загрузка...
 
Иммунологические последствия индукции антител к IFNy и IL-4 у мышей С.В. Шевелев, А.Н. Митин, М.Ф. Никонова, А.А. Бабахин, А.А. Ярилин Институт иммунологии ФМБА РФ, г. Москва
Повернутись до змісту

Иммунологические последствия индукции антител к IFNy и IL-4 у мышей С.В. Шевелев, А.Н. Митин, М.Ф. Никонова, А.А. Бабахин, А.А. Ярилин Институт иммунологии ФМБА РФ, г. Москва

Оценивали различные формы иммунного ответа у мышей, в сыворотке которых присутствуют антитела к ключевым цитокинам Th1- и ТИ2-клеток (IFNy и IL-4), индуцированные иммунизацией пептидными фрагментами этих цитокинов. Обнаружено усиление спонтанной и митоген-индуцированной пролиферации лимфоцитов селезенки мышей, иммунизированных против IFNy. Способность CD4+Т-клеток иммунизированных мышей дифференцироваться в Th1- и ^2-клетки in vitro не изменяется, но при введении в культуры спленоцитов аутологичных сывороток, содержащих антитела к IFNy или IL-4, подавляется дифференцировка Т-хелперов, продуцирующих соответствующие цитокины. Накопление антител к IFNy приводит к подавлению как клеточного, так и гуморального иммунного ответа на эритроциты барана, но не влияет на образование реагинов при иммунизации овальбумином. Накопление антител к IL-4 подавляет гуморальный, но не клеточный ответ на эритроциты барана. Ингибирующее действие антител к IL-4 на аллергический ответ выявляется при раздельном анализе уровня реагинов у мышей с высоким и низким содержании антител к IL-4. (Цитокины и воспаление. 2008. Т.7, № 3, с. 3-8)

Ключевые слова: цитокины, интерферон у, интерлейкин-4, антитела, иммунный ответ, дифференцировка.

Общеизвестно, что поляризация №1/№2-ба- ланса в сторону одного из типов хелперных Т-кле- ток благоприятствует формированию иммунопа­тологии: преобладание №1-клеток способствует развитию клеточных аутоиммунных процессов, ^2-клеток — аллергии [17]. На этом основаны методы антицитокиновой иммунотерапии, состоя­щие в избирательном подавлении того или другого Т-хелперного звена [7, 8]. Чаще всего с этой целью используют введение гуманизированных монокло- нальных антител к ключевым цитокинам №1- и №2-клеток или к цитокинам, ответственным за их дифференцировку [11, 18]. Хотя клиническая эф­фективность такого подхода пока незначительна [4, 5, 14], поиски в данном направлении продолжаются. В качестве альтернативы введению готовых экзо­генных антител может быть предложен подход, основанный на индукции эндогенных антител.

Существует и другой аспект изучения эффектов эндогенных антител к цитокинам. Описаны случаи спонтанного и вызванного цитокинотерапией обра­зования аутоантител к цитокинам у людей [16, 19].

Биологическое действие таких антител практически не изучено. Создание экспериментальной модели животных — носителей эндогенных антител к ци­токинам — позволило бы прояснить вопрос о биоло­гической активности индуцированных и спонтанно возникающих антител к цитокинам и их влиянии на функционирование иммунной системы.

В данной статье представлен материал по оценке различных проявлений иммунного ответа у мышей, в сыворотке которых присутствуют антитела к IFNy или IL-4, индуцированные иммунизацией пептидными фрагментами этих цитокинов.

Материалы и методы

Работа выполнена на мышах линии BALB/c и гибридах (CBAxC57BL/6)F1 массой 20-22 г, а также крысах Wistar, полу­ченных из питомника РАМН «Столбовая» и содержавшихся на обычном пищевом рационе.

Методы расчета иммунодоминантных эпитопов и синтеза соответствующих пептидов описаны ранее [1, 11, 12].

Мышей иммунизировали конLюгатами фрагмента 99-113 из IFNy и 21-40 из IL-4 внутримышечно 3 раза с интервалом в 1 месяц; первую иммунизацию осуществляли в полном, две последующие — в неполном адLюванте Фрейнда. Контрольным мышам в соответствующие сроки вводили физиологический раствор (контроль-1) или адLювант (контроль-2). Антитела к пептидным фрагментам, а также целым молекулам цитокинов определяли иммуноферментным методом с оценкой оптической плотности (ОП) при разведении сывороток 1:100 и титра антител (последнее разведение, при котором ОП превышала 0,25).

