загрузка...
 
Бестим в коррекции дисфункций нейтрофильных гранулоцитов пациентов с хроническим осложненным панкреатитом в эксперименте in vitro
Повернутись до змісту

Бестим в коррекции дисфункций нейтрофильных гранулоцитов пациентов с хроническим осложненным панкреатитом в эксперименте in vitro

И.В. Нестерова, И.Н. Швыдченко, И.В.Фесенко

Медицинский Центр УД Президента РФ, Москва;

Российский Центр функциональной хирургической гастроэнтерологии, г. Краснодар

Целью работы было изучение функциональных нарушений в системе нейтрофильных гранулоцитов (НГ) у пациентов с хроническим осложненным панкреатитом (ХОП) и оценка возможности их коррекции in vitro дипептидом Бестим (уО-глутамил^-триптофан). Установлено, что при ХОП на фоне глубокой депрессии фагоцитарной активности НГ, коррелирующей с низким кислород- зависимым микробицидным потенциалом, наблюдается реорганизация экспрессии рецепторов цитоплазматической мембраны НГ. Бестим проявляет in vitro ярко выраженную иммуномодулирующую активность в отношении НГ пациентов с ХОП. Стимулируя экспрессию отдельных поверхностных мембранных рецепторов НГ, исследуемый пептид способствует нормализации выявленных дисфункций. (Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5, № 2. С. 42-46.)

Ключевые слова: нейтрофильные гранулоциты, Бестим, хронический осложненный панкреатит, фагоцитоз, кислородзависимая микробицидная активность, дисфункции, иммуномодуляция.

 

Нейтрофильные гранулоциты (НГ) занимают особое место в системе иммунитета, участвуя одновременно в выполнении функций специфической и неспецифической защиты [11]. Выполняя важную эффекторную роль, НГ оказывают также существенное регуляторное влияние на другие клетки иммунной системы, секретируя различные биологически активные вещества [1, 5, 8, 12]. Дисфункции НГ могут стать фактором риска для развития и отягощения различных патологических состояний. Вторичные повреждения в системе НГ могут возникать в виде нейтропении, количественной недостаточности активных субпопуляций, дефектов адгезии, хемотаксиса, разнообразных нарушений рецепторного аппарата, депрессии процессов захвата, киллинга и элиминации бактериального антигена, дефицитов компонентов микробицидных систем, извращения ответов в нагрузочных тестах in vitro [1, 2, 4, 6, 9, 10, 14]. С другой стороны, гиперактивация НГ может приводить к повреждениям окружающей ткани [1, 16, 17, 19, 20].

В настоящий момент в развитии и прогрессировании такой патологии, как панкреатит, многие исследователи отводят важную роль иммунным нарушениям. Для хронических панкреатитов, развившихся на фоне острого деструктивного панкреатита с гнойно-некротическими осложнениями, характерна дисрегуляция функционирования нейтрофильного звена, связанная с активацией цитотоксичности в отношении клеток поджелудочной железы с одновременным ослаблением процессов фагоцитоза, что ведет к гнойным осложнениям [3, 15].

Актуальным является подбор дифференцированной иммунотропной терапии с учетом повреждений НГ. Среди лекарственных препаратов перспективны для использования в клинике соединения пептидной природы. Новый препарат Бестим на основе синтетического дипептида у^-глутамил^-триптофана (ГНЦ ГосНИИ ОЧБ, Санкт-Петербург) обладает иммуномодулирующей активностью в отношении клеток лимфоидного и нелимфоидного ряда и используется для лечения вторичных иммунодефицитных состояний. Бестим (БС) влияет на экспрессию ней- трофилами тех рецепторов цитоплазматической мембраны, которые в целом отражают их способность к участию основных функциях — фагоцитарной и адгезивной [7].

В связи с вышесказанным, целью настоящей работы явилось изучение функциональных нарушений в системе НГ у пациентов с хроническим осложненным панкреатитом (ХОП) с установлением возможности их коррекции БС в эксперименте in vitro.

S.   aureus — стимулированный НСТ-тест (%ФПКст). Адекватность ответа на бактериальную нагрузку определяли по коэффициенту мобилизации (КМ — % ФПКст: %ФПКсп).

Статистическую обработку результатов проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Данные представлены в виде среднего арифметического значения ± ошибки средней величины. Различия считали достоверными при р < 0,05

 

Материалы и методы

Объектом исследования была периферическая венозная кровь пациентов с ХОП (парапанкреатический абсцесс, нагноившаяся киста поджелудочной железы) в период обострения, в возрасте от 20 до 50 лет. Забор крови производили в момент поступления больного в стационар до начала традиционной терапии. Контрольную группу составили здоровые добровольцы того же возраста без жалоб и патологии.

