Провоспалительные цитокининдуцирующие свойства ангиотензина II и механизм антицитокиновых эффектов ингибитора ангиотензинпревращающего фермента каптоприла
Провоспалительные цитокининдуцирующие свойства ангиотензина II и механизм антицитокиновых эффектов ингибитора ангиотензинпревращающего фермента каптоприла
University of Colorado, School of Medicine, Denver, Colorado, USA;
Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург, Россия
Ангиотензин II (Анг2) является одним из мощных факторов, вовлеченных в развитие прогрессивного тубулоинтерстициального повреждения, а также острого повреждения почек, ведущих к почечной недостаточности. Наряду с известными гемодинамическими свойствами, обнаружены новые свойства Анг2, позволяющие относиться к нему, как к многофункциональному цитокиноподобному фактору. По данным литературы, применение препаратов группы ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента in vivo и in vitro давало видимый антицитокиновый эффект в экспериментах на лабораторных животных и культурах клеток. На модели культуры клеток крови человека in vitro нами установлено: человеческий Ang2 способен индуцировать синтез IL-ip, IL-8, TNFa, IL-1Ra. Синтез IL-8 не зависит от IL-18. In vitro кровь способна к спонтанному синтезу Анг2, сходному по кинетике и уровню с синтезом Анг2 в присутствии LPS. Каптоприл способен блокировать синтез IL-ip и IL-8 независимо от ингибирования ангиотензинпревращающего фермента. (Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5, № 3. С. 40-45.)
Ключевые слова: ангиотензин II, каптоприл, провоспалительные цитокины, антицитокиновая терапия, культура клеток крови человека.
Проблема лечения и предупреждения почечной недостаточности является одной из центральных проблем в мировой нефрологии. Эта проблема тесно связана с клинической практикой специалистов разного профиля и, следовательно, существует множество различных подходов к пониманию механизмов и терапевтических стратегий лечения.
Острая почечная недостаточность (ОПН) составляет 5 % всех поступлений в стационары, смертность при этом остается в пределах 30-80 %. Наиболее частыми причинами развития ОПН у стационарных больных являются ишемия и сепсис [12], однако механизмы патогенеза во многих случаях остаются неясными [10, 19]. Известно, что ангиотензин II (Анг2) является одним из мощных факторов, вовлеченных в развитие прогрессивного тубулоинтерстициального повреждения [3, 13, 19]. Как показали клинические исследования, использование ингибиторов ангиотензинпревраща- ющего фермента (АСЕ^ замедляет прогрессирование заболеваний почек и исход в терминальную почечную недостаточность [17].
Наряду с известными гемодинамическими свойствами Анг2 в последнее время обнаружены новые, позволяющие относиться к нему, как к многофункциональному цитокиноподобному фактору, вовлеченному в процессы воспаления. Предполагается, что именно провоспалительные эффекты Анг2 являются определяющими в патогенезе Анг2-индуцированной ОПН в эксперименте. Анг2 регулирует синтез множества провоспалитель- ных цитокинов как в почечном эпителии, так и в мононуклеарах крови [4, 14, 16]. Повышение уровня Анг2 приводит в тубулоинтерстициальной мак- рофагальной и лимфоцитарной инфильтрации, что наблюдали как при Анг2-индуцированной гипертензии, так и при гипертензии, вызванной попеременным клипированием сосудов обеих почек [13]. Иммуносупрессивная терапия снижала Анг2-ин- дуцированное повреждение почек [13].
Некоторые исследователи отмечают потенциальную роль Анг2 в развитии ОПН [14]. Назначение АСЕ^ таких как каптоприл, предотвращает
развитие ОПН, вызванной нефротоксичными рентгеноконтрастными препаратами [8]. Инактивация Анг2 защищала почки крыс от развития ишемической ОПН. На экспериментальной модели токсического поражения паренхимы почек препараты группы ACEi защищали от ОПН посредством снижения LPS-индуцированного синтеза IL-6 и TNFa [14]. Прямая нейтрализация Анг2 также имела защитный эффект при ОПН, вызванной раствором HgCl2 [20] и глицерином у лабораторных крыс in vivo. Аналогичный эффект на модели глицерининдуцированной ОПН получили, нейтрализуя TNFa.