Пролиферацию клеток оценивали по разведению флю­оресцентной метки CFSE [5(6)-carboxyfLuoresceindiacetate N-succinimidyL ester]. Для мечения флюорохромом мононуклеары инкубировали с 5 мкМ CFSE («FLuka») 10 мин при З7° и 5 k СО2, трижды отмывали охлажденной (4 °С) средой RPMI 1640, содер­жащей 10 k сыворотки эмбрионов телят (СЭТ, «Sigma», USA), и доводили до нужной концентрации [15]. Мононуклеары, мечен­ные CFSE, культивировали в концентрации 2х106/мл в 96-луноч- ных плоскодонных планшетах («Nunc», Дания) в присутствии конканавалина А (КонА, 5 мкг/мл) или без митогена в течение З суток при З7°С и 5 k СО2. С помощью проточной цитометрии на лазерном цитофлюориметре FACSCaLibur («Becton Dickinson», USA) определяли процент клеток, прошедших, по меньшей мере, одно деление (т. е. содержащие, как минимум, в 2 раза меньше флуорохрома, чем исходно меченые клетки).

Для оценки продукции цитокинов [1З] клетки селезенки мышей (после лизиса эритроцитов и отмывания клеток) сти­мулировали in vitro форбол-12-миристат-1З-ацетатом (ФМА) («Sigma», USA, 10 нг/мл) и иономицином («Sigma», 2 мкМ) в при­сутствии ингибитора секреторного процесса брефелдина («Becton Dickinson», USA, 1 мкг/мл) и культивировали в концентрации 1 х 105 клеток на лунку в течение 1B ч при З7 °С и 5 k CO2 в RPMI 1640 c добавлением 10 k СЭТ и 2 мМ L-глютамина («Sigma»). Пос­ле завершения культивирования клетки отмывали, фиксировали 4°/о-ным параформальдегидом («Sigma») и пермеабилизировали в течение 20 минут при комнатной температуре в 0,1k растворе сапонина («Sigma») на забуференном физиологическом раство­ре, рН 7,2. Клетки окрашивали в течение 20 минут с помощью моноклональных антител к IFNy или IL-4, меченых флюоресце- инизотиоцианатом (ФИТЦ) и моноклональных антител к CD3, меченых фикоэритрином (ФЭ) («CaLtag»). Отмытые клетки ана­лизировали на проточном цитофлуориметре FACSCaLibur.

Для индукции гуморального иммунного ответа мышей им­мунизировали внутрибрюшинно эритроцитами барана (10B). На 5-е сутки после иммунизации в селезенке мышей методом бляшкообразования определяли число клеток, секретирующих антитела [6]. Рассчитывали число антителообразующих клеток (АОК) на селезенку и на 1 млн кариоцитов.

Клеточный иммунный ответ оценивали по выраженности гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана. Для ее индукции мышей иммунизировали эритроцитами барана внутрибрюшинно в дозе 5x10B. Через 6 суток им в стопу вводили эритроциты (10B в обLеме З0 мкл); в контрлатеральную стопу вводили физиологический раствор в том же обLеме. Через 24 ч измеряли толщину обеих стоп с помощью штангенциркуля. Рассчитывали индекс ГЗТ — (О-К)/К, где О — толщина опытной, К — контрольной лапки.

Аллергический ответ мышей индуцировали иммунизацией куриным овальбумином («Sigma») в алюминиевых квасцах (50 мкг белка в 2,5 мг квасцов на мышь) [9]. Иммунизацию осуществляли 3 раза с интервалом 2 недели. Через 14 суток после последней инLекции у мышей брали кровь и определяли титр реагинов в реакции пассивной кожной анафилаксии (РПКА). Для этого 30 мкл сыворотки крови в серийных разведениях вводили внутрикожно в кожу живота крыс. В качестве контроля вводили сыворотку неиммунизированных мышей. Через 24 ч крысам вво­дили внутривенно 250 мкг овальбумина в 0,5 % растворе синьки Эванса. Через 30 минут крыс забивали под эфирным наркозом и регистрировали наличие пятна, окрашенного синькой, на внутренней поверхности кожи (в контроле окрашенное пятно не формируется). Титр РПКА оценивали как логарифм последнего разведения сыворотки, вызвавшего развитие реакции.

