В.Г. Конусова, Е.С. Романова, И.В. Чурилова, Н.В. Леонова, Ю.И. Дроздова, А.С. Симбирцев, А.М. Ищенко, А.В. Жахов, Н.И. Кузнецов, В.И. Кабанова ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт Петербург, Медицинская академия последипломного образования, Санкт Петербург Изменение показателей оксидантного и цитокинового статуса больных хроническим вирусным гепатитом С и В при лечении препаратом рекомбинантного интерлейкина 1? человека
В.Г. Конусова, Е.С. Романова, И.В. Чурилова, Н.В. Леонова, Ю.И. Дроздова, А.С. Симбирцев, А.М. Ищенко, А.В. Жахов, Н.И. Кузнецов, В.И. Кабанова ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт Петербург, Медицинская академия последипломного образования, Санкт Петербург Изменение показателей оксидантного и цитокинового статуса больных хроническим вирусным гепатитом С и В при лечении препаратом рекомбинантного интерлейкина 1? человека
Представлены результаты лечения 10 больных хроническим гепатитом С и 8 больных гепатитом С и В рекомбинантным интерлейкином 1? (Беталейкином). У больных изучены следующие показатели: спонтанная и индуцированная люминолзависимая хемилюминесценция (ХЛ) цельной крови, уровень супероксиддисмутазы (СОД) и малонового диальдегида (МДА) в крови, содержание в сыворотке крови интерферонов ? и ?, интерлейкина 8 (IL-.8), антагониста рецептора интерлейкина 1 (АРИЛ), фактора некроза опухолей ? (TNF?), а также спонтанная и индуцированная продукция клетками крови IL-.8 и TNF?. Показано, что курс из 10 внутривенных, капельных инъекций Беталейкина через день в дозе 7–8 нг/кг веса к концу курса лечения увеличивал индуцированную ХЛ, повышал содержание СОД и снижал уровень МДА. Из всех изученных цитокинов наиболее адекватно реагировал на введение Беталейкина IL-.8. Уровень интерферона ? практически не изменялся в ответ на лечение, интерферон ? имел тенденцию к увеличению содержания в сыворотке. Клинические и биохимические показатели свидетельствовали о положительном эффекте от применения Беталейкина. Ключевые слова: гепатит С и В, Беталейкин, провоспалительные цитокины, супероксиддисмутаза, хемилюминесценция. Лечение хронических вирусных гепатитов С и В является одной из наиболее актуальных проблем современной медицины. Однако, несмотря на то что постоянно разрабатываются новые и совершенствуются хорошо известные схемы применения основных противовирусных препаратов, таких, как интерфероны и аналоги нуклеозидов, эффективность данной терапии составляет неболее 50 % [1, 5]. Альтернативным подходом к лечению больных вирусным гепатитом (ВГ) является применение иммуномодуляторов широкого спектра действия, например, рекомбинантного интерлейкина 1?. Ранее нами было опубликовано сообщение об использовании рекомбинантного интерлейкина 1? (IL-1) человека (препарат Беталейкин) для лечения хронических вирусных гепатитов С и В [2]. В данной работе мы приведем расширенные данные по исследованию иммунного статуса больных, получавших терапию Беталейкином. Как известно, при хронических формах вирусных гепатитов С и В специфический ответ Тлимфоцитов либо ослаблен, либо вообще отсутствует, угнетены неспецифические механизмы резистентности, в частности, значительно снижена функциональная активность нейтрофильного звена. В связи с этим использование Беталейкина целесообразно, так как IL-1? стимулирует как неспецифические механизмы резистентности, связанные главным образом с активацией функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов, так и специфический иммунный ответ. Механизм иммуностимулирующего действия IL-1? связан с увеличением дифференцировки лимфоцитов и повышением их функциональной активности, а именно: усилением синтеза лимфоцитами IL-2,повышением IL-2зависимой пролиферации, а также увеличением антителообразования. Таким образом, IL-1? обладает широким спектром биологических активностей: усиливает функциональную активность Т клеточного звена иммунитета увеличивает активность НКклеток иопосредованно вызывает индукцию собственного (эндогенного) интерферона в организме хозяина [3]. Целью данного исследования явилось динамическое изучение продукции фагоцитирующими клетками периферической крови кислородных радикалов, состояния антиоксидантной защиты и особенностей цитокинового статуса больных хроническим вирусным гепатитом С, а также хроническим вирусным гепатитом смешанной этиологии С и В в процессе лечения Беталейкином как в самые ранние сроки после введения препарата, так и по окончании лечения. Материалы и методы Курс лечения Беталейкином был проведен 10 больным хроническим вирусным гепатитом С (ХГС) и 8 больным хроническим вирусным гепатитом смешанной С и В этиологии (ХГС ХГВ). Возраст больных колебался в пределах от 15 до 26 лет, средний возраст составил 20,2 ± 4,3 года. Диагноз устанавливали на основании общепринятых клинических, эпидемиологических и биохимических данных и подтверждали обнаружением маркеров вирусного гепатита В и С методом иммуноферментного анализа — HВsAg, HВeAg, HВcor