ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор», пос. Кольцово, Новосибирская область Фактор некроза опухолей (TNF) является многофункциональным цитокином, важнейшим регулятором развития воспалительных и иммунных реакций в ответ на вирусную инфекцию. При различных заболеваниях человека гиперпродукция TNF играет патологическую роль. К таким заболеваниям относятся ревматоидный артрит, менингит, септический шок, кахексия. Успех при лечении этих заболеваний будет зависеть от того, насколько быстро и эффективно удастся снизить уровень TNF в организме больного. Анализ нуклеотидных последовательностей геномов ортопоксвирусов выявил открытые рамки трансляции, кодирующие белки, имеющие высокую степень гомологии с внеклеточным сегментом рецептора TNF II типа. Гены аналогов рецепторов фактора некроза опухолей (TNFR) G2R вируса натуральной оспы (штамм India1967), J2R вируса оспы обезьян (штамм Zaire1996) и H4R вируса оспы коров (штамм GRI1990) были изолированы методом ПЦР из вирусных геномов и экспрессированы в составе бакуловирусной ДНК в клетках насекомых Sf21. Оптимизацию уровня экспрессии целевых продуктов проводили путем варьирования множественности заражения клеток Sf21 рекомбинантными бакуловирусами и продолжительности инфекции. Разработана схема очистки аналогов TNFR из лизатов клеток насекомых, включающая разрушение клеток несколькими циклами замораживания — оттаивания, осаждения целевого продукта сульфатом аммония и аффинную хроматографию на колонке с иммобилизованным TNF? человека. Свойства полученных рекомбинантных белков исследовали in vitro методами SDSэлектрофореза, Вестернблот анализа и твердофазного иммуноферментного анализа. Биологическую активность препаратов вирусных аналогов TNFR изучали по их способности нейтрализовать цитотоксические эффекты TNF? человека, мыши и кролика в культуре мышиных клеток L929. Обсуждается перспектива разработки терапевтических средств нового поколения для антиTNFтерапии на основе TNFRподобных белков ортопоксвирусов.