В свете изложенного логично предположить, что супрессия Анг2 может быть одним из перспективных видов лечения, направленного на защиту почек при различных патологических состояниях. Назначение препаратов группы ACEi в настоящее время является основным, рутинно используемым методом лечения хронических про- теинурических нефропатий [15, 17]. Однако препараты этой группы замедляют, а не останавливают прогрессию заболевания. У пациентов, которые неудовлетворительно отвечают на монотерапию препаратами ACEi, используют их комбинацию с блокаторами рецепторов Анг2 [1, 5, 18].
Приведенные данные показывают, что Анг-ин- дуцированное поражение почек в основном связано с провоспалительными цитокиноподобными свойствами данного регуляторного пептида. Остается пока неясным, возможно ли с помощью нейтрализации Анг2 снизить продукцию провоспали- тельных цитокинов (что важно для достижения ренопротективного эффекта) и существует ли принципиальная возможность, блокировав Анг2, прерывать провоспалительные цитокиновые каскады, вызванные причинами, не связанными с Анг2.
Исследование проведено in vitro на клетках цельной человеческой крови здоровых доноров, а также периферических мононуклеарах. Забор крови производили в 16-20 ч у 14 здоровых добровольцев (5 женщин, 9 мужчин) в возрасте от
до 40 лет. Доноры не имели инфекционных и аутоиммунных заболеваний, а также в течение всего исследования и 2 недель до его начала воздерживались от физических тренировок и применения любых лекарственных препаратов и пищевых добавок. АД доноров было не ниже 100/60 мм. рт. ст. и не выше 130/80 мм. рт. ст.
Кровь с антикоагулянтом (гепарин, 20 ед./мл крови) разбавляли в 4 раза стерильной, подогретой до 37 °С средой RPMI 1640 (ISN Biomedicals Inc., USA) и вносили по 100 мкл в 96-луночный планшет (Greiner, Netherlands), куда затем добавляли 50 мкл стимулятора и 50 мкл другого агента или среды RPMI, когда их использование не требовалось (контроль). Окончательные концентрации реагентов в эксперименте были следующими: рекомбинантного человеческого ангиотензина 2 (Sigma, USA) — 250, 500 и 1000 нМ, LPS из E. coli (Difco, USA) —
нг/мл; IL-1? (Peprotech, USA) — 20 нг/мл; антагониста рецептора IL-1 (человеческий рекомбинантный IL-1Ra, Upjohn Co., USA) — 100 мкг/мл; IL-18-связывающего белка IL-18BP (Peprotech Inc., USA) — 50 нг/мл; препарата каптоприл (Sigma, USA) — 2 мМ, 1 мМ, 0,5 мМ. Все препараты цитокинов и их антагонистов были рекомбинантными человеческими белками. После инкубации культуры в увлажненном воздухе с 5% CO2 при 37 °С в течение 10-12 ч кровь лизировали тритоном Х-100, супернатант собирали и анализировали на предмет содержания цитокинов методом жидкостной хемоэлектролюминесценции (ЭХЛ).
