экспрессирующих ІЕ-АГ каксреди Лф, так и среди Мф. Следует отметить, чтонаиболее значительное увеличение числа клеток, экспрессирующих АГ класса II, наблюдается в группе мышей, которым был введен только комплекс цитокинов без вакцины.
Таблица 2Количественное содержание субпопуляций Т-хелперов и Т-лимфоцитов с цитотоксической/супрессорной активностью во фракции спленоцитарных лимфоцитов мышей линии CBA, иммунизированных КОКАВ или КОКАВ в сочетании с цитокинами
Таблица 3Соотношение количества клеток, экспрессирующих антигены МНС класса II (IA- и IE-специфичности), среди спленоцитарных лимфоцитов и макрофагов мышей линии CBA, иммунизированных вакциной КОКАВ или КОКАВ в сочетании с комплексом цитокинов
Примечание.
Результаты 3-х экспериментов представлены в виде индекса соотношения показателей опытных и контрольных (интактные мыши) групп животных. * — различие достоверно (p < 0,05) по отношению к группе мышей, иммунизированных вакциной без цитокинов.
На рис. 2 представлены результаты экспериментальных исследований, в которых животных иммунизировали вакциной КОКАВ в сочетании с одним из монопрепаратов цитокинов — рчІЬ-l?, рчТОТа, Та или Ta-TNF-Ta. Как видно из рис. 2, при иммунизации животных вакциной КОКАВ в сочетании с монопрепаратами цитокинов рчІЬ-l? или рчTNFa наблюдается повышение эффективности вакцинации. Отмечено увеличение выживаемости экспериментальных животных в указанных группах по сравнению с контрольной группой, вакцинированной КОКАВ без цитокинов. Процент выживших мышей в группе с рчІЬ-l? при использовании вакцины в разведениях 1:25 и 1:125 был в 1,6 раза выше показателей в контроле (45,5 и 27,3 %; 40,0 и 25,0 %, соответственно). В группе с рчTNFa при разведении вакцины 1:25 указанный показатель был в 1,7 раза выше показателя контрольной группы (46,2 и 27,3 %, соответственно). Повышения эффективности вакцинации не отмечено при использовании вакцины в разведении 1:125 в сочетании с рчTNFa, также как при вакцинации на фоне введения препаратов Ta или Ta-TNF-Ta.
Показатель КР50 в группах животных, иммунизированных вакциной в сочетании с рчTNFa или рчІЬ-^, увеличился в 1,2—1,8 раза по сравнению сконтрольной группой, иммунизированной КОКАВ(1:29, 1:46 и < 1:25, соответственно).При введении вакцины в разведении 1:25 в сочетании с цитокинами отмечено увеличение титроввирус-нейтрализующих АТ. Наиболее эффективными были препараты рч1L-1р и рчТМЕа (увеличение титров АТ в 2,7 и 6,9 раз, соответственно).При использовании вакцины в разведении 1:125в группах с рчТМЕа и рч1L-1р титры АТ были в2,4-3,7 раза выше аналогичных показателей контрольной группы. В группах с Та-ТМЕ-Та и Татитры АТ были на уровне контроля.Таким образом, иммунизация экспериментальных животных вакциной в сочетании с монопрепаратами цитокинов сопровождалась повышениемпротективного эффекта вакцинации.Результаты исследования клеточного иммунногоответа по показателям функциональной активности Лф в РБТЛ у животных, иммунизированныхвакциной КОКАВ в сочетании с монопрепаратамицитокинов, представлены в табл. 4. Уровень пролиферативной активности Лф селезенки мышей какспонтанной, так и при воздействии митогенов (ФГА,КонА, ЛПС) или специфического антигена оценивали путем вычисления индекса стимуляции поотношению к аналогичным показателям интактнойгруппы мышей, которым вводили физиологическийраствор. Как видно из табл. 4, наиболее выраженныйстимулирующий эффект по показателям антигени митоген-индуцированной, а также спонтаннойпролиферации Лф выявлен в группе мышей, иммунизированных