загрузка...
 
Влияние ингибитора циклооксигеназы-2 - мелоксикама на течение и исход комбинированного радиационного поражения
Повернутись до змісту

Влияние ингибитора циклооксигеназы-2 - мелоксикама на течение и исход комбинированного радиационного поражения

Р.С. Будагов, Л.П. Ульянова

Медицинский радиологический научный центр РАМН, г. Обнинск

Целью работы было изучение эффективности селективного ингибитора циклооксигеназы-2 — мелоксикама (М) как средства предупреждения воспаления и профилактики сепсиса при комбинированных радиационных поражениях (КРП). Эксперименты выполнены на мышах-самцах (СВАхС57В1/б1. Животных подвергали общему однократному облучению в дозе 7 Гр и затем наносили термический ожог 10 % поверхности тела. Исследовано влияние М на уровень ^-б и на выраженность некоторых проявлений реакций острой фазы. Установлено повышение концентрации 1Ь-б в сыворотке крови животных в первые б-24 ч после КРП. Показано, что однократное введение М за 1 ч до КРП не модифицирует накопление ^-б в сыворотке крови, не влияет на показатели степени лейкоцитоза, ранней гиперферментемии (уровня аланинаминотрансферазы) и не повышает содержание альбумина в сыворотке мышей с КРП. Использование ингибитора циклооксигеназы не привело к облегчению клинического течения патологии и улучшению интегрального исхода поражения. Независимо от использованной схемы введения М (за 1 ч до КРП, через 1-3 сут или через б-8 сут после КРП), все подопытные животные погибали на протяжении первых 15 сут наблюдения. Делается заключение о неэффективности применения М при КРП. (Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4, № 4. С. 7-10.)

Ключевые слова: комбинированные радиационные поражения, К-6, реакция острой фазы,

сепсис, мелоксикам.

 

 

 

Полимикробный сепсис относят к разряду тяжелейшей патологии — смертность от сепсиса достигает 30-50 %, и цифра эта с годами практически не уменьшается [7]. В условиях комбинированных радиационных поражений (КРП), когда у раненых или у обожженных развиваются нейтропения и эндогенная кишечная инфекция, риск развития сепсиса возрастает, что делает прогноз для выживания пострадавших еще более проблематичным.

В последние годы представления о природе сепсиса принципиально изменились — главную роль в этих представлениях стали играть не микробы и бактериальные токсины как таковые, а гипервос- палительная реакция на них со стороны моноцитов/макрофагов [5, 10, 13]. Исходя из такой постановки вопроса, можно утверждать, что и средства ранней (превентивной) терапии сепсиса при КРП должны отбираться из числа препаратов, обладающих способностью регулировать активность макрофагов и обеспечивающих системное подавление провоспалительной активности моноцитов/макрофагов, как минимум, на первые 72 ч после травмы [4, 8, 11]. Весьма заметное место в регуляции макрофагов занимает применение фармакологических средств, ограничивающих эффекты медиаторов воспаления (селективные ингибиторы цитоки- нов — TNFa и интерлейкинов, лекарственные препараты-ингибиторы циклооксигеназы и биосинтеза простагландинов, окиси азота и др.).

Целью настоящей работы было изучение эффективности ингибитора циклооксигеназы — ме- локсикама как средства для предупреждения воспаления и профилактики сепсиса при КРП. Мелоксикам (М) — нестероидный противовоспалительный препарат, является селективным ингибитором индуцибельной формы изофермента циклооксигеназы-2, редуцирует синтез простаг- ландинов, демонстрирует обезболивающую и противовоспалительную активность при внутри- желудочном применении. Учитывая характер патологии при КРП и роль бактериальных эндотоксинов в патогенезе КРП [1], важной предпосылкой для оценки эффективности М при КРП являются сведения о том, что M успешно подавляет некоторые воспалительные реакции, наблюдаемые после инъекции бактериального эндотоксина (ЛПС) подопытным животным [6, 9, 12].

Материалы и методы

Эксперименты выполнены на мышах-самцах (CBAxC57BL6)F1 массой тела 22-24 г. Животных подвергали общему однократному облучению в дозе 7 Гр на гамма-установке «ЛУЧ» с источником 60Со (мощность дозы составляла 0,45 Гр/мин). При моделировании КРП глубокий термический ожог 10% общей площади поверхности тела наносили с помощью мощной вспышки света. Шесть галлогеновых ламп устанавливались параллельно обжигаемой поверхности кожи, на расстоянии 10 мм от нее. Длительность световой вспышки составляла 2 секунды, термический ожог наносили сразу после облучения.

