Л.Р. Лебедев, В.А. Агеенко, С.Н. Щелкунов ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор», пос. Кольцово, Новосибирская область
Гамма-интерферон (IFNy) является многофункциональным цитокином, важнейшим регулятором развития воспаления и иммунных реакций в ответ на вирусную инфекцию. При различных заболеваниях человека гиперпродукция IFNy играет патологическую роль. К ним относятся ревматоидный артрит, аутоиммунный диабет, дискоидная красная волчанка, системная красная волчанка. Успех при лечении таких заболеваний будет зависеть от того, насколько быстро и эффективно удастся снизить уровень IFNy в организме больного.
Анализ нуклеотидных последовательностей геномов орто- поксвирусов выявил открытые рамки трансляции, кодирующие белки, имеющие высокую степень гомологии с лигандсвязыва- ющим доменом клеточного рецептора IFNy. Ген аналога рецептора IFNy B9R вируса оспы обезьян (штамм Zaire-1996) был изолирован методом ПЦР из вирусного генома и экспрессирован в составе бакуловирусной ДНК в клетках насекомых Sf21. Оптимизацию уровня экспрессии целевого продукта проводили путем варьирования продолжительности инфекции и множественности заражения. Разработана схема очистки аналога рецептора интерферона гамма путем аффинной хроматографии.
Свойства рекомбинантного белка исследовали in vitro методами SDS-электрофореза, Вестерн-блот анализа и твердофазного иммуноферментного анализа. Биологическую активность препарата вирусного аналога рецептора IFNy изучали по его способности нейтрализовать защитный эффект IFNy при заражении вирусом энцефаломиокардита мышей в культуре клеток Л68. Обсуждается перспектива разработки терапевтических средств нового поколения на основе белков ортопоксвирусов.