загрузка...
 
Состояние свертываемости крови
Повернутись до змісту

Состояние свертываемости крови

Тромбоциты, кровяные пластинки

В качестве приблизительного ориентира может служить соотношение между количеством тромбоцитов и количеством эритроцитов. При нормальном порядке на 100 эритроцитов должно приходиться 5 тромбоцитов (рис. 4.12, см. цветную вклейку I). Подсчет тромбоцитов: набрать в сухую пробирку 4 мл 1%-ного раствора оксалата аммония и 0,02 мл крови. Перемешать и оставить на 25—30 мин для гемолиза тромбоцитов. Разведенную кровь перемешать. Альтернативный метод: ииОРЕТТЕ®-ТN0 605855 (см. гл. 4.3.2). Наполнить счетную камеру и дать отстояться приблизительно 10— 20 мин во влажной камере для оседания тромбоцитов (чашка Петри с уложенной по краям смоченной водой фильтровальной бумагой). Сосчитать эритроциты на 5 полях (80 малых квадратов). Количество тромбоцитов рассчитывается в гигах на литр (Г/л). Подсчет тромбоцитов можно также осуществлять при помощи электронных аппаратов для подсчета клеток.

Протромбиновое время по Квику (валентность свертывания крови)

В цитратную плазму добавляется большое количество тромбокиназы ткани и ионов кальция, и замеряется время до обнаружения первых фибриновых нитей. Это время является в первую очередь мерой активности факторов свертываемости крови I, II, V, VII, X и служит для проверки экзогенной системы свертываемости крови. Определение: в пробирку Квика или шприц объемом 5 мл надо набрать 0,5 мл 0,1-молярного раствора оксалата натрия или 0,1-молярного раствора цитрата натрия, наполнить кровью непосредственно из иглы до отметки 5 мл, сразу же перемешать и после этого центрифугировать. Если нет возможности провести анализ немедленно, отделенную пипеткой от эритроцитов и обработанную цитратом плазму нужно поместить на хранение в холодильник при температуре 4°С. Исследование в любом случае должно быть произведено в течение 3 ч в продублированном виде. В две предварительно подогретые до температуры 37°С (на водяной бане) пробирки Квика набирается по 0,1 мл раствора цитратной плазмы. Через 20 сек добавляется по 0,2 мл предварительно подогретого кальциево-тромбспластинового раствора, включается секундомер, и наблюдают за протеканием процесса свертывания. Можно использовать изогнутую трубочку. Замеренное в двух пробирках до появления первых фибриновых нитей (коагул) время должно совпадать с точностью до 0,5 сек. Средняя величина определяется на основе эталонных кривых или на основе таблицы в процентах по отношению к нормальной активности и дает тем самым значение протромбинового времени. В зависимости от происхождения и активности применяемого тром- бопластина, метода и скорости реакции исследователя 100% значение протромбинового времени может находиться между 11 и 16 сек.

Составление эталонной кривой. За основу берутся показатели свежей оксалатной или цитратной плазмы нескольких здоровых животных (приблизительно 6). За счет разбавления этой плазмы физиологическим раствором в соотношении 1:2 получается 50%-ный стандарт, в соотношении 1:4— 25%-ный стандарт, в соотношении 1:8

12,5 %-ный стандарт. Если процентные значения отмечать по оси ординат в линейных интервалах обратных им величин, соответстующее время в секундах - по оси абсцисс системы координат, то получится эталонная кривая, относительно которой будет проводиться оценка конкретных показателей.

Частичное тромбопластиновое время

Групповой тест для оценки функции плазматических эндогенных факторов свертываемости: факторы свертываемости крови I, II, V, VII — XII. Частичное тромбопластиновое время не зависит от тромбоцитов и кальция. Определение. 0,1 мл цитратной плазмы плюс 0,1 мл взвеси каолина в 0,5 %-ном растворе трис-буфера, pH 7,2, выдерживаются 6 мин в термостате при температуре 37°С. Реагенты для определения частичного тромбопластино- вого времени следует добавлять согласно инструкции, время до наступления свертывания устанавливается так же, как и при определении протромбинового времени.