Нами проведено исследование содержания IL-6 в сыворотке крови и степени выраженности некоторых других проявлений острофазной реакции (лейкоцитарная реакция, ги- перферментемия печеночной аланинаминотрансаминазы (АЛТ), уменьшение концентрации отрицательного белка острой фазы — альбумина) у животных, подвергшихся КРП на фоне предварительного введения М.

Для забора материала на каждую точку наблюдения умерщвляли по 5 мышей. Полученные образцы крови оставляли на

ч при комнатной температуре для свертывания. Сыворотку крови отделяли центрифугированием, замораживали и хранили вплоть до проведения иммуноферментной реакции. Для определения концентрации IL-6 использовали коммерческие наборы реагентов «OPTEIA MOUSE IL-6 ELISA KIT» производства фирмы «Pharmingen» (Сан-Диего, США).

Измерения количества лейкоцитов в периферической крови выполнены на автоматическом гематологическом анализаторе MINOS STX (Франция). Активность АЛТ и концентрацию альбумина в сыворотке крови определяли с помощью стандартных наборов реагентов фирмы Sigma-Diagnostics (США).

Лечебный препарат М (торговая марка «Мелокс») растворяли в физиологическом растворе хлорида натрия из расчета 10 мг/кг, вводили внутрижелудочно через зонд, в объеме 0,2 мл. При выборе дозы М руководствовались данными литературы. В частности, опубликованы подробные результаты изучения фармакологии М на разных видах животных. Оптимальной дозой для мышей при интрагастральном способе введения препарата принята доза 10 мг/кг [2].

Введение М в опытах по оценке 30-суточной выживаемости осуществляли по трем различным схемам: однократно за 1 ч до КРП (ожидаемая ингибиция циклооксигеназы в период острофазной реакции), трехкратно через 1, 2 и 3 сут после КРП (ожидаемая ингибиция периода пострадиационной асептической эндотоксемии) и трехкратно через 6, 7 и 8 сут после КРП (ожидаемая ингибиция периода бактериальной эндотоксемии с бактериемией) [14, 15].

Полученный цифровой материал обработан с помощью общепринятых методов вариационной статистики. Различия между сравниваемыми группами оценивали с помощью критерия Стьюдента и метода «one-way ANOVA» (пакет программ MicroCaL Origin 3.0). Достоверность различий по 30- суточной выживаемости мышей в сравниваемых группах выявляли с помощью критерия Фишера. Значения р < 0,05 рассматривались как статистически значимые.

Результаты и обсуждение

Как показали собственные результаты наблюдений (табл. 1), уровень Пі-6 повысился втрое по сравнению с биоконтролем уже через 6 ч после КРП, а через 24 ч превосходил наивысшее значение на калибровочной кривой измерения концентрации Пі-6 (> 2000 пг/мл). Введение М за 1 ч до КРП не изменило ни характера, ни степени проявлений увеличения продукции и накопления сывороточного ^-6 в период реакции острой фазы.

Не выявлено существенных модифицирующих эффектов М на неспецифические реакции острой фазы. Как видно из табл. 2, количество лейкоцитов и активность АЛТ повышались практически в равной мере через 6 ч после КРП (контроль) и КРП в условиях предварительного введения М. Назначение противовоспалительного средства за

ч до КРП не предотвращало снижение т.н. «отрицательного белка острой фазы» альбумина в сыворотке крови. Через 24 ч после КРП концентрация его составляла 2,55 ± 0,25 г/л и статистически значимо не отличалась от значения контроля (КРП без М, 2,49 ± 0,42 г/дл).

На рис. 1 приведены обобщенные данные трех опытов по оценке влияния М на 30-суточную выживаемость мышей с комбинированным радиационно-термическим поражением (КРТП). Использование ингибитора циклооксигеназы не привело

Таблица 1

Влияние мелоксикама на изменения концентрации ^-б (пг/мл) в сыворотке крови мышей после КРП

Серия

Через 3 ч

Через 6 ч

Через 24 ч

Мелоксикам + КРП

785 ± 157

1483 ± 234

> 2000

КРП

734 ± 208

1693 ± 423

> 2000

Биоконтроль (норма)

515 ± 44

 

 

Таблица 2

 

Влияние мелоксикама на проявления реакции острой фазы (лейкоцитоз, ферментемия и содержание альбумина в сыворотке крови мышей) при КРП

Серия

опытов

Лейкоциты (через 6 ч)

АЛТ, ЕД/л (через 6 ч)

Альбумин, г/дл (через 24 ч)

Интактные

5600 ± 575

35 ± 5

3,07 ± 0,28

КРП

9350 ± 795

279 ± 58

2,49 ± 0,42

Мелоксикам + КРП

9290 ± 508

248 ± 47

2,55 ± 0,25


к облегчению клинического течения патологии и улучшению интегрального исхода поражения. Независимо от использованной схемы введения М все подопытные животные погибали на протяжении первых 15 сут наблюдения.