IgM, суммарных анти HCV антител, а также обнаружением ДНК вируса гепатита В и РНК вируса гепатита С в сыворотке крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Кроме того, проводили морфологическое исследование биоптатов ткани печени, которое подтверждало хроническую форму течения вирусного гепатита у обследуемых больных. Наличие гепатитов другой этиологии исключали путем обследования больных на антиHAV IgM и антиHDV. Больные получали Беталейкин на фоне базисной терапии; доза вводимого препарата составила 7–8 нг/кг, курс лечения— 20 дней (10 внутривенных капельных вливаний через день). Лечение Беталейкином контролировали лабораторными исследованиями, которые проводили до введения и непосредственно после введения препарата, через сутки после первой инъекции, в середине и по окончании курса терапии Беталейкином. Последнее исследование осуществляли через месяц после окончания лечения. Наряду с биохимическим обследованием определяли состояние иммунного статуса у больных вирусными гепатитами В и С до и после лечения. Изучали процессы образования свободнорадикальных форм кислорода с помощью метода люминолзависимой хемилюминесценции (ХЛ) цельной крови, позволяющего оценивать весь спектр кислородных метаболитов, продуцируемых фагоцитирующими клетками периферической крови. Определяли уровень спонтанной ХЛ и ХЛ, индуцированной форболмиристатацетатом (ФМА). Исследование проводили на хемилюминоментре LKB1251 (Швеция). Определяли также состояние антиоксидантной системы по содержанию фермента супероксид дисмутазы (СОД) в эритроцитах. Для определения уровня СОД использовали спектрофотометрический метод, основанный на торможении реакции окисления кверцитина. Параллельно исследовали процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) по уровню в сыворотках крови больных основного конечного продукта ПОЛ — малонового диальдегида (МДА). Уровень МДА определяли в тесте с тиобарбитуровой кислотой. Состояние цитокинового статуса изучали иммуноферментным методом с помощью тестсистем производства ООО «Цитокин» (С.Петербург). Определяли содержание в сыворотках крови больных следующих провоспалительных цитокинов: фактора некроза опухолей (TNF?), интерлейкина 8 (IL-8), антагониста рецептора IL-1? (АРИЛ). Кроме того, в сыворотках крови больных определяли уровень интерферонов ? и ?. Изучение содержания провоспалительных цитокинов в сыворотках крови больных дополняли исследованием особенностей продукции этих цитокинов моноцитами периферической крови больных. Исследовали как спонтанную продукцию цитокинов клетками крови, так и особенности ответа на индуктор. В качестве индуктора использовали липополисахарид (ЛПС). Содержание цитокинов в кондиционных средах также определяли иммуноферментным методом. Статистическую обработку осуществляли с помощью непараметрического метода МаннаУитни. Результаты и обсуждение Под наблюдением находилось 18 больных хроническим вирусным гепатитом с умеренно выраженным цитолитическим синдромом, без осложнений, с начальными признаками фиброзирования ткани печени. Из них 10 больных переносили ХГС, и 8 больных — хронический вирусный гепатит смешанной С и В этиологии. У больных ХГС в 55,5 % случаев отсутствовали какиелибо клинические проявления, у остальных больных ХГС выявлялись симптомы смешанного характера с преобладанием астеновегетативного и диспепcического синдромов. В группе больных хроническим вирусным гепатитом смешанной С и В этиологии в 60 % случаев заболевание протекало по смешанному типу с преобладанием диспептического синдрома. Часто заболевание характеризовалось проявлениями астеновегетативного и артралгического синдромов. У 10 % больных никаких клинических проявлений не определялось. У 70 % больных, входящих в состав первой и второй групп, выявлялась умеренная гепатомегалия. На введение Беталейкина отмечались ожидаемые умеренно выраженные побочные эффекты, а именно: головная боль, боль в суставах, повышение температуры тела до 37–38° С. Данные проявления появлялись у больных непосредственно во время введения препарата и держались в течение 2–3 ч после прекращения введения. Наблюдаемые эффекты нельзя считать побочными в полном смысле слова, скорее они — суть разностороннего биологического действия IL-1?. Ни у одного из больных не наблюдалось осложнений, вызвавших отказ от лечения и отмену препарата. После проведенной терапии Беталейкином отмечалось улучшение общего состояния больных. Улучшалось самочувствие, к окончанию курса лечения препаратом нормализовались размеры печени. Кроме того, определялась положительная динамика ос
Таблица 1 Биохимические показатели обследуемых больных на фоне терапии Беталейкином
Примечание. Здесь и далее приведены средние арифметические величины и ошибки средних. Прочерки — исследование не проводилось. Звездочкой отмечено достоверное отличие от соответствующего показателя до лечения. АлАТ — аланинаминотрансфераза, ХГС — хронический гепатит С, ХГВ — хронический гепатит В.
