загрузка...
 
Исследование цитокинов при среднетяжелых формах гриппозной инфекции и других ОРЗ в условиях комплексной терапии
Повернутись до змісту

Исследование цитокинов при среднетяжелых формах гриппозной инфекции и других ОРЗ в условиях комплексной терапии

И.А. Васильева, А.В. Жахов, А.В. Трофимов, А.М. Ищенко, О.И. Киселев

НИИ Гриппа РАМН, Санкт-Петербург,

ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург

Под наблюдением находились 75 больных с диагнозом «грипп или ОРЗ, осложненные пневмонией» и 24 больных с неосложненным течением гриппозной инфекции. У всех больных в динамике заболевания иммуноферментным методом определяли содержание в сыворотке крови интерферона у (^N7), интерферона а (^а), интерлейкина 8 (11-8) и фактора некроза опухолей а ^Р

Ключевые слова: грипп, пневмония, цитокины, иммунитет.

Несмотря на успехи в области современной химиотерапии и вакцинопрофилактики, грипп и ОРЗ остаются самыми массовыми заболеваниями человека [1—4]. В последние годы открытие цитоки- нов и изучение их роли в патогенезе заболеваний определили приоритеты их исследования при различной патологии, в том числе при респираторных вирусных инфекциях [5]. Изучение цитокинов при инфекционных заболеваниях является основополагающим для понимания патогенеза вирусных инфекций и природы патогенности вирусов. Для клинической практики исследование цитокинового статуса трудно переоценить по следующим причинам:

Цитокиновый статус отражает индивидуальную первичную реакцию на вирусный агент.

Цитокиновый статус позволяет оценить характер течения процесса и прогнозировать исход заболевания при многих вирусных инфекциях.

3. Цитокиновый статус позволяет объективно оценить эффективность терапии, особенно в случаях применения средств с иммуномодулирующей и иммунокоррегирующей активностью, среди которых основная роль по-прежнему отводится препаратам интерферона (ГРЫ) и его индукторам.

В основном для контроля применения препаратов ГРЫ и его индукторов используется определение иммунного статуса на титрование биологической активности интерферонов. Кроме этого, в последние годы рядом предприятий в России налажен выпуск систем для количественного определения содержания уровня цитокинов в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа. Использование этого метода позволяет проводить мониторинг широкого спектра цитокинов у пациентов с различными заболеваниями, в том числе и инфекционной этиологии, что обеспечивает эффективный контроль уровня ГРЫ и ряда других


цитокинов в периферической крови в процессе лечения. Несмотря на то что при гриппозной инфекции и ОРЗ на моделях животных отмечены значительные изменения в интерфероновом статусе и содержании цитокинов в сыворотке крови [6-15], в клинике подобные исследования немногочисленны. В связи с этим целью настоящего исследования явилась оценка цитокинового статуса больных среднетяжелыми формами гриппозной инфекции и определение показаний к назначению средств с иммуномодулирующей активностью при данной патологии.

Материалы и методы

Под наблюдением находилось 99 больных, госпитализированных в клинику респираторных вирусных инфекций взрослых НИИ Гриппа РАМН на базе 23-го отделения Городской инфекционной больницы № 30 им. С.П. Боткина. Обследованы лица обоего пола в возрасте от 15 до 64 лет. Все больные были распределены на 2 основные группы. Первую группу составили больные с неосложненной формой гриппа (24 человека (24,3 %)), вторую группу — больные гриппом и ОРЗ, осложненными пневмонией (75 человек (75,7 %)). Диагноз подтвержден 4-кратным и более нарастанием титров специфических антител в РСК и РТГА, а также методами экспресс-диагностики (иммуноферментный анализ (ИФА), иммунофлюоресцент- ный метод (ИФ)). Все наблюдаемые больные получали базисную терапию, включающую в себя дезинтоксикационные мероприятия, этиотропную (применение антибиотиков) и симптоматическую терапию у пациентов с осложненными формами гриппа и ОРЗ. Больные неосложненными формами гриппа получали этиотропную противовирусную (ремантадин), патогенетическую и симптоматическую терапию.

Количественное определение цитокинов (интерферона а (^а), интерферона у (^у), интерлейкина-8 (К-8) и фактора некроза опухолей а (TNFа)) в сыворотках крови методом ИФА осуществляли с помощью отечественных тест-систем, разработанных в ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов. Эти тест- системы основаны на сэндвич-методе твердофазного ИФА с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента. Количественную оценку результатов проводили методом построения калибровочной кривой вручную, на которой отражена зависимость оптической плотности (ОП) от концентрации исследуемого цитокина (пг/мл). Чувствительность метода составляла 5-30 пг/мл.

