загрузка...
 
Роль GM CSF, продуцируемого эпителиальными клетками тонкого кишечника, в регуляции гемо и энтеропоэза В.В. Темчура, С.В. Сенников, В.А. Труфакин, В.А. Козлов
Повернутись до змісту

Роль GM CSF, продуцируемого эпителиальными клетками тонкого кишечника, в регуляции гемо и энтеропоэза В.В. Темчура, С.В. Сенников, В.А. Труфакин, В.А. Козлов

ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск; ГУ НИИ физиологии СО РАМН, Новосибирск

Филогенетически кишечник является первым локализованным органом гемопоэза. При этом наблюдается не только структурное сходство гемопоэза и энтеропоэза, но и общность гуморальных механизмов регуляции функциональной активности стволовых клеток данных систем.

Методом электрохемилюминесценции нами было показано, что интестинальные эпителиальные клетки  (ИЭК) мыши продуцируют GMCSF. При разделении кондиционной среды  (КС) от ИЭК на фракции  (Фр) с различным молекулярным весом наличие GMCSF было обнаружено во Фр1 (> 30 кДа) и Фр2 (10–30 кДа), что связано с различной степенью гликозилированности белка. Изучение влияния GMCSF на процессы энтеропоэза проводили на модели оценки включения  3Нтимидина клетками крипт in vitro. Было показано, что в зависимости от концентрации GMCSF оказывало оппозитное влияние на пролиферативную активность клеток крипт, т.е. высокое содержание (около 5 нг/мл) GMCSF в культуральной среде после добавления КС и Фр1 приводило к подавлению пролиферативного ответа, в то время как низкий уровень  (около 1 нг/мл), обусловленный доавлением Фр2, вызывало стимуляцию. Предварительная инкубация КС и ее фракций с блокирующими антителами (АТ) к GMCSF полностью отменяла эти эффекты. Данные результаты были воспроизведены в экспериментах с использованием рекомбинантного мышиного GMCSF. Ранее нами было показано присутствие в кишечном эпителии клетокпредшественников  гемопоэза, образующих селезеночные колони на 8е сут. (КОЕс8). В связи с этим изучали действие КС и ее фракций на функциональную активность КОЕс8 с использованием методов экзогенного селезеночного колониеобразования и клеточного самоубийства. Было показано, что культивация клеток костного мозга мышейдоноров в среде, содержащей КС, Фр1 или Фр2, приводила к достоверному увеличению пролиферативной и колониеобразующей активности КОЕс8 по сравнению с соответствующими показателями в контрольной группе. Для фактического определения роли GMCSF, продуцируемого ИЭК, инкубировали Фр1 и Фр2 с биотинилированными поликлональными АТ, с последующим удалением конъюгатов стрептавидиновыми бусами. Данная процедура отменяла стимулирующие эффекты GMCSF содержащих фракций. Также нами было оценено влияние КС на морфологические параметры гемопоэтических колоний в полувязкой метилцеллюлозной среде. Предварительная инкубация клеток костного мозга в присутствии КС приводила к достоверному увеличению колониеобразования на 10е сут. и вызывала достоверные изменения процентного соотношения числа эритроидных и гранулоцитарномакрофагальных колониеобразующих единиц. Таким образом, полученные нами данные  говорят об участии GMCSF, продуцируемого ИЭК, как в процессах аутокринной регуляции пролиферативной активности клеток регенеративной зоны крипт, так и в паракринном модулирующем влиянии на клеткипредшественники гемопоэза.



загрузка...