Таблица 2 Динамика выявляемости РНК вируса гепатита С и ДНК вируса гепатита В у больных с хроническим вирусным гепатитом смешанной С и В этиологии на фоне применения Беталейкина
Примечание. Подгруппа 1 — больные с «истинным» микстгепатитом, подгруппа 2 — больные с преобладающей репликацией вируса гепатита В. ВГС — вирусный гепатит С, ВГВ — вирусный гепатит В.
Таблица 3 Динамика изменения люминолзависимой хемилюминесценции цельной крови больных хроническим гепатитом С и его сочетанием с хроническим гепатитом В в процессе лечения Беталейкином
Примечание. ХЛ спонт. и ХЛ индуц. — спонтанная и индуцированная хемилюминесценция. Интенсивность хемилюминесценции (ХЛ) выражена числом mV за 30 мин. Здесь и далее звездочкой () отмечены достоверные отличия от соответствующих показателей здоровых.
новных биохимических показателей. Динамика биохимических показателей обследуемых больных представлена в табл. 1. Так, если до лечения у больных ХГС активность АлАТ (аланинаминотрансферазы — одного из основных показателей активности процесса) составляла в среднем 482,33 ± 136,6 ед/л, а у больных ХГС ХГВ — 678,3 ± 173,9 ед/л, то после терапии препаратом уже на 5м введении активность АлАТ снижалась до 337,7 ± 60,6 ед/л у больных ХГС и до 490,6 ± 271,1 ед/л у больных, переносящих ХГС ХГВ; через 1 мес. после окончания курса лечения средние показатели активностизатели активности АлАТ у больных ХГС и ХГС ХГВ составили 41,3 ± 13,5 и 39,0 ± 8,6 ед/л соответственно (р < 0,05). Помимо обычного рутинного биохимического обследования, всем больным проводилось выявление ДНК вируса гепатита В и РНК вируса гепатита С в сыворотке крови методом ПЦР. У 7 больных ХГС до лечения выявлялась РНК ВГС, у 3 больных ХГС не наблюдалось репликативной активности ВГС, т.е. в сыворотке крови не было РНК ВГС. У 6 больных ХГС ХГВ до лечения выявлялась только ДНК ВГВ, у 3 больных из этой группы выявлялась активность как вируса гепатита С, так и вируса гепатита В, т.е. у них одновременно выявлялись и РНК ВГС, и ДНК ВГВ. После проведенной терапии Беталейкином мы наблюдали статистически достоверную динамику репликативной активности вируса, по данным ПЦР, в сыворотке крови больных как хроническим вирусным гепатитом С, так и хроническим вирусным гепатитом смешанной С и В этиологии. Так, у больных ХГС РНК ВГС не выявлялась у 4 больных с наличием репликации вируса до лечения; кроме того, у больных без репликативной активности вируса до лечения результаты ПЦР оставались прежними, т.е. РНК ВГС в сыворотке крови не определялась. В группе больных ХГС ХГВ с репликативной активностью как вируса гепатита С, так и вируса гепатита В после проведения терапии Беталейкином ни РНК ВГС, ни ДНК ВГВ не определялась. У больных с активностью только вируса гепатита В (6 человек) ДНК ВГВ после лечения выявлялась лишь у 2 человек (табл. 2). Помимо клиникобиохимических показателей и выявления РНК и ДНК вирусов в сыворотке крови больных, получавших Беталейкин, мы исследовали состояние фагоцитарной системы, оцениваемой методом люминолзависимой ХЛ, а также состояние антиоксидантного и цитокинового статуса до лечения, на фоне терапии после окончания курса лечения и через 1 мес. Результаты изучения люминолзависимой хемилюминесценции цельной крови больных хроническим гепатитом С, а также хроническим вирусным гепатитом смешанной этиологии С и В представлены в табл. 3. Из данных табл.3следует, что уровень спонтанной люминолзависимой ХЛ цельной крови больных изучаемых