Ранее нами были выполнены опыты по оценке влияния антител к провоспалительному ци- токину IL-6 на выживаемость мышей с КРТП [2]. IL-6 относят к интегральным медиаторам из числа цитокинов, выделяющихся во время реакции острой фазы на повреждение. Моноклональные антитела к IL-6 [Mouse IL-6 MAb (Clone MP5- 20F3), R&D, USA] вводили внутрибрюшинно, из расчета 10 мкг/мышь, в 0,2 мл физиологического раствора в те же сроки, что и М.

Подпись: Рис. 2. Выживаемость мышей с КРП (1) при введении антител против 11_-б за 1 ч до КРП (2), через 1-3 сут (3) и на 6-8 сут после КРП (4)Применение моноклональных антител для нейтрализации эндогенного IL-6 in vivo (рис. 2) способствовало существенному повышению выживаемости животных с КРТП — до 30-х суток выжило по 60 % мышей при назначении антител за 1 ч до КРТП и через 1, 2 и 3 сут после КРТП. Введение антител через 6, 7 и 8 сут после КРТП обеспечило наибольшую выживаемость — 90 %, тогда как среди нелеченых мышей с КРТП к исходу второй недели гибель составила 100 % (р < 0,01).

Подпись: Сроки наблюдения после КРТП (сут)Приведенные результаты прямо указывают на важную роль реакции острой фазы и системной воспалительной реакции в патогенезе КРП. В частности, как можно предположить на основании рис. 2, блокада активности IL-6 на раннем этапе развития КРТП предотвращает «прайминг» макрофагов и повышение чувствительности к сепсису, что и обусловливает повышение выживаемости животных.

Обнаруженная в настоящей работе неэффективность селективного ингибитора циклооксиге- назы-2 может свидетельствовать о сравнительно малозначительном участии каскада метаболических превращений арахидоновой кислоты и биосинтеза простагландинов в процессах, имеющих непосредственное отношение к «праймингу» макрофагов в отношении развития сепсиса.

 

Сроки наблюдения (сут)

-#   КРТП (контроль) М за 1 час + КРТП

     М через 1,2,3 сут + КРТП -0  М через 6,7,8 сут + КРТП

Рис. 1. Влияние мелоксикама на З0-суточную выживаемость мышей с КРП

Мелоксикам вводили в дозе 10 мг/кг, внутрибрюшинно, за 1 ч до КРП, через 1, 2, З сут после КРП и через б, 7, В сут после КРП.

Авторы выражают благодарность лаборан- там-исследователям Т.Н. Клячиной, Т.А. Ереминой и С.В. Андреевой за постоянную помощь в проведении экспериментов и первичной обработке материала.

 

 

 

ЛИТЕРАТУРА

 

 

 

Будагов Р.С., Нестеренко В.С., Пискарев А.В., Чуреева Л.Н. Особенности развития бактериальной энтероэндотоксемии при комбинированных радиационно-термических поражениях // Радиобиология. — 1993. — Т. 33, вып. 2. — С. 271-275.

Будагов Р.С., Ульянова Л.П. Интерлейкин-б (IL-6) и отягощение исходов комбинированных радиационно-термических поражений // Цитокины и воспаление. — 2004. — Т. 3, № 4. — С. 25-28.

Busch U., Schmid J., Heinzel G. et al. Pharmacokinetics of meloxicam in animals and the relevance to humans // Drug Metab. Dispos. — 1998. — Vol. 26, № 6. — P. 576-584.

Faist E., Kim C. Therapeutic immunomodulatory approaches for the control of systemic inflammatory response syndrome and the prevention of sepsis // New Horiz. — 1998. — Vol. 6, № 2, Suppl. — S97-S102.

Freeman B.D., Natanson C. Anti-inflammatory therapies in sepsis and septic shock // Expert Opin. Investig. Drugs. — 2000. — Vol. 9, № 7. — P. 1651-1663.

Gupta S.K., Bansal P., Bhardwaj R.K. et al. Comparison of analgesic and antiinflammatory activity of meloxicam gel with diclofenac and piroxicam gels in animal models: pharmacokinetic parameters after topical application // Skin Pharmacol. Appl. Skin Physiol. — 2002. — Vol. 15, № 2. — P. 105-111.