вакциной КОКАВ в сочетании срч1L-1р. Различие показателей уровня пролиферации клеток в опытной группе животных, иммунизированных вакциной КОКАВ с одновременнымвведением препарата рч1L-1р, с аналогичнымипоказателями контрольной группы, иммунизированных вакциной КОКАВ без цитокинов, статистически достоверно (р < 0,05). Активация показателейклеточного иммунного ответа в указанной группесочетается с усилением протективного эффекта иболее высокой продукцией вирус-нейтрализующихАТ по сравнению с группой мышей, иммунизированных только вакциной КОКАВ. Повышениеуровня пролиферативного ответа Лф, спонтанногои Кон А-индуцированного, отмечено также в группе мышей,вакцинированных КОКАВ нафоне введения препарата Та.Показатели указанной группыживотных статистически значимо превышали аналогичныепоказатели контрольной группы(р < 0,05).Таким образом, результатыисследований на экспериментальных животных показали, чтоиспользование рекомбинантныхцитокинов p4lL-1? и p4TNFa в виде монопрепаратов, а также комплекса цитокинов, включающего p4lL-1?, p4lL-2 и p4TNFa, в качестве адLювантов способно усиливать защитный эффект антирабической вакцины КОКАВ. Вакцинация КОКАВ с цитокинами увеличивала выживаемость животных при последующем их заражении фиксированным вирусом бешенства.
Рис. 2. Процент выживших животных, иммунизированных вакциной в разведении 1:25и 1:125 в сочетании с монопрепаратами цитокинов, по сравнению с контролем
Таблица 4Индекс стимуляции пролиферации лимфоцитов селезенки мышей, иммунизированных вакциной КОКАВ в сочетании с препаратами цитокинов
При этом значительно возрастало количество выживших животных (в 1,5-2 раза) и существенно снижалась величина предельного разведения вакцины, обеспечивающая 50 %- ную выживаемость животных (КР). Наблюдаемый протективный эффект при использовании вакцины КОКАВ в сочетании с комплексом цитокинов или рчЗL-l? сопровождался усилением как индуцированной антигеном и митогенами, так и спонтанной пролиферации лимфоцитов, увеличением числа Т-хелперов и Т-лимфоцитов с цитотоксической/ супрессорной активностью, повышением титра специфических вирус-нейтрализующих антител. Отмечено также увеличение численного содержания клеток, экспрессирующих 1а-антигены (в основном, IE-специфичности) среди лимфоцитов и макрофагов селезенки животных, вакцинированных на фоне введения цитокинов, по сравнению с группой мышей, иммунизированных вакциной КОКАВ без цитокинов.
Примечание.
* — Различие достоверно (р < 0,05) по отношению к контрольной группе. Представлены результаты 3-х экспериментов.
Выводы
Сочетанное использование при иммунизации вакциной КОКАВ рекомбинантных цитокинов рчІЬ-^ и рчTNFa в виде монопрепаратов, а также комплекса цитокинов (рчІЬ-^, рчІЬ-2, рчTNFa) повышает протективное действие культуральной антирабической вакцины.
Развитие поствакцинального иммунитета у животных, наблюдаемое при использовании антираби- ческой вакцины в сочетании с рекомбинантными цитокинами, сопровождается усилением специфического и неспецифического клеточного иммунного ответа.
У животных, иммунизированных КОКАВ на фоне введения цитокинов, наблюдается усиление пролиферации лимфоцитов, индуцированной мито- генами, антигеном и спонтанной, увеличение числа T-хелперов и T-клеток с цитотоксической/супрессорной активностью, а также увеличение числа Іа- положительных клеток во фракции лимфоцитов и макрофагов селезенки.
Отмечено повышение синтеза специфических вирус-нейтрализующих антител при вакцинации мышей на фоне введения цитокинов (рчІL-1р или рчTNFa).