нами групп не отличался от нормы и неизменялся в процессе лечения. Вместе с тем индуцированная ФМА люминолзависимая хемилюминесценция цельной крови больных гепатитом до лечения была ниже, чем в контрольной группе. Однако при хроническом вирусном гепа тите смешанной этиологии эти различия были более выражены и статистически достоверны (10,3 ± 1,1 и 18,6 ± 0,3 соответственно, р = 0,05). Проведенный курс терапии Беталейкином приводил к повышению индуцированной ФМА хемилюминесценции до уровня показателей здоровых индивидуумов. Динамика изменения уровня СОД как показатель состояния антиоксидантной защиты в крови больных хроническими гепатитами в процессе лечения Беталейкином отражена в табл. 4. Из этих данных следует, что до лечения Беталейкином у больных ХГС содержание СОД в цельной крови достоверно снижено (р < 0,05) по сравнению как с контрольной группой, так и с группой больных гепатитами смешанной этиологии.
Таблица 4 Динамика изменения содержания супероксиддисмутазы в эритроцитах больных хроническим гепатитом С и его сочетанием с хроническим гепатитом В в процессе лечения Беталейкином
Примечание. Уровень супероксиддисмутазы (СОД) в цельной крови выражен в ед/мл.
Таблица 5 Динамика изменения содержания малонового диальдегида в сыворотке больных хроническим гепатитом С и его сочетанием с гепатитом В в процессе лечения Беталейкином
Таблица 6 Уровень провоспалительных цитокинов: IL-.8,TNF? и антагониста рецептора интерлейкина в сыворотоках крови больных вирусными гепатитами в процессе лечения Беталейкином
Примечание. Концентрации цитокинов выражены в пкг/мл. Прочерк – исследование не проводилось. В скобках даны пределы колебаний показателя (например, “10–200”) или число больных, у которых получено приведенное значение (например, у 1 из 10”). АРИЛ – антагонист рецептора интерлейкина.
Динамика изменения уровня СОД как показатель состояния антиоксидантной защиты в крови больных хроническими гепатитами в процессе лечения Беталейкином отражена в табл. 4. Из этих данных следует, что до лечения Беталейкином у больных ХГС содержание СОД в цельной крови достоверно снижено (р < 0,05) по сравнению как с контрольной группой, так и с группой больных гепатитами смешанной этиологии. В процессе лечения Беталейкином нами отмечено, что у больных ХГС уже через несколько часов после введения препарата повышается содержание СОД в эритроцитах. При сочетании гепатитов С и В максимальный подъем СОД наблюдается только через сутки. К концу курса терапии Беталейкином отмечено достоверное повышение содержания СОД в крови больных ХГС(р < 0,05) донормальных показателей.
Результаты исследования перекисного окисления липидов клеточных мембран по содержанию в сыворотках крови больных малонового диальдегида представлены в табл.5.При проведении лечения Беталейкином достоверное увеличение содержания МДА в сыворотках наблюдается только у больных гепатитом смешанной этиологии. Для хронического течения моноформы гепатита С, по нашим данным, не характерно увеличение уровня МДА (см. табл. 5). Результаты изучения содержания провоспалительных цитокинов в сыворотках больных хроническими гепа
Таблица 7 Уровень продукции провоспалительных цитокинов: IL-.8 и TNF? клетками периферической крови больных вирусными гепатитами в процессе лечения Беталейкином
Примечание. Концентрации цитокинов выражены в пкг/мл. Прочерк – исследование не проводилось. «Спонт» — спонтанная продукция, «индуц.» — индуцированная продукция цитокина.