Метод жидкостной ЭХЛ [6]. Очищенные моноклональные мышиные антитела против измеряемого цитокина метили с помощью биотина (Igen Inc., USA). Другие мышиные антитела к тому же цитокину (R&D Systems, USA), реагирующее с другим эпитопом, метили хелатом рутения (II) по методике производителя измерительного прибора Origen Analyzer (Igen, USA). 25 мкл биотинилированного антитела (1 мг/мл в ЭХЛ- буфере [6]) инкубировали 30 мин при комнатной температуре с 25 мкл суспензии покрытых стрептавидином парамагнитных бус (1 мг/мл, Dynal, USA). Затем к смеси добавляли
мкл супернатанта, исследуемого на содержание цитокина, или стандартных концентраций рекомбинантного цитокина. Наконец, добавляли 25 мкл рутенилированных антител (1 мкг/мл в ЭХЛ-буфере), пробирки встряхивали в течение 2 ч или ночи при комнатной температуре. Реакцию гасили добавлением 200 мкл фосфатного буфера и измеряли на приборе Origen Analyzer (Igen, USA).
Определение содержания Анг-2 в супернатанте производили иммуноферментным методом в соответствии с инструкцией производителя реагентов (Sigma, USA).
Статистическая обработка. Данные нормировали в соответствии с контролем. Ненормально распределенные данные анализировали с помощью непараметрического непарного теста Манна—Уитни. Группы сравнивали тестом ANOVA с использованием поправки Фишера. Статистическая значимость различий принималась в 95%-ном доверительном интервале. Статистический анализ проводили с использованием пакета прикладных программ Statviewj^ 512+ (Brainpower, USA). Значения выражены как средняя арифметическая ± - стандартная ошибка средней (M±SE).
В результате проведенных экспериментов установлено, что стимуляция культур клеток крови человека in vitro рекомбинантным препаратом Анг2 человека в концентрациях от 250 до 1000 нМ дозозависимым образом стимулирует продукцию цитокинов провоспалительного ряда: IL-8, IL-1 в, TNFa, и вызывает дозозависимое увеличение выработки эндогенного IL-1Ra — противовоспалительного фактора, антагониста рецептора IL-1 в (рис. 1). По сравнению с контролем (нестимулиро- ванными культурами крови в среде RPMI 1640) под действием Анг2 наблюдалось статистически значимое увеличение указанных цитокинов (значения p во всех случаях удовлетворяли критерию достоверности). Стимулированная Анг2 продукция ^-8 (и 1Ъ-1 в) не нарушалась при блокировании ^-18. При добавлении ^-18ВР в культуры клеток крови, стимулированные Анг2, стимуляция синтеза ^-8 достоверно не изменялась по сравнению с действием одного Анг2. Эти данные указывают, что
В подтверждение неспецифического противовоспалительного действия препаратов группы ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента мы проанализировали влияние каптоп- рила на выработку ^-8. В качестве стимулятора синтеза ^-8 в этих опытах был использован LPS в дозе 20 нг/мл. На модели цельной крови человека, разведенной стерильной средой RPMI 1640, было показано, что имеет место значимое снижение синтеза ^-8 (р < 0,05) при дозе кап- топрила 1 и 2 мМ. Содержание ^-8 при этом снизилось в 4-5 раз (рис. 4). Таким образом, синтез ^-8 в клетках крови не только может быть индуцирован Анг2, добавленным в культуру клеток извне в качестве провоспалительного агента, но находится под контролем эндогенного Анг2 и существенно зависит от образования этого медиатора внутри клеток, поскольку подавляется в присутствии ингибитора фермента, ответственного за процессинг Анг2.
Для уточнения того, каким образом LPS вызывает синтез ^-8 (напрямую или опосредованно через другой цитокин) и на каком уровне происходит блокировка провоспалительного каскада каптоприлом, проверяли, блокирует ли капто- прил ^-1Р-индуцированный синтез ^-8. Полученный результат показал (см. рис. 4), что IL-1- индуцированный синтез IL-8 (как и LPS-индуци- рованный) дозозависимо подавляется каптопри- лом и, следовательно, также зависит от выработки эндогенного Анг2. Эти опыты позволяют заключить, что LPS действует на синтез IL-8 опосредованно, через IL-1 в (см. рис. 4).
