При опухолевом росте нередко изменяется характер взаимодействий в системе «иммунокомпе- тентные клетки — цитокины», что может лежать в основе нарушения механизмов реализации противоопухолевой защиты организма. Целью исследования явилось изучение взаимосвязи нарушений в системе иммунитета и степени выраженности патологического процесса у больных с пролиферативными заболеваниями молочной железы — фиброаденомой (ФА), фиброзно-кистозной мастопатией (ФКМ) и раком молочной железы (РМЖ). В исследование были включены 228 женщин: 53 практически здоровые, 44 с проявлениями ФКМ различной степени выраженности процесса, 91 с ФА и 93, больных РМЖ. Иммунный статус оценивали с помощью комплекса стандартных унифицированных тестов I и II уровня, включая продукцию ^-1р, И-2, И-4 и TNFa мононуклеарами крови. У больных РМЖ с местно-распространенным процессом выявлены существенные изменения субпопуляционного состава лимфоцитов, активности нейтрофилов и продукции иммунорегуляторных цитокинов по сравнению с пациентками, имеющими локализованный процесс. Показано, что наличие мастопатии у больных ФА в большей степени определяет характер изменений в системе иммунитета, чем степень пролиферации эпителия. Таким образом, выраженность иммунологических нарушений соотносима с характером патологических изменений в ткани молочной железы при предопухолевых заболеваниях и распространенностью процесса при РМЖ. (Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5, № 1. С. 37-43.)
В настоящее время рак молочной железы (РМЖ) занимает лидирующие позиции среди новообразований у женщин по показателям заболеваемости и смертности, однако многие вопросы, касающиеся патогенеза, диагностики и выбора рационального метода лечения, еще окончательно не разрешены. Установлено, что большинство злокачественных новообразований молочных желез развивается на почве длительно текущих дисгормональных доброкачественных процессов, характеризующихся пролиферацией эпителия железистой ткани и изменениями в соединительной ткани. По данным ряда авторов, при непролиферативной форме фиброзно-кистозной болезни малигнизация наступает в 0,8 %, при мастопатии с умеренной пролиферацией — в 2,34 %, а при резко выраженной — в 31,4 % случаев [3, 4].
Сегодня уже не вызывает сомнений, что биологические особенности опухоли во многом определяют гетерогенность иммунологического ответа организма на опухолевые антигены [1].
Известно, что к центральным регуляторам иммунологического гомеостаза в организме относятся цитокины, обладающие чрезвычайно широким спектром биологических эффектов. При опухолевом росте нередко изменяется характер взаимодействий в системе «иммунокомпетентные клетки— цитокины», что может лежать в основе нарушения механизмов реализации противоопухолевой защиты организма [1].
С этих позиций представляет интерес изучение взаимосвязи нарушений в системе иммунитета и степени выраженности патологического процесса у больных с дисгормональными пролиферативными заболеваниями молочной железы — фиброаденомой (ФА), фиброзно-кистозной мастопатией (ФКМ) и РМЖ.
В исследование были включены 228 женщин. Первую группу составили 44 женщины с ФКМ (возраст 18-67 лет, средний — 37 ± 5,7 лет); вторую — 91 пациентка с доброкачественными опухолями — ФА (возраст 16-69 лет, средний — 38 ± 4,8 лет). В третью группу вошли 93 больных РМЖ Т1^0-2М0 (возраст 28-65 лет, средний — 49 ± 6,4 лет).
В группу контроля включены 53 практически здоровые женщины без патологических изменений в молочных железах (возраст 26-68 лет, средний — 45 ± 6,1 лет). У всех 53 женщин был изучен субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови, включая активационные антигены CD25, CD95 у 33 из них. Функциональная активность лимфоцитов была определена у 13 здоровых доноров, уровень продукции цитокинов в супернатантах мононуклеаров периферической крови (МНПК) — у 8. Функциональная активность нейтрофи- лов оценена у 27 женщин контрольной группы, уровень сывороточных иммуноглобулинов — у 21.