В скобках даны пределы колебаний показателя (например, «0–500») или число больных, у которых получено приведенное значение (например, «у 1 из 10»). данным, увеличение TNF? не характерно для хронического течения вирусных гепатитов. Содержание в сыворотках АРИЛ было повышено в обеих группах по сравнению с нормой. Причем у больных с сочетанной вирусной инфекцией эти показатели были несколько выше (различие статистически не достоверно). В процессе лечения Беталейкином нами не было отмечено повышения уровня исследуемых провоспалительных цитокинов в сыворотках крови обследуемых больных. Показано только увеличение уровня IL-8 через месяц после окончания курса лечения у больных, инфицированных двумя вирусами. К сожалению, в группе больных гепатитом С в эти сроки нам не удалось провести исследование. Анализ особенностей продукции IL-8 и TNF? клетками периферической крови при хроническом течении гепатитов представлен в табл. 7. До лечения у больных изучаемой нами группы продукция TNF? клетками крови не отличалась от таковой в норме. Отмечено некоторое увеличение индуцированной липополисахаридом продукции цитокина при сочетанной форме вирусного гепатита (394 ± 143 у больных гепатитом С и 1070 ± 241 у больных гепатитом В и С). В течение лечения Беталейкином было показано увеличение спонтанной, но не индуцированной липополисахаридом продукции этого цитокина. Наиболее выраженные изменения были выявлены нами при исследовании особенностей продукции IL-8. До лечения спонтанная продукция IL-8 была увеличена в обеих группах и была приблизительно на одном уровне (2970 ± 528 и 2770 ± 105 соответственно). В то же время индуцированная ЛПС продукция была достоверно выше у больных смешанной формой вирусного гепатита (р < 0,05). В процесселечения Беталейкином продукция индуцированного ЛПС IL-8 достоверно увеличивалась на первые сутки после введения препарата в обеих группах и держалась до 5х сут. По окончании курса (10й день) уровень идуцированного ЛПС IL-8 снижался до исходного. Изучение динамики изменений спонтанной продукции IL-8 показало, что к концу срока наблюдения (через 1 мес.) у больных микстформой вирусного гепатита уровень спонтанной продукции был достоверно выше. К сожалению, нам не удалось проследить уровень спонтанной продукции IL-8 на этих сроках у больных моноформой гепатита С. Содержание интерферонов ? и ? в сыворотках больных, получавших Беталейкин, представлено в табл. 8. Из данных таблицы следует, что уровень интерферона ? в сыворотках больных колебался от 397,2 до 662,5. Достоверных различий в зависимости от срока исследования не отмечено. Содержание интерферона ? незначительно снижалось на 1 е сут. после введения препарата и достоверно повышалось через месяц после проведенной терапии. Как известно, в патогенезе вирусных гепатитов В и С образование свободнорадикальных форм кислорода (СРФК) занимает одно из ведущих мест. Именно СРФК, генерируемые активированными нейтрофилами в тканях печени, приводят сначала к деструкции печеночных клеток вследствие процессов перекисного окисления липидов клеточных мембран, а в дальнейшем и к фиброзу печеночной ткани [6]. В данном исследовании мы изучали процессы образования СРФК клетками периферической крови, используя метод люминолзависимой хемилюминесценции. Следует отметить, что из двух параметров, измеряемых методом хемилюминесценции, вероятнее всего, уровень спонтанной ХЛ отражает процесс образования внеклеточных свободнорадикальных форм кислорода, в то время как тест с использованием индуктора кислородного взрыва, в нашем случае ФМА, является моделью фагоцитарной реакции, свидетельствующей об интенсивности кислородного взрыва, сопровождающего фагоцитоз. Из данных табл. 1 следует, что уровень спонтанной люминолзависимой ХЛ цельной крови больных изучаемых нами групп не отличался от нормы и не изменялся в процессе лечения. Повидимому, при хронизации патологического процесса при вирусных гепатитах образование свободнорадикальных форм кислорода ограничивается только печеночной тканью, в периферической крови эти процессы проходят на нормальном уровне. Вместе с тем индуцированная форболмириста тацетатом люминолзависимая хемилюминесценция цельной крови больных гепатитом до лечения была ниже, чем в контрольной группе. На основании этих данных можно заключить, что при хроническом течении вирусных гепатитов В и С фагоцитарная реакция угнетена, что подтверждается и данными литературы [10]. Лечение Беталейкином приводило к концу курса к нормализации показателей ФМАиндуцированной ХЛ цельной крови. Как следует из табл. 2, до лечения Беталейкином у больных гепатитом С содержание СОД в цельной крови достоверно снижено по сравнению как с контрольной группой, так и с группой больных гепатитами смешанной этиологии. В литера туре имеются крайне противоречивые данные об уровне СОД в цельной крови при хроническом течении гепатита С. Так, Ozenirler еt аl. [12] не нашли значимых различий в уровне эритроцитар ной СОД у больных хроническим гепатитом С по сравнению с нормой. Вместе с тем Раr еt аl. [13], анализируя состояние антиоксидантной системы у больных хроническим гепатитом С, показал, что содержание СОД в эритроцитах этих больных по вышено. Однако Сheng еt аl. [7] выявили, что при остром течении гепатита С содержание СОД в крови повышено, в то время как при хроническом, наоборот, понижено. Inagaki еt аl. [9], определяя содержание СОД в печеночных клетках больных гепатитом, отметили, что снижение концентрации СОД является показателем более тяжелого течения заболевания. Выявленное нами статистичес
Таблица 8 Уровень интерферонов ? и ? в сыворотках крови больных вирусными гепатитами в процессе лечения Беталейкином
Примечание. Концентрация интерферонов выражена в пкг/мл. Прочерк — исследование не проводилось. В скобках даны пределы колебаний показателя.