Для выяснения вопроса о возможном участии эндогенного Анг2 в цитокиновых ответах клеток крови на LPS была поставлена еще одна серия опытов по прямому определению уровня Анг2 при стимуляции культур клеток крови с помощью LPS. При этом был получен весьма неожиданный результат.
Из приведенного ниже графика (рис. 5) видно, что кровь способна вырабатывать Анг2 и без стимуляции LPS, т. е. спонтанно. При этом обнаружена четкая временная зависимость: уровень эндогенного Анг2 в течение 4 ч повышался более чем в 2,5 раза по сравнению с начальным. Имеется статистически значимое различие (р < 0,05) в уровнях Анг2 через 4 ч и в начале инкубации (0,5 ч) как в группе культур, стимулированных LPS, так и в группе нестимулирован- ных культур цельной крови. В то же время нет никаких значимых различий между группами на каждом сроке инкубации.
Причины спонтанной активации синтеза Анг2 при культивировании разбавленной крови здоровых людей in vitro заслуживают внимания и дальнейшего изучения.
Цитокининдуцирующая (и, вероятно, провос- палительная) активность Анг2 может быть эффективно блокирована фармакологической анти- цитокиновой терапией. Препарат группы ACEi каптоприл снижает вызываемую Анг2 продукцию цитокинов. Механизм противовоспалительного действия каптоприла, однако, не ограничивается блокадой ангиотензинпревращающего фермента, каптоприл влияет на синтез цитокинов и каким-то другим путем, который требует изучения и который можно назвать «собственным антицитокиновым эффектом». Данные литературы подтверждают наши выводы относительно других цитокинов: Каптоприл, лизиноприл проявляют иммуномодулирующее действие как ингибиторы синтеза IL-12 in vitro [4] периферическими мононуклеарами человека, стимулированными LPS. Каптоприл способен нарушать синтез IL-1P моноцитами, стимулированными TNFa. Установлено, что в данном случае каптоприл препятствует проникновению составной субчастицы p65 фактора NF-kappaB в ядро и, таким образом, прерывает синтез РНК для IL-1 в [2]. Использование каптоприла и саралазина на модели культуры клеток zona glomeruloza почек крыс привело к снижению синтеза альдостерона и, соответственно, ангиотензина [16]. Имеются данные также о снижении синтеза IL-6 [9], IL-1a, IL-10, IL-12 и IL-18 на модели предшественников моноцитов человека [11].
Таким образом, результаты нашего исследования поддерживают утверждающийся новый подход к известному вазоактивному пептиду Анг2 как к одному из провоспалительных цитокинов (или цитокиноподобному фактору) и заставляют по другому взглянуть на известную группу препаратов (блокаторов ангиотензинпревращающе- го фермента) как на иммуномодулирующие препараты. Практически это может помочь в выработке новых стратегий лечения гипертонической болезни, различных патологических состояний в практике отделений ОРИТ, связанных с системным воспалительным ответом организма, интенсивной нефрологии. Возможны варианты лечебного использования ACEi как имммуносупрессо- ров в трансплантологии.
Авторы выражают благодарность участникам данного проекта: исследование проводилось при непосредственном научном и финансовом участии профессоров Dr. Robert W. Schrier, MD, Dr. Charles A. Dinarello, MD (University of Colorado School of Medicine, Departaments of Nephrology and Infection Diseases), а также при поддержке исследовательского гранта ISN (Международного общества нефрологов) и гранта РФФИ № 06-04-49629.
Литература
Abbate M., Zoja C., Rottoli D. et al. Proximal tubular cells promote fibrogene- sis by TGF-betal-mediated induction of peritubular myofibroblasts // Kidney Int. — 2002. — Vol. 61. — P. 2066-2077.
Andersson P., Cederholm T., Johansson A.S., Palmblad J. Captopril-impaired production of tumor necrosis factor-alpha-induced interleukin-lbeta in human monocytes is associated with altered intracellular distribution of nuclear factor-kappaB // J. Lab. Clin. Med. — 2002. — Vol. 140. — P. 103-109.
