ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург
На модели водоиммерсионного стресса у крыс показано, что применение стресс-лимитирующего средства ИЭМ-1875 (за 30 мин до стресса) на 14-е сутки после введения стимулятора В-лимфо- цитов повиаргола ограничивает образование язв в желудке (с 3,2 ± 0,2 до 1,3-1,5 ± 0,1 балла) и позволяет снизить дозу ИЭМ-1875 с 20 до 5 мг/кг, в другие сроки (на 5-е сутки) — не влияет на язвообразование. Таким образом, вовлечение В-лимфоцитов в защиту от стресс-индуциро- ванного язвообразования зависит от фазы их активации. (Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5, № 1. С. 34-36.)
Ключевые слова: стресс, образование язв желудка, В-лимфоциты, стресс-лимитирующие средства.
Для экстремальных физических воздействий, характеризующихся поливариантностью исходов, одним из патофизиологических проявлений является образование язв в желудке, патогенез которого не без оснований связывают с нарушениями в иммунной системе [3]. В частности, на модели экстремальной физической нагрузки (плавание с грузом), при которой наблюдается снижение активности В-лимфоцитов, показана эффективность известных препаратов из группы гепатопротек- торов (эссенциале) в качестве веществ, нормализирующих иммунный ответ [6]. Предпосылки использования для стимуляции В-лимфоцитов препаратов на основе М-винилпирролидона [7, 13] и препаратов, содержащих ионы серебра [1], также достаточно обоснованы. В этой связи антимикробный препарат нового поколения повиаргол — производное М-винилпирролидона (Мт = 8-10 кДа), содержащее серебро, с одной стороны, обладает нейротропной активностью, проявляющейся в активации рефлекторных систем защиты организма от экстремальных воздействий [4], с другой стороны — иммунологически активен в течение 21 суток [2]. Ранее мы показали возможность коррекции гипоксии гипоксического типа повиарго- лом в комбинации с препаратом ИЭМ-1875 (хлоргидрат-2-аминоэтиламид пальмитиновой
кислоты; синтезирован в отделе нейрофармакологии ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН к.х.н. В.Е. Гмиро), который в эксперименте проявлял антигипоксические свойства [2]. Однократное введение повиаргола (внутрибрю- шинно) за 1, 5, 14, 21 и 28 суток и ИЭМ-1875 за 30 мин до гипоксии позволило установить, что эффективность профилактики гипоксии усиливается при введении повиаргола за 14 суток, а ИЭМ-1875 — за 30 мин до гипоксии.
Целью настоящей работы было изучение возможностей профилактики стресс-идуцированно- го язвообразования в желудке крыс линии Вистар сочетанным применением препаратов ИЭМ-1875 или натрия оксибутирата в комбинации со стимулятором В-клеток повиарголом.
Работа выполнена на 200 крысах-самцах линии Вистар массой 180-200 г, полученных из питомника «Рапполово» РАМН.
Количество антителообразующих клеток (АОК) определяли [10] на 5-е и 14-е сутки после иммунизации крыс эритроцитами барана (108 клеток/крысу в 0,5 мл) и однократного (внутрибрюшинно) введения ИЭМ-1875 в дозах 5, 10, 20 мг/кг (в 0,5 мл, растворитель — физиологический раствор NaCL). Контролем служили крысы, иммунизированные эритроцитами барана и получавшие физиологический раствор по той же схеме.
Водоиммерсионному стрессу (ВИС) подвергали крыс, находившихся в течение 24 ч на голодной диете со свободным доступом к воде. Крыс помещали в специальные проволочные камеры и погружали на 7 ч в воду (23 °С) до уровня мечевидного отростка. После ВИС у крыс под эфирным наркозом извлекали желудки и оценивали степень некротических поражений слизистой оболочки [11]: 0 — нет поражения; 1 — 1-3 пунктирных поражения; 2 — больше 3 пунктирных поражений или одно длинное поражение (4 мм и больше); 3 — одно большое поражение или много пунктирных поражений; 4 — 3-4 длинных поражения; 5 — много длинных поражений.