ки достоверное (р < 0,05) снижение содержания СОД в цельной крови только у больных хроническим гепатитом С, по нашему мнению, является свидетельством того, что гепатит С вызывает более выраженное поражение антиоксидантной за щиты и протекает более агрессивно, чем гепатит смешанной этиологии. Клиницисты, кстати, отмечают, что сочетание гепатита С и В чаще протекает более благоприятно в силу взаимного подавления вирусов, что, возможно, и объясняет удовлетворительное состояние антиоксидантного статуса этих больных. Кроме того, как известно, вирус гепатита С поражает не только печеночные клетки, но также и клетки костного мозга. Возможно, что выявленный нами дефект антиоксидантной защиты у больных ХВГС возникает вследствие поражения эритроидного ростка костного мозга. В процессе лечения Беталейкином нами отмечено, что у больных гепатитом С уже через несколько часов после введения препарата повышается содержание СОД в эритроцитах. При сочетании гепатитов С и В максимальный подъем СОД наблюдается только через сутки. К концу курса терапии Беталейкином отмечено достоверное повышение содержания СОД в крови больных гепатитом С (р < 0,05) до нормальных показателей. Следует отметить, что, по данным литературы, при лечении интерфероном ? восстановление показателей, характеризующих функциональную активность нейтрофилов и состояние антиоксидантной защиты, достигается в более поздние сроки, на 2–3 й мес. лечения [8]. В настоящее время хорошо известно, что дефект антиоксидантной защиты приводит к развитию перекисного окисления липидов клеточных мембран [14]. Оценка этих процессов осуществлялась нами по содержанию в сыворотках крови больных хроническими гепатитами одного из конечных продуктов пероксидации липидов мембран — МДА. Нами показано, что до проведения лечения достоверное увеличение содержания МДА в сыворотках наблюдается только у больных с гепатитом смешанной этиологии. Для хронического течения моноформы гепатита С, по нашим данным, не характерно увеличение уровня МДА. По мнению большинства исследователей [4, 14], уровень МДА в сыворотках крови больных гепатитом коррелирует с активностью процесса, наиболее высокие показатели отмечены при остром течении гепатита С. Кроме того, показано, что высокое содержание МДА соответствует повышению АлАТ при гепатите [4]. Нами также отмечено, что у всех больных с высокими уровнями МДА содержание АлАТ было повышено. По всей вероятности, повышение МДА свидетельствовало о том, что у больных гепатитом смешанной этиологии хроническое течение гепатита С может сопровождаться активным гепатитом В. В процессе лечения Беталейкином нами отмечено плавное снижение содержания МДА в сыворотках больных с полной нормализацией показателей к концу срока наблюдения. Исследование содержания интерферонов в сыворотках больных вирусными гепатитами показало, что при гепатите С уровень интерферона ? не отличался от такового в норме. Вместе с тем при сочетанной форме вирусного гепатита В и С нами выявлено повышение уровня определяемого ин терферона в периферической крови. Лечение Беталейкином не приводило к существенному уве личению интерферона ? больных моноформой, в то время как у больных микстформой отмечена тенденция к увеличению содержания интерферона в сыворотке. Однако эти различия не достоверны изза малого количества больных, составивших эту группу, и значительных колебаний показателей (см. табл. 8). Повидимому, моноформа гепатита С вызывает более стойкий дефект противовирусного иммунитета. Уровень интерферона ?, относящегося к цитокинам Th1 типа, у больных хроническими вирусными гепатитами был повышен в обеих обследованных группах. Однако примикстформе эти изменения более выражены, что может свидетельствовать о большей включенности клеточных реакций в формирование противовирусного иммунитета при сочетании двух видов инфекции, что, возможно, также объясняет их