Статистическую обработку результатов проводили методами вариационной статистики (с применением программы Microsoft Excel) с использованием критерия t Стьюдента. Кроме того, осу­ществляли корреляционный и регрессионный анализ.

Результаты и обсуждение

Иммунизация мышей линии BALB/c пептидным фрагментом 99-113 из IFNy привела к образованию антител, реагирующих с пептидом (с ОП > 0,25) при разведении сыворотки 1:100), у всех животных, причем у 10 из 12 мышей антитела взаимодей­ствовали с целой молекулой IFNy. Иммунизация пептидом 21-40 из IL-4 также вызвала образование антител у всех мышей, но с меньшим уровнем свя­зывающей способности (по данным ИФА), однако с целой молекулой IL-4 реагировали сыворотки лишь половины иммунизированных животных. Подробнее эти данные отражены в сопутствующей статье [2].

Через 2 недели после окончания курса имму­низации мышей и в опытных группах (введение пептидов), и в контроле-2 с введением адъювантов без пептида регистрировали спленомегалию. При культивировании спленоцитов мышей контроля-2 обнаружено 4,4-кратное усиление спонтанной пролиферации клеток по сравнению с мышами, которым вводили физиологический раствор (контроль-1). У мышей, иммунизированных пептидом из IL-4, спонтанная пролиферация спленоцитов выражена в такой же степени, а у мышей, им­мунизированных пептидом из IFNy, она усилена дополнительно в 2 раза (в 8,2 раза по сравнению с контролем-1). При культивировании клеток се­лезенки с  КонА индекс стимуляции составлял в контроле-1 — 7,6, в контроле-2 — 1,3, при имму­низации против IFNy-1,4, при иммунизации против IL-4 — 2,0. Абсолютные величины пролиферации клеток под влиянием КонА в опытах с иммуниза­цией против IFNy и IL-4 были соответственно в 11,4 и 9,7 раза выше, чем в контроле-1, и в 1,4 и 2,0 раза выше, чем в контроле-2 (рис. 1). Таким образом, введение полного, а затем неполного адъюванта Фрейнда вызывает резкое усиление пролиферации лимфоцитов селезенки с утратой способности дополнительно реагировать на митоген. На этом фоне эффект индукции антител к цитокинам состоит в частичном восстановлении ответа на митоген, а эффект иммунизации против IFNy, кроме того, — в еще большем усилении спонтанной пролифера­ции (т. е. антитела к IFNy усиливают абсолютные уровни как спонтанной, так и индуцированной пролиферации спленоцитов).

В период, когда вес селезенок в основном нор­мализовался (через месяц после иммунизации), у мышей групп опыта и контроля-2 извлекали селезенку и цитофлюориметрически оценивали способность Т-клеток продуцировать IFNy и IL-4 в ответ на стимуляцию ФМА и иономицином. Процент Т-клеток, продуцирующих IFNy и IL-4, а также их соотношение были одинаковым у опыт­ных и контрольных мышей. Поскольку в целом организме Т-клетки испытывают воздействие антител к цитокинам, процент цитокин-продуци- рующих клеток определялся также в присутствии сыворотки. Введение аутологичных сывороток в культуры спленоцитов иммунизированных мышей приводило к снижению процента клеток, обра­зующих соответствующий цитокин: сыворотки, содержащие антитела к IFNy, снижали процент IFNy-продуцентов, а сыворотки, содержащие ан­титела к IL-4, — процент IL-4-продуцентов (рис. 2). Процент клеток, вырабатывающих оппозитный цитокин, при этом не изменялся (данные не пред­ставлены). Введение аутологичных сывороток в культуры спленоцитов контрольных мышей не влияло на процент Т-клеток, образующих оба ци- токина. Таким образом, эффективная иммунизация пептидными фрагментами цитокинов, сама по себе, не влияет на способность Т-клеток вырабатывать цитокины, но образующиеся при этом антитела подавляют образование соответствующего (но не альтернативного) цитокина.