Противоязвенные свойства повиаргола в дозе 10 мг/кг и ИЭМ-1875 в дозах 5, 10 и 20 мг/кг изучали при введении препаратов за 30 мин до ВИС. В качестве препарата сравнения для ИЭМ-1875 использовали натрия оксибутират в дозах 50, 100 и 300 мг/кг. Препараты вводили в утреннее время, однократно внутрибрюшинно в 0,5 мл физиологического раствора. Контролем служили крысы, получавшие 0,5 мл физиологического раствора.
При профилактике ВИС повиаргол вводили за 5 и 14 суток, а ИЭМ-1875 и натрия оксибутират — за 30 мин до ВИС. В группах контроля крысам за 5 и 14 суток до ВИС вводили повиар- гол, а за 30 мин до ВИС — физиологический раствор. О защитном эффекте препаратов судили по наличию язв на слизистой оболочке желудка опытных и контрольных животных.
Статистическую обработку материалов проводили с использованием ^критерия Стьюдента.
Изучение на модели ВИС противоязвенных свойств препаратов, введенных за 30 мин доВИС, показало, что повиаргол в дозе 10 мг/кг не обладает противоязвенной активностью (табл.). ИЭМ-1875 в дозе 5 мг/кг или натрия оксибутират в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг, обладающие, как показано ранее [2], антигипоксической активностью, также не влияли на степень язвообразова- ния в желудке крыс (р > 0,05, п = 10). Но более высокие дозы ИЭМ-1875 (10 и 20 мг/кг) или натрия оксибутирата (300 мг/кг) в этих условиях снижали число язв в желудке (для ИЭМ-1875 — р < 0,05-0,001 и р < 0,01, соответственно; п = 10), что позволяет говорить о наличии у этих препаратов стресс-лимитирующих свойств (см. табл.).
Оценка иммунотропной активности повиаргола показала [2], что препарат в индуктивную фазу первичного иммунного ответа (5-е сутки после иммунизации эритроцитами барана) увеличивает количество АОК до 800 ± 20 (на 106 жизнеспособных кариоцитов) по сравнению с 400 ±14 в контроле (иммунизация эритроцитами барана без введения препарата), а в продуктивную фазу (14-е сутки) — до 1000 ±40 и 200 ± 17, соответственно. Препарат ИЭМ-1875 практически не влиял на содержание АОК, которое на 5-е сутки составляло 350 ± 23 против 410 ±32 в контроле, а на 14-е сутки — 300 ± 19 против 220 ± 34, соответственно. Таким образом, оценка влияния препаратов на В-лимфоциты показала наличие стимулирующего эффекта у пови- аргола и отсутствие такового у ИЭМ-1875.
Сравнение эффективности трех режимов введения одного повиаргола для коррекции ВИС — за 30 мин, за 5 и 14 суток доВИС — показало, что самостоятельное его применение не защищает от повреждающего действия ВИС: число язв в желудке не отличалось от контроля (физиологический раствор).
Введение повиаргола за 5 суток, а ИЭМ-1875 в дозе 5, 10, 20 мг/кг или натрия оксибутирата в дозе 50, 100, 300 мг/кг за 30 мин доВИС, также мало влияло на степень деструктивных поражений слизистой желудка (см. табл.). Однако применение ИЭМ-1875 или натрия оксибутирата (за 30 мин до ВИС) на 14-е сутки после введения повиаргола приводило к существенному уменьшению процесса язвообразования в же- Т а б л И ц а лудке крыс. В этих условиях появлялась возможность снижения их доз: для ИЭМ-1875 — с
20 мг/кг (при отдельном применении) до 5 мг/кг (в комбинации с повиарголом), для натрия оксибутирата — с 300 мг/кг до 50 мг/кг (см. табл.). Противоязвенный эффект данной схемы профилактики сопоставим с противоязвенным действием известного стресс-лимитирующе- го средства натрия оксибутира- та в дозе 300 мг/кг (см. табл.).
Согласно данным литературы [1, 4], повиаргол не только усиливает иммунный ответ при одновременном введении с антигеном, но активирует иммунную систему и самостоятельно, в отсутствие антигена, т.е. является поликлональным активатором. В наших экспериментах повиаргол вводился за 14 суток до ВИС без какого-либо антигенного сопровождения. Поэтому его смягчающее влияние на вызываемое ВИС поражение желудка (при сочетании пови- аргола со стресс-лимитирующим препаратом), можно связывать со сдвигами в иммунной системе, характерными для действия поликлональных активаторов В-клеток, в частности, с активацией полиреактивных В1а-лимфоцитов [5, 8], способных к индукции толерантности и апопто- за Т-лимфоцитов [12]. Это согласуется с уменьшением числа CD4+ Т-лимфоцитов, которое характерно для стресса [9].
