Проблемы иммуноаффинной очистки альфа фетопротина и методы негативной иммуносорбции как способ их решения М.Б. Раев, А.В. Зайцева, Л.Р. Хоршева, Д.А. Суховая , Е.Г. Орлова , М.С. Красных , О. Л. Горбунова , С.Ю. Родионов Институт иммунологии и физиологии УрО РАН; ЗАО Институт новых медицинских технологий, г. Краснокамск; 3 Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, г. Пермь
Проблемы иммуноаффинной очистки альфа фетопротина и методы негативной иммуносорбции как способ их решения М.Б. Раев, А.В. Зайцева, Л.Р. Хоршева, Д.А. Суховая , Е.Г. Орлова , М.С. Красных , О. Л. Горбунова , С.Ю. Родионов Институт иммунологии и физиологии УрО РАН; ЗАО Институт новых медицинских технологий, г. Краснокамск; 3 Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, г. Пермь
Получение альфа фетопротеина (АФП) в настоящее время является перспективным направлением в биотехнологии, поскольку препарат используется как инъекционное лекарственное средство при аллергических, аутоиммунных и некоторых видах опухолевых патологий. АФП выделяют из пуповинной, плацентарной и абортной крови человека с помощью аффинной хроматографии на сорбенте сефарозе CL4B с ковалентно пришитыми козьими антителами против АФП человека. Несмотря на селективность иммунных сорбентов, в результате аффинной хроматографии выделенный АФП существенно контаминирован белками, которые в ходе специального исследования были идентифицированы как иммуноглобулины G человека. Для очистки препаратов от примесей подобного рода, учитывая что молекулярная масса АФП — 69 кДа, а IgG человека — 146 кДа, логично использование гельфильтрации на сефадексе G100 и/или Sephacryl S200 или ионообменную хроматографию на DEAE сефарозе. Электрофоретическое исследование препаратов, полученных в результате гельфильтрации и ионообменной хроматографии, наглядно продемонстрировало неспособность этих методов решить проблемы очистки АФП и полностью удалить из препарата иммуноглобулины. Задача доочистки препарата была решена при помощи негативной хроматографии, в которой в качестве иммуносор! бента использовали сефарозу CL4B, модифицированную кроличьими антителами к IgG человека. Высокая сорбционная емкость (до 5 мг/мл геля), а также низкий уровень неспецифической сорбции такого сорбента позволили решить проблему контаминации получаемого препарата АФП без потерь очищаемого белка.