Функциональное состояние НГ оценивали с помощью комплекса иммунологических методов [13]. 100 мкл взвеси НГ (2 х 106 клеток/мл), выделенной на градиенте двойной плотности фиколла-верографина (1,093:1,077), инкубировали (37 °С, 30 мин) в лунках иммунологических планшетов с БС (20 мкл) в конечной концентрации 0,1 мкг/мл (группа «ХОП+БС») или с таким же объемом физиологического раствора (группа «ХОП»). Аналогично с физиологическим раствором инкубировали НГ здоровых лиц (группа «Контроль»). Экспрессию рецепторов НГ исследовали непрямым иммунофлюоресцент- ным методом с использованием панели моноклональных антител: CD11b, CD16, CD95, CD14, CD15,

CD17, CD18, CD24, CD25, CD50 (НПЦ «МедБиоСпектр», Москва). При исследовании фагоцитарной функции и активности микробицидных систем НГ использовали цельную кровь.

Фагоцитарную активность исследовали микроскопически по интенсивности захвата и переваривания бактерий S. aureus (штамм № 209).

Тестировали поглотительную функцию по проценту активно фагоцитирующих НГ из общего числа посчитанных нейтрофилов (% ФАН), фагоцитарному числу (ФЧ — среднее число фагоцитированных микробов на 1 «активный» НГ) и фагоцитарному индексу (ФИ — среднее число фагоцитированных микробов на 100 НГ). Завершенность фагоцитарного акта оценивали по проценту переваривания (% П — отношение числа убитых бактерий к общему числу фагоцитированных бактерий) и индексу переваривания (ИП — среднее число убитых микробов на 1 НГ). Состояние оксидазной микробицидной системы НГ определяли по показателям НСТ-теста. Подсчитывали клетки с восстановленным формазаном (% фор- мазан-позитивных клеток — % ФПКсп).

Для оценки степени стимуляции внутриклеточного кислородзависимого метаболизма использовали функциональный нагрузочный тест in vitro c

Результаты и обсуждение

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что НГ здоровых добровольцев в различной степени экспрессируют все исследуемые рецепторы (рис. 1). 55,62 ± 1,61 % НГ экспрессировали ам-субъединицу (CD11b) рецептора CD11b/CD18. Такой довольно высокий уровень CD11b+-НГ мог быть результатом методических манипуляций, связанных с выделением клеток [18]. Несмотря на значительное количество НГ, экспрессирующих ам-субъединицу рецептора CD11b/CD18, 02-цепь (CD18) была выявлена только на 14,52 ± 0,59 % клеток. Субпопуляция НГ, несущих еще одну молекулу межклеточной адгезии CD50 (ICAM-3), составила в контрольной группе 35,48 ± 1,58 %.

23,96 ± 1,62 % НГ экспрессировали молекулу следуемых рецепторов НГ, экспрессия которых у пациентов с ХОП была либо снижена (CD11b, CD15), либо не отличалась от группы здорового контроля (CD14, CD17, CD25).

Вероятно, выявленное иммуностимулирующее влияние БС на экспрессию отдельных рецепторов НГ пациентов с ХОП имело положительное значение для нормализации угнетенных при данной патологии функциональных способностей клеток. После инкубации клеток с БС достоверно увеличилось до уровня здорового контроля количество активно фагоцитирующих НГ, повысился захват бактериальных частиц и их переваривание (см. рис. 2). БС также обладал модулирующим действием на активность мембранных оксидаз: % ФПК в спонтанном НСТ-тес- те достиг уровня здоровых лиц; возросло количество формазан-позитивных НГ при дополнительной бактериальной нагрузке (см. рис. 3).

Таким образом, установлено, что при ХОП на фоне угнетения фагоцитарной активности и мик- робицидности НГ наблюдается реорганизация экспрессии рецепторов цитоплазматической мембраны, возможно, опосредующая и отражающая выявленные функциональные нарушения. Синтетический дипептид у^-глутамил^-трип- тофан — Бестим проявляет in vitro выраженную иммуномодулирующую активность в отношении НГ пациентов с ХОП. Стимулируя экспрессию отдельных поверхностных мембранных рецепторов НГ, Бестим способствует нормализации дисфункций. Важно также, что инкубация НГ с БС снижает количество клеток, экспрессирующих рецептор CD16, связанный с антителозависимой цитотоксичностью.

Выводы

При хроническом осложненном панкреатите активационный потенциал НГ возрастает, однако, несмотря на наличие воспалительного процесса, количество НГ, экспрессирующих CD14- и CD17, остается на уровне здорового контроля, а количество CDHb+^Г резко снижается.

Реорганизация экспрессии мембранных рецепторов НГ сопровождается глубокой депрессией фагоцитарной активности (снижением количества активно фагоцитирующих нейтрофилов, угнетением захвата и переваривания) и сниженным кислородзависимым микробицидным потенциалом НГ.

Бестим проявляет in vitro иммуномодулирующую активность в отношении НГ при ХОП. Стимулируя экспрессию отдельных мембранных рецепторов (CD11b, CD14, CD17, CD18, CD24, CD25), Бестим способствует нормализации процессов фагоцитоза и кислородзависи- мой микробицидности НГ.