Полученные данные показывают, что эффективность противоязвенной профилактики стресс- лимитирующим средством, вводимым на фоне действия стимулятора В-лимфоцитов, зависит от фазы действия последнего на иммунную систему. В реализации противоязвенной защиты результативным является применение стресс-лимити- рующего соединения за 30 мин, а стимулятора В- лимфоцитов — за 14 суток до стресса.
Нежинская Г.И., Копейкин В.В., Гмиро В.Е. Иммунотропные свойства высокодисперсного металлического серебра / В кн.: Серебро в медицине, биологии и технике. — Новосибирск, 1995. — Вып. № 4. — С. 151-153.
Нежинская Г.И., Назаров П.Г., Петрова Н.Н., Сапронов Н.С. Изучение возможностей сочетанного применения антигипоксанта со стимулятором В-клеток // Эксп. клин.фармакол. — 2003. — Т. бб, № б. — С. 42-44.
Сердюк С.Е., Гмиро В.Е., Копейкин В.В. Адаптогенные свойства высокодисперсного металлического серебра / В кн.: Серебро в медицине, биологии и технике. — Новосибирск, 199б. — Вып. № 5. — С. 115-118.
Сидорова Е.В. Королевство В-лимфоцитов // Мед.иммунол. — 2004. — Т. б, № 3-5. — С. 17б-185.
Утешев Б.С., Ласкова И.Л. Эффективность иммуномодулирующего действия эссенциале и модифицированных им эритроцитов животных // Эксп. клин.фармакол. — 1995. — Т. 58, № б. — С. 52-55.
Braley-Mullen H., Milligan G.N., Van Buskirk A.M. Requirement for B cell-derived immunoglobulin for Th activation by the type 2 antigen polyvinylpyrrolidone // Int. Immunol. — 1994. — Vol. б, № б. — Р. 805-815.
Chen Z.J., Shimizu F., Wheeler J., Notkins A.L. Polyreactive antigen-binding B cells in the peripheral circulation are IgD+ and B7- // Eur. J. Immunol. —
— Vol. 26, № 12. — P. 2916-2923.
Hassig A., Wen-Xi L., Stampfli K. Stress-induced suppression of the cellular immune reactions: on the neuroendocrine control of the immune system // Med. Hypotheses. — 1996. — Vol. 46, № 6. — P. 551-555.
Jerne N.K., Henry C., Nordin A.A. et al. Plaque forming cells: methodology and theory // Transplant. Rev. — 1974. — Vol. 18. — P. 130-191.
Leitold M., Merk A. Methods for the evalvation of some NSAID (non steroidal antiinflammatory drugs) that induced gastric gamage in rats / Advances in Experimental Ulcer.Eds Senji Umehara, Hisao Ito, 1981. — P. 27-36.
Sidorova E.V., Li-Sheng L., Devlin B. et all. Role of different B-cell subsets in the specific and polyclonal immune response to T-independent antigens of type 2 // Immunol. Lett. — 2003. — Vol. 88, № 1. — P. 37-42.
I. Nezhinskaya, N.N. Petrova Institute of Experimental Medicine RAMS, St. Petersburg
Under water-immersion stress conditions in Wistar rats it was shown that a stress-limiting agent IEM- 1875 administrated (30 min prior to stress) on the 5th day after i.p. injection of a B-cell stimulant Poviargol had no effect while on the 14th day decreased ulcer formation in stomach mucosa (from
± 0,2 to 1,3-1,5 ± 0,1 arbitrary units) allowing the dose of IEM-1875 to be reduced from 20 to 5 mg per 1 kg body weight. Thus, B lymphocytes involvement in protection against the stress-induced ulcer formation depends upon a phase of their activation. (Cytokines and Inflammation. 2006. Vol. 5, № 1. P. 34-36.)
Key words: stress, gastric ulcer formation, B lymphocytes, stress-protective agents.
Изучение на модели ВИС противоязвенных свойств препаратов, введенных за 30 мин