Hardaway R.M. A review of septic shock // Am. Surg. — 2000. — Vol. 66, № 1. — P. 22-29.

Hasko G., Kuhel D.G., Nemeth Z.H. et al. Inosine inhibits inflammatory cytokine production by a posttranscriptional mechanism and protects against endotoxin-induced shock // J. Immunol. — 2000. — Vol. 164. — P. 1013-1019.

Konigsson K., Odensvik K., Kindahl H. Endocrine, metabolic and clinical effects of intravenous endotoxin injection after pre-treatment with meloxicam in heifers // J. Vet. Med. A Physiol. Pathol. Clin. Med. — 2002. — Vol. 49, № 8. — P. 408-414.

Kox W.J., Volk T., Kox S.N., Volk H.D. Immunomodulatory therapies in sepsis // Intensive Care Med. — 2000. — Vol. 26, Suppl. 1. — S124-S128.

Matsubara T. Monoclonal antibodies against inflammatory mediators for the treatment of patients with sepsis // Nippon Rinsho. — 2002. — Vol. 60, № 3. — P. 578-584.

Ogino K., Saito K., Osugi T., Satoh H. Meloxicam (Mobic): a review of its pharmacological and clinical profile // Nippon Yakurigaku Zasshi. — 2002. — Vol. 120, № 6. — P. 391-397.

Periti P. Current treatment of sepsis and endotoxaemia // Expert Opin. Phar- macother. — 2000. — Vol. 1, № 6. — P. 1203-1217.

 

 

 


Walker R.I. The contribution of intestinal endotoxin to mortality in hosts with 15. Walker R.I., Porvaznik M. Association of bacteria and endotoxin with posttrau-

compromised resistance: a review // Exp. Hematol. — 1978. — Vol. 6, № 2. —     ma events // In: Traumatic injury: infection and other immunologic sequelae

P. 172-184.   / Ed. J.L. Ninnemann. — Baltimore: University Park Press, 1983. — P. 1-15.

The influence of cyclooxygenase-2 inhibitor — meloxicam on the course and outcomes of combined radiation injury

R.S. Budagov, L.P. Ulianova Medical Radiological Research Center RAMS, Obninsk

The aim of the study was to evaluate selective cyclooxygenase-2 inhibitor — meloxicam's (M) capability to prevent the inflammatory response and sepsis elicited by combined injury (CI). Whole body Y-irradiation at the dose of 7 Gy + 10 % body surface full-thickness thermal burn were investigated in (CBA x C57Bl/6)F1 mice. The effectiveness of M assessed as an influence on IL-6 levels and several acute phase response signs. Elevated serum level of IL-6 at 6-24 hr following CI was registered.

It's shown, that single M injection 1 h prior CI didn't modify IL-6 production, blood leukocyte count, early hyperenzymemia (as alanine aminotransferase levels indicated), and didn't change the serum albumin content in mice with CI. Application of cyclooxygenase inhibitor was not beneficial and didn't lead to clinical course facilitation and integral outcomes of CI. Irrespective of M administration scheme used (1 h prior CI, 1-3 days after CI, or 6-8 days after CI) all mice dead during initial

days after CI. Inefficiency of M usage for CI management is suggested. (Cytokines and Inflammation. 2005. Vol. 4, № 4. P. 7-10.)

Key words: combined radiation injury, IL-6, acute phase response, sepsis, meloxicam.

 

 

 

 

 


ОБЪЯВЛЕНИЯ

14 апреля 2006 г

Юбилейная всероссийская научно-практическая конференция «Поленовские чтения»

Санкт-Петербург, Гостиница «Пулковская» (пл. Победы, д. 1)

1-3 июня 2006 г.

Международная научно-практическая конференция, посвященная 300-летию Главного военного клинического госпиталя им. Н.Н. Бурденко

Москва

8-9 июня 2006 г.

Международная научно-практическая конференция «Скорая помощь 2006»

Санкт-Петербург, Информационно-выставочный центр (Пл. Победы, 2)

15-16 июня 2006 г.

Научная конференция с международным участием «Здоровье и микробная экология человека: достижения науки и практики»

Санкт-Петербург, Клуб Военно-медицинской академии (Б. Сампсониевский пр., 1)

В рамках перечисленных мероприятий будут работать выставки современного медицинского оборудования

и лекарственных средств

За дополнительной информацией обращайтесь в ОО «Человек и его здоровье»

191025, Санкт-Петербург, а/я 204. Тел./факс: (812) 542-35-91, 542-72-91, 327-24-97,

© Коллектив авторов, 2005

УДК 618.33+616.9]-085-053.31



загрузка...