загрузка...
 
Трансплантация аутологичных клеток костного мозга в комплексном лечении пациентов с циррозом печени
Повернутись до змісту

Трансплантация аутологичных клеток костного мозга в комплексном лечении пациентов с циррозом печени

Е.Р. Черных, А.И. Пальцев, Н.М. Старостина, А.А. Останин, О.Ю. Леплина, Е.Я. Шевела, И.В. Миледина, О.Б. Селихова,

С.А. Демидчик2, С.Д. Никонов, В.С. Кожевников1, А.Д. Кулагин,

И.А. Лисуков, В.А. Козлов

ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН;

НЦ клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, г. Новосибирск

Идея о возможном использовании стволовых клеток (СК) с целью стимуляции регенерации печеночной ткани основана на выявленной способности СК дифференцироваться in vitro и in vivo в эпителиальные клетки печени и подтверждена данными экспериментальных исследований на животных. Целью настоящего исследования явилась оценка безопасности и эффективности данного подхода при лечении больных циррозом печени (ЦП). В исследование были включены 28 больных (17 мужчин и 11 женщин) в возрасте от 27 до 67 лет, у которых диагностировался хронический гепатит с исходом в ЦП (класс А — у 10, класс В — у 13 и класс С — у 5 пациентов). Причиной ЦП у 25 % пациентов явился токсический гепатит, у 32 % — хронические вирусные гепатиты (В, С или сочетанные варианты — В+С, В+D), у 27 % — гепатиты смешанной этиологии (вирусный+токсический). Стандартная базисная терапия дополнялась введением мононук- леарных клеток костного мозга, содержащих от 31 до 38 х 106 CD34+-клеток. Трансплантация СК не сопровождалась развитием каких-либо побочных реакций. Субфебрильная температура после введения клеток регистрировалась только у

из 28 пациентов. Интегральная оценка 20 пациентов, находившихся под наблюдением более 6 месяцев, выявила наличие позитивного ответа в виде купирования астеновеге- тативного синдрома и существенного уменьшения признаков печеночно-клеточной недостаточности у 40 % больных. Удовлетворительный ответ в виде ослабления проявлений асте- новегетативного синдрома и умеренного снижения/стабилизации печеночно-клеточной недостаточности отмечался у 30 %, отсутствие ответа — у 30 % больных. Позитивный ответ регистрировался преимущественно у больных ЦП со стадией А, удовлетворительный — со стадией В и отсутствие ответа у больных со стадией С. Больные с различным классом тяжести ЦП характеризовались сходной структурой по полу, возрасту и причинам ЦП, однако, достоверно различались по количеству и функциональным параметрам СБ34-кле- ток. Так, по мере прогрессирования ЦП отмечалось достоверное увеличение количества СБ34-клеток при неизменном содержании СВ34+СВ38"-клеток. При этом регистрировалось снижение доли СБ34-клеток в G0/G1 и увеличение доли клеток в S/G2M фазе клеточного цикла.

Супрессорная активность мезенхимальных стволовых клеток костного мозга

Е.Я. Шевела, М.А. Тихонова, О.Ю. Леплина,

А.А. Останин, Е.Р. Черных ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) составляют минорную субпопуляцию костномозговых клеток, которые играют важную роль в функционировании стволовых гемопоэ- тических клеток. За последние годы появились данные о том, что МСК не иммуногенны и, более того, обладают способностью ингибировать пролиферацию Т-клеток, однако имеющиеся в литературе факты неоднозначны и зачастую противоречивы. Целью настоящего исследования явилась характеристика супрессорной активности МСК в различных тест- системах. МСК получали стандартно культивированием прилипшей фракции мононуклеарных клеток (МНК) аспирата костного мозга после 1—2 пассажей. Фенотипическая характеристика МСК включала оценку CD34, CD14, CD73, CD90, CD3, CD20, CD16 и HLA-DR антигенов методом ПЦР. Супрессорную активность МСК и их культуральных супернатантов оценивали по ингибиции пролиферации МНК доноров, активированных аллоантигенами (в смешанной культуре лимфоцитов, СКЛ), а также стимулированных КонА (15 мкг/мл) или анти-CD3 антителами (1 мкг/мл). Фенотипический анализ показал, что полученные МСК характеризовались наличием CD73 (81,0 ± 5,9 %) и СD90 (56,0 ± 4,9 %) и при этом не экспрессировали CD34 (0,5 ± 0,1 %), СD3 (2,7 ± 2,2 %), СD20 (1,3 ± 0,5 %) и СD16 (0,4 ± 0,1 %). Количество CD14+-клеток варьировало от 0 до 40 % (в среднем 11,9 ± 4,9 %). Пассированные МСК практически не экспрессировали HLA-DR антигены (5,9 ± 1,7 %) и не стимулировали пролиферацию в СКЛ (индекс стимуляции 0,8 ± 0,02). Более того, все тестированные клетки обладали супрессорной активностью как в двунаправленной СКЛ (супрессия от 47 до 65 %), так и в культурах КонА-стимулированных МНК (супрессия от 67 до 98 %). Супернатанты МСК, добавляемые в дозе 30 % (v/v), также снижали интенсивность пролиферации. Однако, если в СКЛ и в КонА-стимулированных культурах супрессорная активность супернатантов МСК выявлялась в 75 % случаев, то в культурах анти-CD3-стимулированных МНК — только в

%. Таким образом, МСК обладают как прямой, так и опосредованной растворимыми факторами супрессорной активностью. Гетерогенность МСК в отношении супрессорной активности культуральных супернатантов, по-видимому, обусловлена вариабельностью уровня содержащихся в них ци- токинов, поскольку, по данным предварительного Bio-Plex анализа, средняя концентрация некоторых из них (TNFa, IL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, IL-12 (p70), IL-13, IL-17) не превышала 10 пкг/мл, тогда как уровень других цитокинов (IL-1?, IFNy, G-CSF, GM-CSF, IL-6, IL-8, МСР-1, MIP-1?) был значимо выше и отличался выраженным разбросом индивидуальных значений.



загрузка...