Для характеристики степени выраженности клинических проявлений заболевания у больных ФКМ научным сотрудником отделения общей онкологии НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН Е.Ю. Гарбуковым был разработан балльный кодификатор [2]. Учитывались результаты клинического осмотра, маммографии, ультразвукового и цитологического исследований (табл. 1). Информация, полученная в результате проведения каж-
Балльный кодификатор, используемый для клинической оценки степени выраженности изменений в ткани молочной железы у больных фиброзно-кистозной мастопатией, баллы циональную активность нейтрофилов определяли по их способности генерировать активные формы кислорода в реакции восстановления нитросинего тетразолия [5]. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли методом простой радиальной иммунодиффузии по Манчини. Содержание К-1Р, К-4, К-2, и TNFa в супернатантах МНПК определяли иммуноферментным методом с использованием тест-систем НИИ особо чистых биопрепаратов (Санкт-Петербург). Статистическая обработка материала проводилась с использованием пакета прикладных программ Stаtisticа 6.0. Для оценки статистически значимых различий средних значений иммунологических показателей в изучаемых группах были использованы методы параметрической и непараметрической статистики: ^критерий Стьюдента для нормально распределенных показателей и и-критерий Манна—Уитни для остальных, а также однофакторный дисперсионный анализ. Проверка на нормальность проводилась по критерию согласия Колмогорова—Смирнова.
При изучении иммунологических параметров у больных с ФКМ доброкачественными опухолями и РМЖ было показано, что во всех изучаемых группах наблюдалось статистически значимое увеличение количества CD8+- и CD22+-лимфо- цитов по сравнению с группой контроля (табл. 2). У пациенток с ФКМ и ФА было выявлено повышение процента CD25-положительных клеток по отношению к контрольной группе, что отражает активацию Т-клеточного звена иммунной системы. У больных с мастопатией и РМЖ наблюдалось достоверное уменьшение числа CD95+-лим- фоцитов по сравнению с группой контроля и пациентками с доброкачественными опухолями. Оценка функциональной активности нейтрофи- лов в исследуемых группах показала, что их способность реагировать активацией кислородного метаболизма на стимул была существенно ниже контрольного уровня, но статистически значимые различия отмечены лишь для пациенток с ФА. При этом наблюдалось уменьшение как процента активных нейтрофилов, так и интенсивности их реакции. В группе больных ФКМ была выявлена активация нейтрофилов в кровотоке, что подтверждалось увеличением показателей в спонтанном НСТ-тесте, а также повышение уровня IgG по сравнению с группой контроля и больными РМЖ ф < 0,05).
При оценке функциональной активности имму- нокомпетентных клеток выявлено, что во всех исследуемых группах наблюдалось увеличение спонтанной пролиферации лимфоцитов по сравнению со здоровыми женщинами, а у пациенток с ФА и ФКМ и по отношению к больным РМЖ. При этом отмечено выраженное снижение индекса стимуляции пролиферации в ответ на ФГА (табл. 3). Кроме этого, выявлена высокая продукция ^-1, присутствие которого является важным условием для формирования всех этапов иммунологического ответа, благодаря его способности активировать антигенпрезентирующие клетки и CD4+-лимфо- циты, влиять на дифференцировку Т- и В-лимфоцитов. Высокий уровень спонтанной продукции TNFa был также выявлен у пациенток всех изучаемых групп, но статистически подтвержден лишь у женщин с ФКМ. Статистически значимо более высокие уровни базальной секреции ^-4 наблюдались только при РМЖ по сравнению с группой ФКМ. Таким образом, у пациенток всех нозологий наблюдаются существенные изменения как в субпопуляционном составе иммунокомпе- тентных клеток, функциональной активности ней- трофилов, так и в продукции ряда цитокинов.
Оценка иммунологических параметров в исследуемых группах, в зависимости от степени выраженности и распространенности патологического процесса в ткани молочной железы, выявила ряд особенностей иммунного статуса, характерных для различных клинических форм заболевания. Установлено, что у больных РМЖ с метастазами в регионарные лимфоузлы наблюдалась тенденция к снижению CD4+-лимфоцитов, следствием чего явилось уменьшение иммунорегуляторного индекса (табл. 4). Кроме того, выявлено выраженное снижение функциональной активности нейт- рофилов в НСТ-тесте у этих пациенток, а при изучении уровня продукции цитокинов отмечена тенденция к снижению ЛПС-индуцированной продукции TNFa по сравнению с больными, имеющими локализованный процесс в ткани молочной железы, что может указывать на достаточно низкий активационный потенциал клеток-продуцен- тов этих цитокинов. Однофакторный дисперсионный анализ показал, что распространенность опухолевого процесса в регионарные лимфоузлы оказывает значимое влияние на уровень продукции ^-4 (65,45 ± 13,5 пг/мл у пациенток с локализованным процессом и 15,39 ± 10,5 пг/мл у больных с метастазами, F = 4,02, р < 0,04) и абсолютное количество CD22+-лимфоцитов (0,45 ±0,2 Г/л и 0,34 ± 0,1 Г/л; соответственно F = 4,68; р < 0,02). Таким образом, следует отметить, что вовлеченность в злокачественный процесс регионарных лимфоузлов сопровождается снижением уровня секреции ^-4 и количества CD22+-лимфо- цитов, при этом уменьшение числа В-лимфоци- тов может быть следствием снижения продукции ^-4 Т-хелперами.