Тромбиновое время, время тром- бинов плазмы, время свертывания тромбинов плазмы

Фазовый тест для 2-ой фазы свертывания крови, то есть, для определения факторов свертываемости крови II, V и X. Определение: 0,2 мл цитратной плазмы (гл. 4.4.2) разогревать 5 мин в трубочке Квика до температуры 37°С,
добавить 0,2 мл раствора тромбина (температура 37°С) и установить время до наступления свертывания так же, как и при определении протромбинового времени.

4.4.5 Фибриноген

Фазовый тест для 3-ей фазы свертывания крови, то есть для определения фактора свертываемости крови

Определение осуществляется фотометрически, для чего берется не менее 0,5 мл плазмы, или путем селективного осаждения с последующей рефрактометрией по Шальму.

Метод Шалъма. Две микрогематокритные трубочки с цельной кровью отцентрифугировать и определить

Костный мозг

Анализ мазков костного мозга требует большого опыта и навыков. Рекомендуется отсылать мазки костного мозга в специальную лабораторию, имеющую соответствующее оборудование.

Получение мазков костного мозга. Бедренная кость: костный мозг может быть взят из вертельной ямки проксимальной части бедренной кости. Собака лежит на боку, лапой, из которой производится забор, кверху. После хирургической подготовки места пункции и небольшого надреза кожи над вертельной ямкой ровно посередине высшей точки большого вертела вводится игла для пункции костного мозга от середины большого вертела в направлении вертельной ямки, при этом ось иглы должна проходить параллельно диафизу бедренной кости. Под давлением и при помощи вращательных движений игла продвигается приблизительно на сантиметр в

Биохимическое исследование крови

Различные параметры, например, вирусные антитела или прогестерон, можно определить при помощи очень чувствительных серологических методов исследования, как, например, ЭЛИСА (ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay). В продаже имеются специальные наборы для проведения этих тестов, которые укомплектованы таким образом, чтобы благодаря подробным инструкци- значение гематокрита. Одна трубочка при помощи пилочки для вскрывания ампул разделяется на границе между плазмой и эритроцитами, и с помощью рефрактометра определяется общее содержание белка плазмы. Вторая трубочка на одну минуту ставится в водяную баню при температуре 56—58СС и после этого снова центрифугируется в течение примерно 5 мин. Эта трубочка распиливается на границе осадка раствора, и оставшийся в растворе общий белок замеряется рефрактометрически. Различие между общим белком из трубочки 1 и остаточным белком из трубочки 2 соответствует количеству фибриногена в плазме (90%) с другими осадочными веществами, выделившимися под действием температуры (10%). Этот простой метод является достаточно точным для условий клиники.

проксимальную часть бедренной кости. Затем мандрен удаляется, и с помощью шприца объемом 10 мл, в который добавлена капля раствора гепарина, набирается костный мозг. Примеси крови могут быть обусловлены сильным мышечным кровотечении в месте биопсии, когда при набирании применяется слишком большой вакуум или когда производится забор слишком большой пробы. Одновременно обязательно надо провести анализ крови и приготовить нормальный мазок крови для сравнения с мазком костного мозга. Проба костного мозга осторожно распределяется на нескольких предметных стеклах и тут же размазывается.

Окраска. В качестве стандартной окраски рекомендуется окраска при помощи М + О 010"С?шк, Те818тр1е15 или по Паппенгейму. Остальные мазки для специальных методов окрашивания оставляются в резерве.

ям исследования в лаборатории ветеринарной клиники можно было проводить просто, чисто и быстро. Результаты, как правило, являются достаточно точными с точки зрения требований, предъявляемых в клинике. Эти возможности в области биохимических и серологических исследований крови со временем наверняка будут приобретать все большее значение.



загрузка...