Оценивали влияние преиммунизации против цитокинов на гуморальный и клеточный иммун­ный ответ мышей линии BALB/c на один и тот же модельный антиген — эритроциты барана. Результаты отражены на рис. 3. Иммунизация против IFNy снижала выраженность ГЗТ по срав­нению с «адLювантным» контролем (в котором, в свою очередь, ответ были ниже, чем у интактных мышей), тогда как при иммунизации против IL-4 уровень клеточного ответа не изменялся. При оценке гуморального ответа в реакции бляшкооб- разования его снижение по сравнению с контролем зарегистрировано в обеих опытных группах. При оценке эффекта преиммунизации против IL-4 зна­чимое подавление гуморального иммунного ответа (в 2 раза) наблюдалось лишь у тех мышей, у кото­рых иммунизация вызывала образование антител, реагирующих с целой молекулой IL-4. У мышей с неэффективной иммунизацией показатели не отличались от таковых в контроле.

 

Рис. 1. Спонтанная и индуцированная КонА пролиферация клеток селезенки мышей, которым вводили физиологический раствор, адLю­вант, пептидные фрагменты IFNy и IL-4 в адъюванте

1 — спонтанная пролиферация; 2 — пролиферация при действии КонА. Усредненные данные трех экспериментов.

 

Рис. 2. Влияние аутологичных сывороток на способность спленоци­тов мышей, иммунизированных против IFNy и IL-4, продуцировать in vitro эти цитокины

Представлены проценты Т-клеток, продуцирующих IFNy и IL-4, в суспензии акти­вированных спленоцитов. Усредненные данные трех экспериментов.

 

Рис. 3. Влияние преиммунизации пептидными фрагментами цитокинов на способность мышей линии BALB/c к иммунному ответу на эритроциты барана

АОК — число антителообразующих клеток в пересчете на селезенку, х10-3; ГЗТ — ги­перчувствительность замедленного типа (толщина лапки, мм); звездочкой помечены данные, значимо (p < 0,05) отличающиеся от контроля. В группах от б до 12 мышей.

 

Рис. 4. Обратная корреляция содержания антител к пептиду из К-4 в сыворотке мышей и их способности вырабатывать реагины при иммунизации овальбумином

По оси абсцисс — оптическая плотность по данным иммуноферментного анализа (разведение сывороток 1:100, в качестве антигена использован пептид 21-40); по оси ординат — титр реагинов в РПКА. Вертикальная штриховая линия разделяет области высокого и низкого ответа на пептид из И-4 (ОП > 1 и < 1,0). Кружками обозначены значения, соответствующие высокому (подгруппа 1), крестика­ми — низкому (подгруппа 2) ответу на пептид из И-4.

Крестик, обведенный кружком — данные для единственной мыши с низким ответом на пептид из ИЛ-4, которые соответствуют первой «корреляционной группе» и поэтому отнесены к подгруппе 1.

Цифры на графике означают номера подгрупп. Линии регрессии описыва­ются уравнениями — для подгруппы 1: у = 9,44 — 2,69 х, для подгруппы 2: у = 5,52 — 2,95 х.

иммунизация против обоих цитокинов ослабляла гуморальный иммунный ответ на эритроциты бара­на при условии индукции антител, реагирующих с целой молекулой цитокина; клеточный иммунный ответ на этот антиген подавляла только иммуни­зация против IFNy.

После второго курса иммунизации пептидом 21-40 мышей сенсибилизировали куриным оваль­бумином. Титры реагинов (по данным РПКА) в группе мышей, иммунизированных против IFNy, были несколько ниже, чем в группе контроля, но различия не были статистически значимы; они не коррелировали с активностью антител к IFNy. При сравнении уровней реагинов между группой мышей, иммунизированных пептидом 21-40 из IL-4, и контрольными мышами различий также не было выявлено. Более информативным ока­зался корреляционный анализ (рис. 4), которому были раздельно подвергнуты данные, полученные на мышах с высоким (ОП > 1,0) и более низким (ОП < 1,0) уровнями ответа на пептид из IL-4 (соответственно, подгруппы 1 и 2). В подгруппе 1 выявлена высокозначимая отрицательная корре­ляция между ОП для антител к пептиду из 1L-4 и логарифмом титра реагинов, специфичных к овальбумину: г = - 0,97 (р < 0,001); для подгруппы 2 отрицательная корреляция находилась на границе достоверности: г = - 0,54 (р = 0,05). Линии регрес­сии, описывающие взаимосвязи исследованных показателей в подгруппах 1 и 2, характеризуются сходным наклоном (коэффициенты «Ь» составили соответственно - 2,69 и - 2,95), но резко различа­ются положением на оси абсцисс: (коэффициенты «а» равны 9,44 и 5,52). Величины «а» соответствуют уровню реагинового ответа в отсутствие антител к 1L-4, а коэффициент «Ь» (наклон линии регрессии) служит мерой влияния, которое оказывают анти­тела к 1L-4 на уровень реагинового ответа. Таким образом, накопление антител к 1L-4 ингибирует образование реагинов в ответ на иммунизацию овальбумином, однако этот эффект выявляется лишь при раздельном анализе данных, полученных на мышах с различным уровнем антител к 1L-4. Параллельная оценка IgG-антител к овальбумину не выявила каких-либо связей между активностью и уровнем антицитокиновых антител.