Статистическую обработку полученных данных проводили с определением числовых характеристик переменных — средней арифметической (М), средней ошибки выборки (т), и определением достоверности различий (р) с помощью непараметрических методов (критериев Вилкоксона (Т) и Манна-Уитни (и)). Различия средних считали достоверными при уровне значимости р < 0,05.

Результаты и обсуждение

Среди наблюдаемых пациентов с диагнозом «грипп, неосложненное течение» в 79,2 % случаев преобладали лица молодого возраста (15-39 лет). В 54,2 % это были мужчины. В 45,8 % случаев больные поступали в стационар на 1-3-й день болезни. Все пациенты переносили заболевание в среднетяжелой форме. Наиболее часто (41,7 %) грипп был вызван вирусом A2 (H3N2). Обследуемая группа больных с диагнозом «грипп (или ОРЗ), осложненные пневмонией» составила 75 человек. Среди наблюдаемых пациентов в 60,5 % случаев преобладали лица молодого возраста (15-39 лет). В 64,5 % случаев это были мужчины. Все больные переносили заболевание в среднетяжелой форме. В большинстве случаев (42,1 %) пациенты поступали в стационар на 4-6-й день болезни. У наблюдаемых больных наиболее часто (15,8 %) грипп был вызван вирусом A2 (H3N2). В 18,4 % случаев причиной заболевания являлась Mycoplasma pneumoniae, в 6,6 % — РС-вирус, в 5,2 % — аденовирус. В 13,2 % случаев пневмония осложняла течение микст-инфекций. Наиболее часто встречалась сливная (60,5 %), нижнедолевая (43,4 %), правосторонняя (63 %) пневмония. При бактериологическом исследовании мокроты больных преимущественно выделялась грамположительная флора (Str. viridans -14,5 %, Str. pneumoniae -7,9 %), в связи с чем основным этиотропным средством в комплексной терапии гриппа и ОРЗ, осложненных пневмонией, являлся пенициллин.

У 24 больных неосложненными формами гриппозной инфекции исследовалось количественное содержание интерферона у в сыворотке крови. Исследование проводилось дважды: в острый период заболевания (2-4-й день болезни) и в период ранней реконвалесценции (6-8-й день болезни).

По результатам исследований установлено, что уровень IFNy в сыворотке крови здоровых лиц не превышает 30 пг/мл. У больных с неосложненными формами гриппозной инфекции выявлено достоверное (p<0,05) повышение его уровня до

± 41,73 пг/мл уже на ранних сроках заболевания. К периоду ранней реконвалесценции данный показатель существенно не изменялся (129,7 ± 33,04 пг/мл), что свидетельствует об усилении противовирусной активности на протяжении всего заболевания.

У больных осложненными формами гриппа и ОРЗ была изучена динамика сывороточного содержания IFNa, IFNy, IL-8 и TNFa. Под наблюдением находилось 29 больных с диагнозом «грипп, осложненный пневмонией» (группа 1) и 46 больных с диагнозом «ОРЗ, осложненные пневмонией» (группа 2). Исследование проводилось в острый период заболевания (4-6-й день болезни), в период разгара (10—12-й день болезни) и в период ранней реконвалесценции (16-18-й день болезни). Установлено, что уровень IFNa и IFNy в сыворотке крови здоровых лиц не превышает 30 пг/мл, а IL-8 — < 20 пг/мл. В исследуемых группах выявлено достоверное (p<0,05) изменение сывороточной концентрации определяемы


ГРЫу составлял ±55,3, ГРЫа — 98,0 ± 34,75, ^-8 — ± 10,51 пг/мл. У больных осложненными формами гриппозной инфекции вышеуказанные показатели на аналогичных сроках заболевания существенно не отличались от 2-й группы:

239,3 ± 76,92, ГРЫа — 83,3 ± 41,42, ^-8

42,3 ± 11,42 пг/мл. Однако у наблюдаемых больных выявлены различия в динамике сывороточного содержания исследуемых цитокинов к периоду ранней ренконвалесценции. Так, у больных гриппом, осложненным пневмонией, отмечено достоверное (р < 0,05) снижение уровня определяемых показателей к этому сроку заболевания. ГРЫу снижался до 75,0 ± 25,44, ГРЫа — до

± 5,99, ]Ъ-8 — до 21,0 ± 5,24 пг/мл. Во 2-й группе больных к 16-18-му дню болезни отмечалась тенденция к снижению уровня ШЫу до 156,0 ± 38,57 пг/мл, уровень ШЫа повышался до 155,0 ± 78,91 пг/мл, а содержание ^-8 практически не изменялось (37,5 ± 19,77 пг/мл). Выявленные изменения сывороточного содержания цитокинов в период ранней реконвалесценции достоверно (р < 0,05) различались между группами.