более мягкое клиническое течение. При изучении содержания провоспалительных цитокинов в сыворотках крови больных хроническими вирусными гепатитами было установлено, что уровень IL-8 повышен как при моно, так и при микстформах. Ранее аналогичные результаты были получены другими исследователями [11, 15]. Причем Masumoto et al. [11] показали, что у больных с хроническим активным вирусным гепатитом С уровень IL-8 в сыворотках выше, чем у больных персистирующей формой. Эти авторы напрямую связывают уровень сывороточного IL-8 с активностью воспалительного процесса в печеночной ткани. По нашим данным, увеличение TNF? не характерно для хронического течения вирусных гепатитов. Содержание в сыворотках АРИЛ было повышено в обеих группах по сравнению с нормой. Причем у больных с сочетанной вирусной инфекцией эти показатели были несколько выше (различия статистически не достоверны). Повидимому, увеличение содержания IL-8 и АРИЛ в сыворотках крови больных с хроническими формами вирусного гепатита С является свидетельством нарушений баланса между провоспалительными и противовоспалительными цитокинами. В процессе лечения Беталейкином нами не отмечено повышения уровня исследуемых провоспалительных цитокинов в сыворотках крови обследуемых больных. Показано только увеличение уровня IL-8 через месяц после окончания курса лечения у больных, инфицированных двумя вирусами. К сожалению, в группе больных гепатитом С в эти сроки нам не удалось провести исследование. Анализ особенностей продукции провоспалительных цитокинов клетками периферической крови при хроническом течении гепатитов показал, что до лечения у больных изучаемых групп спонтанная и индуцированная продукция TNF? клетками крови почти не отличалась от таковой в норме, в то время как выработка мононуклеарными клетками крови IL-8 была увеличена (см. табл. 7). Причем индуцированная ЛПС продукция IL-8 была достоверно выше у больных смешанной формой вирусного гепатита (р < 0,05). В процессе лечения Беталейкином продукция индуцированного ЛПС TNF? не изменялась, в то время как продукция IL-8 достоверно увеличивалась на первые сутки после введения препарата в обеих группах и была повышена до 5х сут. По окончании курса (10й день) синтез индуцированного ЛПС IL-8 снижался до исходного. Известно, что IL-8 является наиболее реактогенным из всех провоспалитель ных цитокинов. Повидимому, введение Беталейкина приводило к очень быстрой активации макрофагальных клеток и повышенной продукции ими IL-8. Таким образом, нами показано, что курс Бета лейкина, состоящий из 10 капельных инъекций через день, к концу срока наблюдения приводил к нормализации функциональной активности фагоцитирующих клеток периферической крови, повышению содержания СОД в эритроцитах, снижению уровня МДА в сыворотках крови, а также к активации клеток макрофагальной системы, сопровождающейся кратковременным повышением продукции IL-8. На этом фоне отмечено улучшение общего состояния обследуемых больных, выраженная положительная динамика основных биохимических показателей, а также подавление активной репликации вирусов гепатита С и В. Все эти данные позволяют включить Беталейкин в комплекс лечебных средств, используемых для лечения хронических вирусных гепатитов С и В.
ЛИТЕРАТУРА
1. Крель П.Е. Интрон А в лечении вирусных гепатитов // Вирусн. гепатиты. — 1998. — Т. 2. — С. 3–8.
2. Романова Е.С., Рахманова А.Г., Симбирцев А.С. и др. Результаты лечения больных гепатитами В и С рекомбинантным интерлейкином // Эпидемиол. и инфекцион. болезни. — 2000. — № 3. — С. 29–32.
3. Симбирцев А.С. Биология семейства интерлейкина1 человека // Иммунология. — 1998. — № 2. — С. 9–17.
4. Barbaro G., Di Lorenzo G., Asti A. et al. Hepatocellular mitochondrial alterations in patients with chronic hepatitis C: ultrastructural and biochemical findings // Am. J. Gastroenterol. — 1999. — Vol. 94. — P. 2198–2205.