Cao Z., Cooper M.E. Role of angiotensin II in tubulointerstitial injury // Semin. Nephrol. — 2001. — Vol. 21. — P. 554-562.
Constantinescu C.S., Goodman D.B., Ventura E.S. Captopril and lisinopril suppress production of interleukin-12 by human peripheral blood mononuclear cells // Immunol. Lett. — 1998. — Vol. 62. — P. 25-31.
Doggrell S.A. Angiotensin AT-1 receptor antagonism: complementary or alternative to ACE inhibition in cardiovascular and renal disease? // Expert Opin. Pharmacother. — 2002. — Vol. 3. — P. 1543-1556.
Fantuzzi G., Reed D.A., Dinarello C.A. IL-12-induced IFN-gamma is dependent on caspase-1 processing of the IL-18 precursor // J. Clin. Invest. —
— Vol. 104. — P. 761-767.
Fukada M., Kato S., Miyoshi M. et al. Systemic administration of lipopolysaccha- ride upregulates angiotensin II expression in rat renal tubules: immunohistochem- ical and ELISA studies // Peptides. — 2005. — Vol. 26. — P. 2215-2221.
Gupta R.K., Kapoor A., Tewari S. et al. Captopril for prevention of contrast-induced nephropathy in diabetic patients. — P. a randomised study // Indian Heart J. — 1999. — Vol. 51. — P. 521-526.
Ihm C.G., Park J.K., Kim H.J. et al. Effects of high glucose on interleukin-6 production in human mesangial cells // J. Korean Med. Sci. — 2002. — Vol. 17. — P. 208-212.
Kribben A., Edelstein C.L., Schrier R.W. Pathophysiology of acute renal failure // J. Nephrol. — 1999. — Vol. 12, suppl. 2. — P. S142-S151.
Lapteva N., Ide K., Nieda M. et al. Activation and suppression of renin-angio- tensin system in human dendritic cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. —
— Vol. 296. — P. 194-200.
Melnikov V.Y., Ecder T., Fantuzzi G. et al. Impaired IL-18 processing protects caspase-1-deficient mice from ischemic acute renal failure // J. Clin. Invest. — 2001. — Vol. 107. — P. 1145-1152.
Muller D.N., Shagdarsuren E., Park J.K. et al. Immunosuppressive treatment protects against angiotensin II-induced renal damage // Am. J. Pathol. — 2002. — Vol. 161. — P. 1679-1593.
Nakamura A., Johns E.J., Imaizumi A. et al. Role of angiotensin II-induced cAMP in mesangial TNF-alpha production // Cytokine. — 2002. — Vol. 19. — P. 47-51.
Ram C.V., Vergne-Marini P. Role of angiotensin-converting enzyme inhibitors and angiotensin-receptor blockers in the prevention of progression of renal disease // Curr. Hypertens. Rep. — 1999. — Vol. 1. — P. 431-435.
Ruiz-Ortega M., Ruperez M., Lorenzo O. et al. Angiotensin II regulates the synthesis of proinflammatory cytokines and chemokines in the kidney // Kidney Int. Suppl. — 2002. — P. 12-22.
Taal M.W., Brenner B.M. Evolving strategies for renoprotection: non-diabetic chronic renal disease // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. — 2001. — Vol. 10. — P. 523-531.
Uhlenius N., Miettinen A., Vuolteenaho O., Tikkanen I. Renoprotective mechanisms of angiotensin II antagonism in experimental chronic renal failure // Kidney Blood Press. Res. — 2002. — Vol. 25. — P. 71-79.
Wolf G., Butzmann U., Wenzel U.O. The renin-angiotensin system and progression of renal disease: from hemodynamics to cell biology // Nephron. Physi
ol. — 2003. — Vol. 93. — P. 3-13.
2 0.Yanagisawa H. [HgCl2-induced acute renal failure and its pathophysiology] // Nippon Eiseigaku Zasshi. — 1998. — Vol. 52. — P. 618-623.