Итак, индукция антител, способных связывать целую молекулу цитокина, оказывает разнооб­разное действие на функциональную активность иммунной системы. Эффекты индуцированных антител могут реализоваться, прежде всего, пу­тем связывания секретируемых цитокинов — при условии проникновения антител в ткани, прежде всего, в тимус-зависимые зоны вторичных лим- фоидных органов. Изучение биораспределения моноклональных антител, используемых в им­мунотерапии, свидетельствует о том, что, хотя ограничения в проникновении антител в лимфо- идные органы существуют, тем не менее, антитела способны проникать в ткани, в частности, в очаги воспаления [3, 10].

Нельзя исключить также влияние индуцирован­ных антител на рецепторы Т-клеток-продуцентов цитокинов, о чем свидетельствует их влияние на выработку цитокинов Т-клетками in vitro. При­сутствие антител к цитокинам в организме не вызывает стойких изменений дифференциров- ки Т-хелперов: перенесенные в культуру CD4 + Т-клетки дифференцировались в продуценты IFNy и IL-4 в той же пропорции, как клетки контроль­ных животных. Однако непосредственный контакт с антителами, внесенными в культуру в составе аутологичной сыворотки, подавляет синтез соот­ветствующих цитокинов. Очевидно, аналогичный процесс реализуется во вторичных лимфоидных органах, в которые попадают антицитокиновые антитела.

Следствие изменений дифференцировки Т-хел- перов in vivo и/или связывания продуцируемых ими цитокинов — наблюдавшиеся изменения интенсивности различных форм иммунного от­вета. Накопление антител к IFNy подавляет ГЗТ, тогда как накопление антител к IL-4 не влияет на эту форму клеточного иммунного ответа. Этот ре­зультат является вполне ожидаемым, поскольку известно участие в его осуществлении TM-клеток и IFNy. Ожидаемым является и усиление спон­танной и КонА-индуцированной пролиферации спленоцитов, полученных от мышей, иммунизи­рованных против IFNy, поскольку IFNy обладает антипролиферативным действием.

Накопление антител к обоим изучавшимся цитокинам подавляло гуморальный иммунный ответ, оценивавшийся в прямом тесте бляшкообразования. Контроль гуморального ответа со стороны Т-хелперов проявляется преимущественно в реа­лизации ростового и дифференцировочного эффек­тов по отношению к В-лимфоцитам, а также в обес­печении переключения изотипов антител. Эффект антител к IL-4 в данной ситуации понятен хотя бы потому, что IL-4 является основным фактором роста В-клеток и ответственен за переключение

синтеза антител на главный изотип — IgG1. Труд­нее истолковать аналогичное действие антител к IFNy По-видимому, TM-клетки могут участвовать в индукции антителообразования путем контакт­ного взаимодействия с В-лимфоцитами (известно, что IFNy у мышей ответственен за переключение синтеза антител на изотип IgG2a).

Присутствие в организме антител к IFNy не препятствовало развитию аллергического ответа на овальбумин и не усиливало его. У мышей с ан­тителами к IL-4 были зарегистрированы опреде­ленные изменения, которые трактованы нами как проявление ингибирующего действия на образо­вание реагинов. Влияние антител регистрировали только при раздельной оценке эффекта у мышей с высокими и низкими титрами анти-4-анти- тел и сильнее проявлялось при высоком титре анти-4-антител; оно не распространялось на IgG-антитела к овальбумину. Результаты анализа заставляют предположить, что две выделенные нами подгруппы животных существенно разли­чаются по способности к ответу как на пептид из IL-4, так и на овальбумин.