5. Bellobuono A., Monadazzi L., Tempini S. et al. Early addition of ribavirin to interferon in chronic hepatitis C not responsive to interferon monotherapy // J. Hepatol. — 2000. — Vol. 33, № 3. — P. 463–468.
6. Casini A., Ceni E., Salzano R. et al. NeutrophIL-derived superoxide anion induces lipid peroxidation and stimulates collagen synthesis in human hepatic stellate cells: role of nitric oxide // Hepatology. — 1997. — Vol. 25. — P. 361–367.
7. Cheng J., Chen J.M. Plasma superoxide dismutase measurement in chIL-dren with viral hepatitis // Free Radic. Res. Commun. — 1991. — Vol. 12–13. — P. 669–673.
8. Emerit I., Serejo F., FIL-ipe P. et al. Clastogenic factors as biomarkers of oxidative stress in chronic hepatitis C // Digestion. — 2000. — Vol. 62. — P. 200–207.
9. Inagaki T., Katoh K., Takiya S. et al. Relationship between superoxide dismutase (SOD) and viral liver diseases // Gastroenterol. — 1992. — Vol. 27. — P. 382–389.
10. Lazzarin A., Galli M., Caredda F. et al. Polymorphonuclear leucocyte function during acute viral hepatitis // Boll. Ist. Sieroter. MIL-an. — 1994. — Vol. 63.— Р. 433–438.
11. Masumoto T., Ohkuda K., Yamamoto K. et al. Serum IL-8 levels and localization of IL-8 in liver from patients with chronic viral hepatitis // Hepatogastroenterol. — 1998. — Vol. 45. — P. 1630–1634.
12. Ozenirler S., Tuncer C., Ongun O. et al. Activities of superoxide dismutase in erythrocyte of nonalcoholic chronic liver diseases // Gen. Pharmacol. — 1994.— Vol. 25. — P. 1349–1351.
13. Par A., Roth E., Rumi G. et al. Oxidative stress and antioxidant defense in alcoholic liver disease and chronic hepatitis C // Orv. HetIL-. — 2000. — Vol. 23.— P. 1655–1659.
14. Romero F.J., BoschMorell F., Romero M.J. et al. Lipid peroxidation products and antioxidants in human disease // Environ. Health Perspect. — 1998. — Vol. 106 (Suppl. 5). — P. 1229–1234.
15. Shimoda K., Begum N.A., Shibuta K., Mori M. Interleukin8 and hIRH (SDF1alpha/PBSF) mRNA expression and histological activity index in patient with chronic hepatitis C // Hepatol. — 1998. — Vol. 28. — P. 108–115.
Oxidation indices and cytokine state in patients with chronic viral hepatitis C and B: influence of recombinant human interleukin 1 beta treatment V.G. Konusova1, E.S. Romanova2, I.V. ChurIL-ova1, N.V. Leonova1, Y.I. Drozdova1, A.S. Simbirtsev1, A.M. Ishtenko1, A.V. Jahov1, N.I. Kuznetsov2, V.I. Kabanova2 1Institute of Highly Pure Biopreparations, 2Medical Academy of Postgraduate Education, St. Peterburg, Russia
The results of recombinant interleukin 1 beta (Betaleukin) therapy in 10 chronic hepatitis B and C patients are presented. Basal and induced luminol.dependent chemIL-uminescence (CL), superoxide dis. mutase (SOD) level, malondialdehyde (MDA) blood level, and serum concentrations of interferon alpha (IFN.alpha) and interferon gamma (IFN.gamma), interleukin 8 (IL-.8), interleukin 1 receptor antago. nist (IL-.1Ra), tumor necrosis factor alpha (TNF.alpha) were studied. Spontaneous and induced IL-.8 and TNF.alpha production by blood cells was also assayed. Betaleukin was administered intravenously (7.8 ng/kg; 1 infusion per 2 days); the course consisted of 10 infusions. Elevation of induced CL and SOD levels was revealed after the treatment course, whIL-e MDA level was decreased. IL-.8 level demon. strated the most marked changes after the treatment course, whIL-e IFN.gamma level remained un. changed. Thus, clinical and biochemical changes revealed after Betaleukin treatment showed the posi. tive influence of Betaleukin therapy. Key words: hepatitis C and B, Betaleukin, chemIL-uminescence, superoxide dismutase, proinflammatory cytokines