Pro-inflammatory cytokine-inducing properties of human angiotensin II and mechanism of anti-cytokine properties of ACE inhibitor captopril
State Hospital No. 12 - City Centre for Haemocorrection, St. Petersburg, Russia;
University of Colorado Health Science Centre, Denver, Colorado, USA;
Institute of Experimental Medicine RAMS, St. Petersburg, Russia
Human angiotensin II (Ang2) is one of the potent factors involved in acute and chronic tubulointerstitial kidney damage leading to renal failure. Besides well-known haemodynamic properties of Ang2, evidence suggests that cytokine-like features of this peptide are responsible for variety chronic inflammatory disease progression. An understanding of those mechanisms opens avenues for more efficient therapeutic intervention and development of new therapeutic strategies. Numerous studies have provided clear evidence that angiotensin-converting enzyme inhibitors (ACEi) demonstrate clear anti-cytokine effect in vivo and in vitro. Our study was designed to explore some new properties of Ang2 and ACEi captopril in vitro using human whole blood cell culture. Human recombinant Ang2 is able to induce IL-1P, IL-8, TNFa and IL-1Ra. IL-8 synthesis is IL-18 independent. Human blood produces spontaneous Ang2 in vitro which is independent of LPS stimulation. ACEi captopril blocks IL-1P and IL-8 synthesis independently of inhibiton of angiotensin converting enzyme. (Cytokines and Inflammation. 2006. Vol. 5, № 3. P. 40-45.)
Key words: angiotensin II, captopril, proinflammatory cytokines, anti-cytokine therapy,
Сравнительное изучение уровней некоторых цитокинов, белков острой фазы, тиреотропного гормона и антител к тиреопероксидазе при лечении аутоиммунного тиреоидита
ГОУ ДПО «Институт усовершенствования врачей», г. Новокузнецк
Исследовали сыворотку крови 24 женщин с верифицированным аутоиммунным тиреоидитом (АИТ) до и через 6 месяцев от начала лечения L-тироксином в адекватной дозе. До лечения констатированы повышенные концентрации аутоантител к тиреопероксидазе (АТ-ТПО), тиреотропного гормона (ТТГ), И-1р, И-6 и ^N7; неизменные концентрации а2-макроглобулина (а2-М) и а1- антитрипсина (а1-А), и И-2; пониженное содержание TNFa по сравнению со здоровыми. Через 6 месяцев лечения выявлена нормализация уровней ТТГ, ^-6 и ^N7, а также значительное снижение АТ-ТПО, 1Ь-1 в и TNFa на фоне неизменных уровней IL-2, а2-М и а1-А. Таким образом, несмотря на лечение L-тироксином, аутоиммунный процесс остается, о чем свидетельствует все еще высокий уровень АТ-ТПО и повышенный уровень ^-1р. (Цитокины и воспаление. 2006. Т.
Аутоиммунные заболевания эндокринной системы, в частности аутоиммунный тиреоидит (АИТ), сопровождаются синтезом аутоантител, способствующих нарушению механизмов эндокринной и цитокиновой регуляции [1, 4, 5, 7, 8]. Эф- фекторные функции пептидных гормонов и цито- кинов реализуются при участии белков семейства макроглобулинов от этапа секреции до влияния на геном клеток-мишеней [3]. Целью исследования было изучение у больных АИТ до и после лечения комплекса показателей, включающего уровни циркулирующих аутоантител, а2-мак- роглобулина, тиреоидных гормонов и цитокинов.