В группе больных с мастопатией, имеющей умеренные клинические проявления заболевания, выявлено увеличение относительного количества цитотоксических Т-лимфоцитов и В- лимфоцитов (см. табл. 4). Отмечено также снижение процента CD95+-клеток у всех больных, независимо от выраженности мастопатии по сравнению с группой контроля. Выявлены высокие уровни базальной продукции TNFa у больных исследуемых групп, но лишь у женщин с умеренно выраженной мастопатией они были статистически значимо повышены по сравнению с контрольным уровнем (табл. 5).
Однофакторный дисперсионный анализ позволил выявить, что степень выраженности клинических проявлений заболевания у пациенток с ФКМ оказывает значимое влияние на уровень продукции ^-2 (48,1 ± 13,2 пг/мл у больных с выраженной мастопатией и 18,5 ± 6,3 пг/мл у женщин с умеренными проявлениями; F = 4,9; р < 0,02); ^-4 (1,56 ± 0,2 пг/мл и 7,8 ± 3,3 пг/мл соответственно; F = 4,8; р < 0,03) и абсолютное коли
чество CD25+-лимфоцитов (0,6 ± 0,3 Г/л и 0,32 ± 0,1 Г/л соответственно при F = 7,7; р < 0,01). Таким образом, пациентки с клинически выраженными проявлениями мастопатии имеют низкий уровень продукции ^-4 по сравнению с больными, у которых мастопатия носит менее выраженный характер (подобно тем изменениям, которые наблюдались и у женщин с опухолевой патологией: уменьшение продукции этого цитокина у больных с распространением процесса в аксил- лярные лимфоузлы по сравнению с пациентками без метастазов). Увеличение числа лимфоцитов, несущих рецептор для ^-2 (CD25+), и уровня секреции ^-2 у больных с выраженной мастопатией следует рассматривать как адаптационную реакцию со стороны организма на течение заболевания, поскольку участие ^-2 одинаково важно как для индукции специфических Т-киллеров, так и для активации неспецифических механизмов противоопухолевой защиты. В частности, получены доказательства того, что ^-2 и ^-12 дифференцированно регулируют экспрессию CD161, молекулы, участвующей в регуляции начальных этапов цитотоксичности, что предполагает существование цитокинспецифических механизмов модуляции спонтанной цитотоксичности [7].
Анализируя характер иммунологических изменений в группе пациенток с мастопатией, следует особо подчеркнуть однонаправленность этих нарушений у женщин с выраженной клинической картиной (особенно в отношении уровня продукции ^-2 и ^-4 иммунокомпетентными клетками) и группой больных РМЖ с регионарной распространенностью процесса.
У пациенток с ФА, имеющих умеренную степень пролиферации эпителия опухоли, наблюдалось достоверное увеличение всех субпопуляций Т-лимфо- цитов, а также CD16+- и CD22+-лимфоцитов по сравнению с группой контроля. При отсутствии пролиферативных изменений в опухолевом узле отмечено лишь увеличение относительного числа CD22+-лимфоцитов (см. табл. 4). Интересен тот факт, что у больных, имеющих сочетание ФА с мастопатией, выявлен более высокий уровень секреции ^-4 мононуклеарами крови по сравнению с пациентками без фоновых изменений (см. табл. 5). Результаты однофакторного дисперсионного анализа по Крускалю — Уоллису позволили выявить, что наличие фоновой патологии достоверно влияло на целый ряд иммунологических параметров, а именно: уровень продукции ^-4 (58,3 ± 22,8 пг/мл у больных с ФА в сочетании с мастопатией и 4,46 ± 2,9 пг/мл у пациенток без фоновых изменений; F = 5,6; р < 0,03); общее количество лейкоцитов (5,6 ± 0,29 Г/л и 4,6 ± 0,3 Г/л соответственно при F = 4,1; р < 0,04); абсолютное количество CD22+-лимфоцитов (0,44 ± 0,04 Г/л и
28 ± 0,03 Г/л при F = 5,9; р < 0,01) и относительное количество CD95+-клеток (26,6 ± 2,54% и 33,8 ± 3,9 % соответственно при F = 4,4; р < 0,03). Выявленные различия показателей позволяют говорить о том, что имеющиеся диффузные дисгормональные изменения в ткани молочной железы, на фоне которых развивается доброкачественная опухоль, в большей степени определяют характер иммунологических изменений, нежели выраженность процессов пролиферации в самом опухолевом узле.
