загрузка...
 
Фактор роста сосудистого эндотелия как регулятор ангиогенной активности макрофагов А.В. Крылов, Е.П. Киселева, В.И. Людыно, О.Е. Зубарева
Повернутись до змісту

Фактор роста сосудистого эндотелия как регулятор ангиогенной активности макрофагов А.В. Крылов, Е.П. Киселева, В.И. Людыно, О.Е. Зубарева

Научноисследовательский институт  экспериментальной медицины РАМН, С.Петербург

К настоящему моменту показано, что активность макрофагов играет ключевую роль в ангиогенезе. Известно, что мононуклеарные фагоциты способны секретировать целый спектр как про, так и антиангиогенных медиаторов, во многом определяя процесс неоваскуляризации. Механизмы регуляции ангиогенной активности макрофагов мало изучены, и практически отсутствуют данные о влиянии ангиогенных факторов, в частности фактора роста сосудистого эндотелия  (VEGF), на эти процессы. В норме этот медиатор в крови и биологических жидкостях не определяется, но конститутивная экспрессия мРНК VEGF детектируется во многих тканях организма. При активации ангиогенеза, например, при заживлении ран, основными продуцентами VEGF в организме могут являться сами макрофаги, а также тучные клетки, нейтрофилы и другие клеточные типы. Целью настоящего исследования послужило изучение влияния VEGF на функциональную активность перитонеальных макрофагов мыши (пиноцитоз, продукция нитроксидных и супероксидных анионов, активность фермента 5’нуклеотидазы) и экспрессию ими мРНК VEGF, как проангиогенного фактора, и мРНК тромбоспондина-1  (TSP-1), обладающего антиангиогенной активностью. Перитониальные макрофаги получали промыванием брюшной полости животных средой RPMI 1640, содержащей 10 % фетальную сыворотку. Инкубацию клеток с исследуемым медиатором проводили в течение 4 и 24 ч при 37 °С. Продукцию нитроксид анионов определяли по содержанию NO2 в супернатантах макрофагов с помощью реактива Грисса; продукцию супероксид анионов — в НСТ-тесте; пиноцитоз — по поглощению красителя нейтрального красного; активность 5’нуклеотидазы — биохимическим методом — по образованию неорганического фосфата. Уровень экспрессии мРНК VEGF и TSP-1 оценивали методом ОТПЦР со специфическими праймерами. Полученные результаты выявили следующие эффекты: в концентрациях 50 и 100 нг/мл VEGF не оказывал влияния на показатели пиноцитоза в исследуемых клетках, но в тех же концентрациях стимулировал продукцию клетками нитроксид аниона. В концентрации 100 нг/мл VEGF снижал активность 5’нуклеотидазы и подавлял индуцированный форболовым эфиром синтез супероксид аниона, при этом не оказывая влияния на его спонтанную продукцию.

Результаты изучения экспрессии мРНК в макрофагах показали, что VEGF дозозависимо усиливает экспрессию мРНК VEGF и TSP-1 на сроке 24 ч. Полученные данные указывают на способность VEGF усиливать как ангиогенную (стимуляция продукции нитроксид анионов, экспрессия мРНК VEGF), так и антиангиогенную (подавление продукции супероксид аноинов и стимуляция экспрессии мРНК TSP-1) функции макрофагов.

Впервые показано, что VEGF может регулировать экспрессию собственной мРНК и создавать дополнительную петлю усиления продукции ангиогенной молекулы. Одновременная стимуляция как ангиогенной, так и антиангиогенной активности, повидимому, свидетельствует о деференцированной роли макрофагов на разных этапах ранозаживления. Работа поддержана грантами РФФИ № 0004-49430 и 01-0406564.



загрузка...