Возвращаясь к предпосылкам данного исследо­вания, сформулированным во вступлении, можно сделать ряд заключений. Из данных, представлен­ных в работе, следует, что антицитокиновые анти­тела, появляющиеся в сыворотке людей спонтанно или в результате предварительного введения ци- токина, могут быть небезразличны для иммунной системы. Они смещают баланс Th1- и №2-клеток за счет подавления дифференцировки клеток, продуцирующих соответствующий цитокин, и оказывают влияние на уровень гуморального и клеточного иммунного ответа. С другой стороны, результаты работы могут быть рассмотрены в контексте экспериментальной антицитокиновой терапии. Поиск путей антицитокиновой терапии как аутоиммунных, так и аллергических заболе­ваний продолжается. Результаты нашей работы свидетельствуют о принципиальной возможности использования иммунизации пептидными фраг­ментами IL-4 для ослабления аллергического ответа без существенных изменений клеточного иммунного ответа и выработки IgG-антител на растворимый белковый антиген. Аналогичный подход к индукции антител против IFNy позволя­ет ослабить гиперчувствительность замедленного типа, т. е. клеточную форму аллергии. Данный подход позволяет избежать введения в организм экзогенных антител, дорогостоящих и имеющих ограниченный срок пребывания в циркуляции. Вместо этого в организм вводятся пептиды, не оказывающие побочных эффектов. При этом до­статочно высокий уровень антител сохраняется в организме мышей в течение нескольких месяцев, и процесс антителообразования может быть под­держан реиммунизацией. Однако мы осознаем, что наша работа в прикладном аспекте значима лишь как этап на пути поиска эффективных методов антицитокиновой терапии.

Выводы

Накопление в сыворотке мышей антител к IFNy усиливает спонтанную и КонА-индуцированную пролиферацию спленоцитов сверхвысокого фона, вызванного введением адъюванта Фрейнда.

Присутствие в крови мышей антител, способ­ных связывать молекулы IFNy и IL-4, не влияет на направление дифференцировки Т-хелперов, одна­ко введение аутологичных сывороток, содержащих антитела к цитокинам, в культуру спленоцитов вызывает подавление дифференцировки Т-клеток, секретирующих соответствующий цитокин.

Наличие в циркуляции у мышей антител к IFNy подавляет как клеточный, так и гуморальный ответ на эритроциты барана, наличие антител к IL-4 — только гуморальный иммунный ответ.

При раздельной статистической обработке данных для мышей с высоким и более низким титром антител к IL-4 обнаружена отрицательная корреляция связывающей способности антител к IL-4 в ИФА с титром аллергических антител к овальбумину в РПГА. Корреляция титра реаги­нов со связывающей активностью антител к IFNy отсутствует.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант 05-04-49867-а).

ЛИТЕРАТУРА

Шевелев С.В., Харченко Т.Ю., Митин А.Н. и др. Индукция антител к ИФН-у путем иммунизации пептидом, воспроизводящим иммунодоминантный эпитоп IFN-y, влияние на дифференцировку Th1- и ТИ2-клеток // Иммунология. — 2006. — Т. 27, № 5. — С. 288-292.

Шевелев С.В., Митин А.Н., Андреев С.М., Ярилин А.А. Индукция антител к IFN у и IL-4 у мышей иммунизацией пептидами, воспроизводящими иммунодоминан- тные В-эпитопы // Цитокины и воспаление. — 2008. — Т. 7, № 2. — С. 23-27.

Barrera P., Oyen W.J., Boerman O.C., van Riel P.L. Scintigraphic detection of tumour necrosis factor in patients with rheumatoid arthritis // Ann. Rheum. Dis. — 2003. — Vol. 62, № 9. — 825-828.

Blease K., Jakubzick C.,Westwick J. et al. Therapeutic effect of IL-13 immu- noneutralization during chronic experimental fungal asthma // J. Immunol. — 2001. — Vol. 166, № 8. — P. 5219-5224.

Borish L.C., Nelson H.S., Corren J. et al. Efficacy of soluble IL-4 receptor for the treatment of adults with asthma // J. Allergy Clin. Immunol. — 2001. — Vol. 107, № 6. — P. 963-970.

Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibody- forming cells // Nature. — 1965. — Vol. 207, Vol. 5001. — P. 1106-1107.

Dinarello C.A. Anti-cytokine strategies // Eur Cytokine Netw. — 1992. — Vol. 3, № 1. — P. 7-17.

Feldmann M., Miotla J., Paleolog E. et al. () Future prospects for anti-cytokine treatment // . Ann. Rheum. Dis. — 2000. — Vol. 59, suppl. 1. — P. 119-122.

Fox D.A., Chiorazzi N., Katz D.H. Hapten-specific IgE antibody response in mice. V. Differential resistance of IgE and IgG B lymphocytes to X-irradiation // J. Immunol. — 1976. — Vol. 117, № 5 pt. 1. — P. 1622-1628.

Genberg H., Hansson A., Wernerson A., Wennberg L., Tyden G. Pharmacodynamics of rituximab in kidney allotransplantation // Am. J. Transplant. — 2006. — Vol. б, № 10. — P. 2418-2428.

Holgate S.T. Cytokine and anti-cytokine therapy for the treatment of asthma and allergic disease // Cytokine. — 2004. — Vol. 28, № 4-5. — P. 152-157.

Hopp T.P., Woods K.R. A computer program for predicting protein antigenic determinants // Mol. Immunol. — 1983. — Vol. 20, № 4. — P. 483-489.

Jung T., Schauer U., Heusser C.et al. Detection of intercellular citokines by flow cytometry // J. Immunol. Meth. — 1993. — Vol. 159, № 1-2. — P. 197-207.

Leckie M.J., ten Brincke A., Khan J. et al. Effects of an IL-5 blocking monoclonal antibody on eosinophils, airway hyperresponsiveness, and the late asthmatic response // Lancet. — 2000. — Vol. 356, № 9248. — P. 2144-2148.

Lyons A.B., Parish C.R. Determination of lymphocyte div'sion by flow cytometry // J. Immunol. Meth. — 1994. — Vol. 171, № 1. — P. 131-137.

Revoltella R.P. Natural and therapeutically-induced antibodies to cytokines // Biotherapy. — 1998. -Vol. 10, № 4. — P. 321-331.

Romagnani S. Human Th1 and Th2 subsets: regulation оf differentiation and role in protection and immunopathology // Int. Arch. Allergy Immunol. — 1992. — Vol. 98, № 4. — P. 279-285.

Simon H.U. Cytokine and anti-cytokine therapy for asthma // Curr. Allergy Asthma Rep. — 2006. — Vol. 6, № 2. — P. 117-121.

van der Meide P.H., Schellekens H. Anti-cytokine autoantibodies: epiphenomenon or oritical modulators of cytokine action // Biotherapy. — 1997. — Vol. 10, № 1. — P. 39-48.

Immunological consequences of anti-IFNy and anti-IL-4 antibodies induction in mice S.V. Shevelev, A.N. Mitin, M.F. Nikonova, A.A. Babahin, A.A. Yarilin Institute of Immunology of the Federal Medical-Biological Agency, Moscow

Certain forms of immune response were evaluated in mice having serum antibodies against key Th1 and Th2 cytokines IFNy and IL-4, induced by peptide immunization. The increase of spontaneous and mitogen- induced proliferation of splenic lymphocytes was found in mice immunized against IFNy. The ability of CD4+ T cells to differentiate into Th1 and Th2 did not change, but the autologous serum containing anti- IFNy or anti-IL-4 antibodies added to splenocyte culture suppressed differentiation of T helpers producing corresponding cytokines. Uptake of anti- IFNy antibodies leads to the suppression of both cellular and humoral immune response to ram erythrocytes, but does not influence anaphylactic antibody synthesis after immunization with ovalbumin. Uptake of anti-IL-4 antibodies suppresses humoral, but not cellular response to ram erythrocytes. Inhibitory influence of anti-IL-4 antibodies upon allergic response becomes clear when the anaphylactic antibodies are analyzed separately in mice with the high and the low anti-IL-4 antibodies levels (Cytokines and Inflammation. 2008. Vol. 7, № 3. P. 3-8.).

Key words: cytokines, interferon y interleukin 4, antibodies, immune response, differentiation.



загрузка...