Полученные результаты указывают на то, что у пациенток с ФКМ, ФА и РМЖ имеются сходные изменения в субпопуляционном составе иммунокомпетентных клеток, их функциональной активности, а также метаболическом состоянии фагоцитарных клеток. Снижение продукции 1Ъ-4 у больных с клинически выраженной мастопатией и пациенток РМЖ с метастазами в регионарные лимфоузлы отражает низкий цито- токсический потенциал Т-лим- фоцитов и естественных киллеров и свидетельствует об однонаправленности иммунологических нарушений. Наличие фоновой патологии — мастопатии оказывает существенное влияние на цитокиновый статус у пациенток с ФА.
Таким образом, выраженность иммунологических нарушений соотносима как с характером патологических изменений в ткани молочной железы при предопухолевых заболеваниях, так и с распространенностью опухолевого процесса при РМЖ. Поскольку важную роль в формировании противоопухолевого иммунитета играют цитокины, то изменение уровня их продукции по мере усугубления клинических проявлений как при доброкачественных пролиферативных заболеваниях, так и при РМЖ, свидетельствует о вовлеченности цитокинов в патогенез РМЖ. В этой связи можно полагать, что генетически детерминированные особенности функционирования иммунной системы и цитокиновой регуляции, в частности, могут играть существенную роль в обеспечении предрасположенности либо устойчивости к злокачественным новообразованиям молочной железы. ЛИТЕРАТУРА
Бережная Н.М, Чехун В.Ф. Система интерлейкинов и рак. — Киев: ДИА, 2000. — 224 с.
Гарбуков Е.Ю. Исследование значимости клинических и патофизиологических критериев для оценки риска возникновения рака молочной железы. — Автореф. дисс. ... канд. мед.наук. — Томск, 2000. — 22 с.
Горюшина О.Г. Современные взгляды на мастопатию // ВНМТ. — 2002. — Т. IX, № 4. — С. 20-22.
Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Симбирцев А.С., Ломатидзе Л.В. Влияние длительного введения синтетического дипептида на функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов в эксперименте in vivo // Иммунология. — 1999. — № б. — С. 40-43, 60-62.
Рыкова М.П.,Спиранде И.В., Зедгенидзе М.С. Новая высокочувствительная техника тестирования нормальных киллеров // Иммунология. — 1981. — № 3. — С. 88-90.
Azzoni L., Zatsepina O., Abebe B. Differentional transcriptional regulation of CD161 and a novel gene, 197/15a, by IL12, IL15, and IL2 in NK and T cells // J. Immunol. — 1998. — Vol. 161, № 7. — P. 3493-3500.
Immunological parameters and cytokine production level in patients with proliferative diseases and breast cancer
Character of interactions in the «immunocompetent cells — cytokines» system is often changed in tumor growth due to the damage of anti-tumor protection mechanisms. The purpose of the study was to investigate the interaction between immune system damage and pathologic process degree in patients with proliferative breast diseases: fibroadenoma (FA), chronic cystic mastitis (CCM) and breast cancer (BC). 228 women were included in the study: 53 healthy women, 44 patients with CCM, 91 patients with FA and 93 patients with BC. Immune status was assessed using the standard tests of levels I and II including IL-1P, IL-2, IL-4 and blood mononuclear TNFa production. Considerable changes in lymphocyte count, neutrophil activity and immunoregulatory cytokine production were found in patients with locally-advanced BC compared to those obtained in patients with local BC. Mastopathy in patients with FA was shown to determine the pattern of immune system changes rather than the degree of epithelial proliferation. Thus, immunologic damages correlated with pathologic changes in breast tissue in patients with precancerous diseases and the extent of tumor involvement in patients with breast cancer. (Cytokines and Inflammation. 2006. Vol. 5, № 1. P. 37-43.)
Key words: cytokines, breast cancer, proliferative diseases, immune system.
В 2006 году старейшему и первому в мире Российскому научно-исследовательскому нейрохирургическому институту им. проф. А.Л. Поленова исполняется 80 лет.
В рамках юбилейной апрельской конференции 2006 года планируется торжественное празднование 80-летия Института, 2-я Всероссийская конференция молодых ученых по всем аспектам нейрохирургии, научно-практическая конференция "Хирургическое лечение эпилепсии" и международная школа " Внутрисосудистая хирургия при церебральных аневризмах".
Во время Юбилейной конференции будет проходить последний, предсъездовский, XX Пленум правления Ассоциации нейрохирургов России.
Приглашаем фирмы к участию в выставке современных образцов медицинской техники и лекарственных препаратов.