загрузка...
 
Производство и анализ рекомбинантных цитокинов
Повернутись до змісту

Производство и анализ рекомбинантных цитокинов

А.М. Ищенко, Л.Я. Соловьева, Т.О. Антипова, Е.А. Полякова,

Г.Ф. Антропова, Е.А. Протасов ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов, С.-Петербург

Несколько лет назад в НИИ особо чистых биопрепаратов,

С.-Петербург, была принята программа по разработке лекарственных препаратов на основе рекомбинантных эндогенных иммуномодуляторов. Программа предусматривала несколько этапов. Первоначально была создана библиотека кДНК, клонированная из мРНК стимулированных лейкоцитов человека и приготовленная как библиотека бактериофагов X кДНК. Далее были получены генноинженерные продуценты важнейших ци- токинов, таких, как ^-а, ^-р, ^-Ша, IFNa, ^-2, ^-6 и IL-8, обеспечивающие продукцию этих белков в клетках Е. соИ либо в виде телец включения, либо в качестве растворенного в цитоплазме белка. В соответствии с этим для каждого белка была разработана технология выделения и очистки до индивидуального состояния. Параллельно были развиты методы контроля, позволяющие оценивать параметры в соответствии с требованиями GMP. В частности, произведенные субстанции характеризовались структурной идентичностью природным белкам, по данным масс-спектрометрии. Их степень гомогенности, оцененная посредством электрофореза в полиакриламидном геле и высокоэффективной жидкостной хроматографии, составляла 98—99 %. В препаратах не выявлялся примесный бактериальный липо- полисахарид (пироген), определяемый с помощью высокочувствительного Limulus-теста, а выявлялись лишь следовые количествами бактериальной ДНК (не более 20 пг/мг белка, по данным ПЦР). Полученные рекомбинантные белки характеризовались наивысшей (теоретически достижимой) удельной биологической активностью, определяемой в специфическом для каждого белка тесте.

На заключительных этапах для каждой субстанции были разработаны лекарственные формы, проведены доклинические и клинические испытания. Сейчас на базе производственного участка в институте организовано производство двух препаратов — Беталейкин и Интераль. Беталейкин является первым в мире препаратом на основе субстанции ^-р и применяется для лечения лейкопении, вызванной химио- или радиотерапией, вторичных иммунодефицитов, вызванных инфекционными заболеваниями, вирусных болезней, включая гепатит С. Препарат Интераль получен на основе субстанции IFNa2. Он широко используется для лечения вирусных заболеваний, таких, как герпес, гепатиты В и С, грипп. В настоящее время ведутся клинические испытания препарата АРИЛ, полученного на основе субстанции ^-Ша. Предполагается, что он будет использован для лечения воспалительных и аутоиммунных заболеваний, таких, как ревматоидный артрит, псориаз и других.



загрузка...