 

ЛИТЕРАТУРА

 

Нестерова И.В. Физиологическая роль нейтрофильных гранулоцитов в поддержании иммунного гомеостаза // Russ. J. Immunol. — 2004. — Vol. 9, suppl. 1. — P. 17.

Нестерова И.В., Колесникова Н.В. Современные представления о роли системы нейтрофильных гранулоцитов // Russ. J. Immunol. — 1999. — Vol. 4, suppl. 1. — P. 22-29.

Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Чудилова Г.А. Комплексное трехуровневое исследование системы нейтрофильных гранулоцитов с возможной диагностикой ИДС при различной патологии // Метод. рекомендации № 96/11. — Краснодар, 1996. — 22 с.

Нестерова И.В., Светличная М.А. Значение исследования функционального потенциала нейтрофильных гранулоцитов при гнойно-септических заболеваниях // Педиатрия. — 1984. — № 9. — С. 63-65.

Тарасенко В.С., Смолягин А.И., Кубышкин В.А. Особенности иммунного статуса при остром панкреатите // Хирургия. — 2000. — № 8. — С. 51-55

Cochrane C.G. Cellular injury by oxidants // Am. J. Med. — 1991. — Vol. 91, № 3C. — P. 23-30.

Fontes B., Sergio-Poggetti R. The role of the polymorphonuclear neutrophils in the failure of multiple organs and systems // Rev. Hosp. Clin. Fac. Med. Sao- Paulo. — 1996. — Vol. 51, № 1. — P. 21-25.

Hamblin A., Taylor M., Bernhagen J. et al. A method of preparing blood leukocytes for flow cytometry which prevents upregulation of leukocyte integrins // J. Immunol. Methods. — 1992. — Vol. 146, N 2. — P. 219-228.

Kobayashi K., Kashima K., Higuchi K., Arakawa T. The mechanisms of gastrointestinal mucosal injury and repair // Nippon Rinsho. — 1998. — Vol. 56, № 9. — P. 2215-2222.

Ward P.A., Varani J. Mechanisms of neutrophil-mediated injury // Clin. Exp. Immunol. — 1993. — Vol. 93, suppl. 1. — P. 2.

 

Конкурс

К 50-летию открытия интерферонов К 100-летию со дня рождения академика В.Д. Соловьева

ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Российская Ассоциация педиатрических центров, Ассоциация педиатрических кафедр последипломного образования России, Ассоциация педиатров-ин- фекционистов России, ООО «Ферон» объявляют конкурс на лучшую научно-практическую работу 2006-2007 гг.:

«Виферон в педиатрической и акушерской практике».

 

 

 

Условия конкурса

В конкурсе могут принять участие педиатры, неонато- логи, инфекционисты, акушеры, урологи, хирурги, аллергологи, иммунологи, гастроэнтерологи, научные сотрудники, преподаватели, аспиранты, клинические ординаторы и врачи-интерны.

Премии за научно-практические работы присуждаются за новизну, актуальность, практическую значимость.

Информация о проведении конкурса распространяется через ведущие медицинские журналы для педиатров, акушеров-гинекологов, практикующих врачей.

По итогам проведения конкурса присуждаются независимые премии по двум номинациям: «Педиатрия», «Акушерство»

1-е место — 100 000 рублей

2-е место — 2 премии по 50 000 рублей

3-е место — 3 премии по 25 000 рублей.

Требования к работам, выдвигаемым на конкурс

Для участия в конкурсе могут быть представлены оригинальные, законченные, научные, практические разработки от НИИ, вузов, учреждений практического здравоохранения.

Один автор может представить на конкурс не более одной работы.

Для участия в конкурсе соискателями представляется заявка с указанием ФИО всех авторов, а также ответственного за переписку лица, его подробного адреса, места работы и должности, в т. ч. контактного телефона и электронного адреса.

Работы присылать в конкурсную комиссию по почте: 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 18, ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, В.В. Парфенову или Н.В. Деленян, с пометкой «КОНКУРС» в двух экземплярах и электронном виде (на дискете, CD-ROM) или по электронной почте в срок до 15 марта 2007 г.

 

Работа на конкурс оформляется в виде оригинальной научной статьи, объемом не более 12 машинописных листов, в формате Word 2.0-7.0 для Windows, Times New Roman, 12 кеглем с полуторным интервалом.

Оценка результатов конкурса будет проводиться экспертной комиссией, в состав которой входят профессорско- преподавательский состав вузов, ведущие сотрудники НИИ.

Результаты конкурса сообщаются участникам в течение 1 месяца после окончания срока подачи документов.

Победителем конкурса признается лицо(а), работа которого(ых) по критериям оценки максимально удовлетворяет условиям конкурса.

Лучшие работы будут опубликованы в ведущих медицинских журналах.

Награждение победителей конкурса будет проходить на специальном форуме в рамках Российского национального Конгресса «Человек и лекарство» в апреле 2007 г.

 

© Коллектив авторов, 2006 УДК 612.017.1:616.31



загрузка...