Обследовано 24 женщины с АИТ в возрасте от 23 до 56 лет до начала и через 6 месяцев после лечения L-тироксином. Диагноз АИТ был установлен на основании «больших» диагностических признаков, а именно: первичного гипотиреоза, наличия антител к ткани щитовидной железы и ультразвуковых признаков аутоиммунной патологии [5]. Венозную кровь на исследование брали в утренние часы, натощак, до начала терапии и через полгода лечения гипотиреоза L-тироксином в адекватной дозе (не менее 1,6 мкг/кг массы тела пациента) согласно «Клиническим рекомендациям Российской Ассоциации эндокринологов по диагностике и лечению аутоиммунного тиреоидита у взрослых» [5]. В сыворотке крови определяли концентрации тиреотропного гормона (ТТГ), антител к тиреопероксидазе (АТ-ТПО) и цитокинов IL-ip, IL-2, IL-6, IFNy и TNFa. Исследование концентрации цитокинов проводили твердофазным иммуноферментным методом с применением реагентов фирм «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург) и «Вектор-Бест» (Кольцово). Концентрации а2-макроглобули- на (а2-М) и другого острофазового белка крови а1-антитрип- сина (al-А) определяли методом ракетного иммуноэлектрофореза с использованием моноспецифических антисывороток и калибраторов собственного производства [2]. Для обработки результатов иммунохимического анализа применяли программу PC Microplate Manager (Bio-Rad, USA). Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета прикладных программ InStat 2.0 (Sigma, USA).
У пациенток с диагнозом АИТ до лечения были значительно увеличены концентрации аутоантител и ТТГ — они в среднем более чем в 10 раз превосходили допустимые пределы нормы (табл.). Кроме того, выявлено значительное (р < 0,0001) увеличение уровня IL-ip (почти в 10 раз по срав
нению с нормой) и несколько менее выраженное, но статистически значимое увеличение концентраций №N7 ф = 0,0139; в среднем трехкратное увеличение по сравнению с нормой) и ^-6 ф < 0,0001; приблизительно в 6 раз выше нормы). В то же время содержание ^-2 в крови не отличалось от контрольных показателей, а уровень TNFa даже снижался ф = 0,0083). Наконец, концентрации реактантов острой фазы а1-А и а2-М оставались неизменными.
Считается общепринятым, что синтез ^-6, ^-1р и TNFa тесно взаимосвязан [6]. ^-1р, TNFa и ^-6 являются коиндукторами генов сывороточных белков — реактантов острой фазы воспаления, и активируют гены друг друга [3, 7]. Согласно полученным нами данным, при АИТ рост концентрации ^-6 не приводил ни к изменению синтеза провоспалительных цитокинов ^-1р и TNFa, ни к развитию типичной острофазовой воспалительной реакции, что выражалось в отсутствии изменений уровней a1-А и a2-М. Не изменялась и концентрация ^-2 [3-5]. Недавно показано, что в крови больных АИТ с высокими титрами антитиреоидных антител присутствуют CD4+- и CD8+-лимфоциты, продуцирующие №N7, но не другие исследованные цитокины [7]. Данный факт имеет принципиальное значение для трактовки наших результатов: №N7 является ингибитором экспрессии основного рецептора эндоцитоза — липопротеинового рецепторного белка LRP1 (CD91), а именно через CD91 в клетку поступают регуляторные комплексы, состоящие из a2-М и транспортируемых им цитокинов или пептидных гормонов [3]. Следовательно, увеличение концентраций цито- кинов и ТТГ при АИТ можно рассматривать как результат снижения способности гормонов и цитокинов проникать в клетки-мишени за счет блокирования рецептора транспортирующего их белка.
Избыточный аутоантителогенез и увеличение концентрации ТТГ являются характерными чертами АИТ [4, 5]. Через 6 месяцев от начала лечения пациенток с АИТ L-тироксином в адекватной дозировке было констатировано статистически значимое снижение уровней ТТГ и АТ-ТПО. Однако уровни ТТГ оставались несколько повышенными по сравнению с показателями, характерными для здоровых лиц; а концентрации АТ-ТПО, несмотря на снижение, оставались в среднем в 8 раз выше, чем предельно допустимые (см. табл.). Содержание большинства изученных цитокинов (за исключением IL-2) также значительно снижалось. При этом концентрации IL-6 и IFNy нормализовались, содержание IL-1P оставалась повышенным (р = 0,0197), а уровень TNFa оказался значительно пониженным по сравнению со здоровыми (p < 0,0001).