Таким образом, у больных осложненными формами гриппозной инфекции к периоду ранней ре- конвалесценции наблюдалось достоверное снижение уровня ГРЫа, ГРЫу и ^-8 по сравнению с аналогичными сроками наблюдения у больных осложненными формами ОРЗ. Полученные данные представлены на рис. 1, 2 и 3.

У 29 больных осложненными формами гриппозной инфекции проанализирована динамика сывороточного содержания ГРЫу и ГРЫа в зависимости от продолжительности заболевания.

Нами установлено, что средняя продолжительность гриппозной инфекции, осложненной пневмонией, составляет 21,38 ± 1,25 дня, что явилось критерием для распределения всех исследуемых больных на 2 группы: 1-ю группу составили 16 человек с продолжительностью заболевания < 21 дня, 2-ю группу — 13 человек с продолжительностью заболевания >21 дня. К 4-6-му дню болезни определялось значительное повышение сывороточного содержания №Ыу до

± 36,91 пг/мл у больных 2-й группы и до 147,5 ± 45,17 пг/мл у больных 1-й группы. К

18-му дню болезни в обеих исследуемых группах отмечалось достоверное (р < 0,05) снижение уровня ГРЫу до 81,7 ± 36,26 пг/мл (группа 2) и до 70,0 ± 36,62 пг/мл (группа 1), в то время как достоверных различий данного показателя между группами выявлено не было (рис. 4).

Уровень ГРЫа достоверно (р < 0,05) различался между группами на ранних сроках заболевания. Данный показатель к 4-6-му дню болезни составлял 43,3 ± 12,1 пг/мл у больных с затяжным течением заболевания и был значительно повышен (до 113,3 ± 71,57 пг/мл) у больных с обычным течением заболевания. К периоду ранней реконвалесценции достоверное (р < 0,05) снижение его уровня до 19,4 ± 5,76 пг/мл отмечалось у больных 1-й группы. Во 2-й группе больных данный показатель на аналогичных сроках заболевания составил 28,3 ± 11,71 пг/мл и достоверно не различался между группами (рис. 5).

Таким образом, полученные данные указывают на отсутствие зависимости концентрации исследуемых цитокинов в сыворотке крови больных с осложненными формами гриппозной инфекции от продолжительности заболевания.

Выводы

У больных неосложненными и осложненными формами гриппа и ОРЗ выявлены достоверные изменения концентраций IFNa, №N7 и ^-8 в сыворотке периферической крови, которые зависели от сроков заболевания. У больных гриппом и ОРЗ, осложненными пневмонией, изменений сывороточного содержания TNFa на протяжении всего заболевания выявлено не было.

У больных осложненными формами гриппозной инфекцией к периоду ранней реконвалесценции наблюдалось достоверное снижение сывороточной концентрации всех вышеуказанных цитокинов по сравнению с аналогичными сроками наблюдения у больных осложненными формами ОРЗ, что подтверждает развитие клинически выраженного астенического синдрома у больных осложненными формами гриппозной инфекции в данный период заболевания.

У больных осложненными формами ОРЗ имелась достоверная зависимость между сывороточным содержанием IFNa, №N7 и продолжительностью заболевания. У длительно болеющих пациентов к периоду ранней реконвалесценции уровень этих цитокинов был достоверно снижен. У больных с осложненными формами гриппозной инфекции независимо от
продолжительности заболевания к периоду ранней реконвалесценции наблюдалось снижение уровня ГРЫа и ГРЫу в сыворотке крови.

Таким образом, проведенное исследование показало вариабельность индивидуальной реакции определяемых иммунологических показателей (содержания ГРЫу, ГРЫа и ^-8 в сыворотке крови) на гриппозную инфекцию и ОРЗ. У больных осложненными формами гриппозной инфекции и при затяжном течении пневмонии доказана целесообразность применения средств с иммуномодулирующей активностью в период ранней реконвалесценции.

 

 



загрузка...