Фактор роста сосудистого эндотелия как регулятор ангиогенной активности макрофагов А.В. Крылов, Е.П. Киселева, В.И. Людыно, О.Е. Зубарева
Научноисследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, С.Петербург
К настоящему моменту показано, что активность макрофагов играет ключевую роль в ангиогенезе. Известно, что мононуклеарные фагоциты способны секретировать целый спектр как про, так и антиангиогенных медиаторов, во многом определяя процесс неоваскуляризации. Механизмы регуляции ангиогенной активности макрофагов мало изучены, и практически отсутствуют данные о влиянии ангиогенных факторов, в частности фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF), на эти процессы. В норме этот медиатор в крови и биологических жидкостях не определяется, но конститутивная экспрессия мРНК VEGF детектируется во многих тканях организма. При активации ангиогенеза, например, при заживлении ран, основными продуцентами VEGF в организме могут являться сами макрофаги, а также тучные клетки, нейтрофилы и другие клеточные типы. Целью настоящего исследования послужило изучение влияния VEGF на функциональную активность перитонеальных макрофагов мыши (пиноцитоз, продукция нитроксидных и супероксидных анионов, активность фермента 5’нуклеотидазы) и экспрессию ими мРНК VEGF, как проангиогенного фактора, и мРНК тромбоспондина-1 (TSP-1), обладающего антиангиогенной активностью. Перитониальные макрофаги получали промыванием брюшной полости животных средой RPMI 1640, содержащей 10 % фетальную сыворотку. Инкубацию клеток с исследуемым медиатором проводили в течение 4 и 24 ч при 37 °С. Продукцию нитроксид анионов определяли по содержанию NO2 в супернатантах макрофагов с помощью реактива Грисса; продукцию супероксид анионов — в НСТ-тесте; пиноцитоз — по поглощению красителя нейтрального красного; активность 5’нуклеотидазы — биохимическим методом — по образованию неорганического фосфата. Уровень экспрессии мРНК VEGF и TSP-1 оценивали методом ОТПЦР со специфическими праймерами. Полученные результаты выявили следующие эффекты: в концентрациях 50 и 100 нг/мл VEGF не оказывал влияния на показатели пиноцитоза в исследуемых клетках, но в тех же концентрациях стимулировал продукцию клетками нитроксид аниона. В концентрации 100 нг/мл VEGF снижал активность 5’нуклеотидазы и подавлял индуцированный форболовым эфиром синтез супероксид аниона, при этом не оказывая влияния на его спонтанную продукцию.
Результаты изучения экспрессии мРНК в макрофагах показали, что VEGF дозозависимо усиливает экспрессию мРНК VEGF и TSP-1 на сроке 24 ч. Полученные данные указывают на способность VEGF усиливать как ангиогенную (стимуляция продукции нитроксид анионов, экспрессия мРНК VEGF), так и антиангиогенную (подавление продукции супероксид аноинов и стимуляция экспрессии мРНК TSP-1) функции макрофагов.
Впервые показано, что VEGF может регулировать экспрессию собственной мРНК и создавать дополнительную петлю усиления продукции ангиогенной молекулы. Одновременная стимуляция как ангиогенной, так и антиангиогенной активности, повидимому, свидетельствует о деференцированной роли макрофагов на разных этапах ранозаживления. Работа поддержана грантами РФФИ № 0004-49430 и 01-0406564.