ЛИТЕРАТУРА
Авдеева Ж.И., Акользина С.Е., Алпатова Н.А., Медуницын Н.В. Оптимизация вакцинального процесса с помощью цитокинов // Russ. J. Immunol. — 1999. — Vol. 4, suppl. 1. — P. 54.
Медуницын Н.В. Вакцинология. — М.: Триада-Х, 2004. — 446 с.
Медуницын Н.В., Акользина С.Е., Авдеева Ж.И. и др. Цитокины в современной вакцинологии // Мат. 2 Междунар. конф. «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями», посв. 75-летию Института им. Пастера. — СПб., 1998. — С. 51.
Шестопалов А.М., Рассадкин Ю.Н., Устинова Е.Н. и др. Влияние фактора некроза опухолей альфа на эффективность вакцинации против бешенства // Вопр. вирусол. — 2002. — № 3. — С. 37-40.
Ярилин А.А. Основы иммунологии. — М.: Медицина, 1999. — 608 с.
Bonnem E.M., Chaudry I.A., Stupak E. Use of GM-CSF as a vaccine adjuvant // Пат. 5679356 США, МПК6 А61К 38/19, А61К 39/145.
Luo W., Fine J., Garg M. et al. Interleukin-10 enhances immune responses to pneumococcal polysaccharides and sheep erythrocytes in young and aged mice // Cell. Immunol. — 1999. — Vol. 195, № 1. — P. 1-9.
9. Nash A.D., Lofthouse S.A., Barcham G.J. et al. Recombinant cytokines as immunological adjuvants // Immunol. Cell Biol. — 1993. — Vol. 71, pt. 5. — P. 367-379.
Nunberg J., Doyle M.V., York S.M. York C.J. Interleukin 2 acts as adjuvant to increase the potency of inactivated rabies virus vaccine // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1989. — Vol. 86, № 11. — P. 4240-4243.
Playfair J.H., De Souza J.B. Recombinant gamma interferon is a potent adjuvant for a malaria vaccine in mice // Clin. Exp. Immunol. — 1987. — Vol. 67, № 1. — P. 5-10.
Reed L.J., Muench H. A simple method of estimating fifty per cent endpoints // Amer. J. Hyg. — 1938. — Vol. 27. — P.493-497.
Sagara T., Mori S., Ohkawara S. et al. A limited role of IL-1 in immune enhancement by adjuvants // Immunology. — 1990. — Vol. 71, № 2. — P.251-257.
Rao K.V., Nayak A.R. Enhanced immunogenicity of a sequence derived from hepatitis B virus surface antigen in a composite peptide that includes the immu- nostimulatory region from interleukin 1 // Proc. Natl. Acad. Sri. USA. — 1990. — Vol. 87, № 14. — P. 5519-5522.
Weinberg A., Merigan T.C. Recombinant interleukin 2 as an adjuvant for vaccine-induced protection. Immunization of guinea pigs with herpes simplex virus subunit vaccines // J. Immunol. — 1988. — Vol. 140, № 1. — P.294-299.
The state of cellular immunity of mice immunized with rabies vaccine supplementedwith cytokinesZh.I. Avdeeva, S.E. Akol'zina, N.A. Alpatova, T.N. Nikitina, N.V. Medunitsyn
L.A. Tarasevich State Research Institute for Standardization and Control of Medical Biological Preparations,Moscow
It has been shown in experimental studies that immunization with cell culture concentrated rabies vaccine(CCCRV) with simultaneous injection of recombinant human IL-ip or TNFa as monopreparations as well aswith cytokine complex (rhIL-ip, rhIL-2, rhTNFa) increased the protective effect of CCCRV. In animals thatwere given CCCRV simultaneously with cytokines a strengthening of antigen- and mitogen-induced andspontaneous proliferation of lymphocytes, an increase in the numbers of T helpers and T cytotoxic/suppressor cells, augmentation of specific virus neutralizing antibody titer and an increase in the number ofIa-positive cells in the fraction of spleen lymphocytes and macrophages were observed. (Cytokines andInflammation. 2008. Vol. 7, № 4. P.15-20.)