Выявленное нами снижение уровня TNFa при АИТ после лечения представляется важным. TNFa препятствует поддержанию иммунологической толерантности [6], и его снижение в результате проведенного лечения может служить дополнительным доказательством успешности терапии.
Необходимо отметить, что нами выявлена большая индивидуальная вариабельность в уровнях IL-1P и IL-6 после лечения. Наконец, концентрации острофазовых белков а1-А и а2-М не изменялись при проводимом лечении АИТ, оставаясь в интервалах нормальных показателей. Наши данные согласуются с данными литературы, свидетельствующими о значительном повышении у больных АИТ спонтанной продукции провоспали- тельных цитокинов (TNFa, IL-1P и IL-6) клетками периферической крови и снижении способности клеток отвечать на индуктор in vitro [1, 5]. Отмеченное нами снижение концентрации некоторых цитокинов после лечения АИТ тиреоидным препаратом может свидетельствовать о снижении активности аутоиммунного процесса при восстановлении функции щитовидной железы. Однако остающиеся повышенными уровни антител к тиреопероксидазе, гетерогенность показателей содержания IL-6 и повышенный уровень IL-1Р после лечения не позволяют говорить о полном восстановлении иммунного статуса организма. Мы считаем, что оценка уровня IFNy до и после лечения может быть использована в качестве дополнительного критерия оценки эффективности проводимого лечения. Литература
Глазанова Т. В., Бубнова Л.Н., Трунин Е.М. и др. Продукция некоторых ци-
токинов у больных с аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы // Пробл. эндокринол. — 2004. — № 3. — С. 29-31.
Зорин Н.А., Жабин С.Г., Лыкова О.Ф. и др. Белки плазмы и сыворотки крови доноров // Клин. лаб. диагн. — 1992. — № 9-10. — С. 13-15.
Ярилин А.А. Основы иммунологии. — М.: Медицина, 1999. — 608 с.
Karanikas G., Schuetz M., Wahl K. et al. Relation of anti-TPO autoantibody titre and T-lymphocyte cytokine production patterns in Hashimoto's thyroiditis // Clin. Endocrinol. (Oxf.). — 2005. — Vol. 63, № 2. — P. 191-196.
Phenekos C., Vryonidou A., Gritzapis A.D. et al. Th1 and Th2 serum cytokine profiles characterize patients with Hashimoto's thyroiditis (Th1) and Graves' disease (Th2) // Neuroimmunomodulation. — 2004. — Vol. 11, № 4. — P. 209-213.
N.A. Zorin, T.V. Appelgans, T.P. Maklakova, V.N. Zorina Institute of Postgraduate Medical Education, Novokuznetsk
Blood samples from 24 women with verified autoimmune thyroiditis (AIT) before and 6 months after treatment with L-thyroxin were investigated. Before treatment, increased concentrations of antibodies to thyroid peroxidase (anti-TPO), thyrotropic hormone (TTG), IL-ip, IL-6 and IFNy, unchanged levels of a2-macroglobulin (a2-M), ai-antitripsin (ai-A) and IL-2, and lowered contents of TNFa in comparison with healthy donors were observed. After 6 months of treatment, levels of TTG, IL-6 and TNFa became normal, anti-TPO, IL-ip and TNFa significantly decreased, and concentrations of IL-2, a2-M, and ai-A remained at the initial level. Conclusion: despite the treatment, the autoimmune process still persists as demonstrated by high level of anti-TPO and as yet elevated level of IL-ip in AIT patients treated with L-thyroxine. (Cytokines and Inflammation. 2006. Vol. 5, № 3. P. 46-48.)
