НЦ клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, г. Новосибирск
Идея о возможном использовании стволовых клеток (СК) с целью стимуляции регенерации печеночной ткани основана на выявленной способности СК дифференцироваться in vitro и in vivo в эпителиальные клетки печени и подтверждена данными экспериментальных исследований на животных. Целью настоящего исследования явилась оценка безопасности и эффективности данного подхода при лечении больных циррозом печени (ЦП). В исследование были включены 28 больных (17 мужчин и 11 женщин) в возрасте от 27 до 67 лет, у которых диагностировался хронический гепатит с исходом в ЦП (класс А — у 10, класс В — у 13 и класс С — у 5 пациентов). Причиной ЦП у 25 % пациентов явился токсический гепатит, у 32 % — хронические вирусные гепатиты (В, С или сочетанные варианты — В+С, В+D), у 27 % — гепатиты смешанной этиологии (вирусный+токсический). Стандартная базисная терапия дополнялась введением мононук- леарных клеток костного мозга, содержащих от 31 до 38 х 106 CD34+-клеток. Трансплантация СК не сопровождалась развитием каких-либо побочных реакций. Субфебрильная температура после введения клеток регистрировалась только у
из 28 пациентов. Интегральная оценка 20 пациентов, находившихся под наблюдением более 6 месяцев, выявила наличие позитивного ответа в виде купирования астеновеге- тативного синдрома и существенного уменьшения признаков печеночно-клеточной недостаточности у 40 % больных. Удовлетворительный ответ в виде ослабления проявлений асте- новегетативного синдрома и умеренного снижения/стабилизации печеночно-клеточной недостаточности отмечался у 30 %, отсутствие ответа — у 30 % больных. Позитивный ответ регистрировался преимущественно у больных ЦП со стадией А, удовлетворительный — со стадией В и отсутствие ответа у больных со стадией С. Больные с различным классом тяжести ЦП характеризовались сходной структурой по полу, возрасту и причинам ЦП, однако, достоверно различались по количеству и функциональным параметрам СБ34-кле- ток. Так, по мере прогрессирования ЦП отмечалось достоверное увеличение количества СБ34-клеток при неизменном содержании СВ34+СВ38"-клеток. При этом регистрировалось снижение доли СБ34-клеток в G0/G1 и увеличение доли клеток в S/G2M фазе клеточного цикла.
А.А. Останин, Е.Р. Черных ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск
Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) составляют минорную субпопуляцию костномозговых клеток, которые играют важную роль в функционировании стволовых гемопоэ- тических клеток. За последние годы появились данные о том, что МСК не иммуногенны и, более того, обладают способностью ингибировать пролиферацию Т-клеток, однако имеющиеся в литературе факты неоднозначны и зачастую противоречивы. Целью настоящего исследования явилась характеристика супрессорной активности МСК в различных тест- системах. МСК получали стандартно культивированием прилипшей фракции мононуклеарных клеток (МНК) аспирата костного мозга после 1—2 пассажей. Фенотипическая характеристика МСК включала оценку CD34, CD14, CD73, CD90, CD3, CD20, CD16 и HLA-DR антигенов методом ПЦР. Супрессорную активность МСК и их культуральных супернатантов оценивали по ингибиции пролиферации МНК доноров, активированных аллоантигенами (в смешанной культуре лимфоцитов, СКЛ), а также стимулированных КонА (15 мкг/мл) или анти-CD3 антителами (1 мкг/мл). Фенотипический анализ показал, что полученные МСК характеризовались наличием CD73 (81,0 ± 5,9 %) и СD90 (56,0 ± 4,9 %) и при этом не экспрессировали CD34 (0,5 ± 0,1 %), СD3 (2,7 ± 2,2 %), СD20 (1,3 ± 0,5 %) и СD16 (0,4 ± 0,1 %). Количество CD14+-клеток варьировало от 0 до 40 % (в среднем 11,9 ± 4,9 %). Пассированные МСК практически не экспрессировали HLA-DR антигены (5,9 ± 1,7 %) и не стимулировали пролиферацию в СКЛ (индекс стимуляции 0,8 ± 0,02). Более того, все тестированные клетки обладали супрессорной активностью как в двунаправленной СКЛ (супрессия от 47 до 65 %), так и в культурах КонА-стимулированных МНК (супрессия от 67 до 98 %). Супернатанты МСК, добавляемые в дозе 30 % (v/v), также снижали интенсивность пролиферации. Однако, если в СКЛ и в КонА-стимулированных культурах супрессорная активность супернатантов МСК выявлялась в 75 % случаев, то в культурах анти-CD3-стимулированных МНК — только в
%. Таким образом, МСК обладают как прямой, так и опосредованной растворимыми факторами супрессорной активностью. Гетерогенность МСК в отношении супрессорной активности культуральных супернатантов, по-видимому, обусловлена вариабельностью уровня содержащихся в них ци- токинов, поскольку, по данным предварительного Bio-Plex анализа, средняя концентрация некоторых из них (TNFa, IL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, IL-12 (p70), IL-13, IL-17) не превышала 10 пкг/мл, тогда как уровень других цитокинов (IL-1?, IFNy, G-CSF, GM-CSF, IL-6, IL-8, МСР-1, MIP-1?) был значимо выше и отличался выраженным разбросом индивидуальных значений.