загрузка...
 
Адгезия и фагоцитоз агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцитами у больных псориазом С.Л. Кашутин, Ю.С. Дегтяр Северный государственный медицинский университет, г. Архангельск
Повернутись до змісту

Адгезия и фагоцитоз агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцитами у больных псориазом С.Л. Кашутин, Ю.С. Дегтяр Северный государственный медицинский университет, г. Архангельск

Представлены данные уровня адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцитами при псориазе. Выявлены увеличение уровня адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцитами у больных псориазом, корреляции адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов нейтрофилами с количеством Сй8+, Сй1б+ и СР71+лимфоцитов. (Цитокины и воспаление.

2008. Т. 7, № 4. С. 54-57.)

Ключевые слова: агрегация тромбоцитов, нейтрофилы, моноциты, фагоцитоз, псориаз.

Изменения, происходящие в микроциркуля- торном русле при хроническом воспалительном процессе имеют большое теоретическое и практи­ческое значение. Существуют методы определения уровня агрегации тромбоцитов, на основании ко­торых возможны прогнозы дальнейшего течения воспалительного процесса и выбор необходимой лечебно-профилактической тактики [1, 2, 3]. Представляет интерес изучение механизмов ре­гуляции концентрации агрегатов тромбоцитов. По- видимому, одним из таких механизмов является фагоцитоз агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцитами. Данный морфофизиологический феномен описан в электронно-микроскопическом варианте еще в 1966 г. [9], однако электронная микроскопия в общеклинической практике недо­ступна. С другой стороны, представляла интерес не только констатация факта как такового, но и изучение условий изменения активности данного феномена. Агрегаты тромбоцитов легко визуали­зируются на обычном мазке крови. Использование этого чрезвычайно простого способа определения

уровня адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоци­тов нейтрофилами и моноцитами может использо­ваться для оценки активности данного феномена и изучения влияние иммунологических факторов на его интенсивность.

Таким образом, целью исследования было изу­чение активности адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцитами на мазках крови, а также выяснение возможных ус­ловий изменения активности данного явления на примере псориатической болезни. Известно, что при псориазе, наряду с повышенной секрецией фактора, активирующего тромбоциты, имеется высокий уровень агрегации тромбоцитов, зарегис­трированы изменения в коагулограмме и сосудах микроциркуляторного русла [14].

Материалы и методы

Проведено клинико-иммунологическое обследование 58 практически здоровых лиц (43-х женщин и 15-ти мужчин), 80 человек — в прогрессивную и стационарную стадии псориаза (из них 34 женщины и 46 мужчин). Возраст обследуемых колебался от 20 до 60 лет. Длительность заболевания составила от 1 года до 10 лет. Диагноз основывался на комплексе анамнес­тических, клинических и лабораторных данных. Венозную кровь для исследования брали утром натощак. На обычном мазке крови, зафиксированном смесью Никифорова и окрашенном по Романовскому — Гимза, проводили подсчет нейтрофилов и моноцитов (в % на 100 соответствующих клеток), участвующих в адгезии и фагоцитозе агрегатов тромбоцитов. Субпопуляции Т-лимфоцитов определяли методом непрямой иммуноперокси- дазной реакции с использованием моноклональных антител на препаратах лимфоцитов типа «высушенной капли» производства Онкологического центра (г. Москва) и НПО «ДиагноТех», (Ниж­ний Новогород). Определяли следующие фенотипы: CD5, CD3, CD4, CD8, CD16, CD10, CD71, CD25, HLA DR, CD22, CD95. Содержание TNFa, IL-2, трансферрина в периферической крови определяли на фотометре «Мультискан» МСС 340. Статистическая обработка данных показала, что распределение параметров, связанных с адгезией и фагоцитозом агрегатов тромбоцитов, было не нор­мальным, в связи с чем описание выборок проводили с помощью расчета среднего (М), медианы (Md) и межквартильного интерва­ла в виде 25 и 75 процентилей (С25С75). Вероятность различий оценивали по непараметрическому Z-критерию Колмогоро­ва — Смирнова. Распределение субпопуляций Т-лимфоцитов и цитокинов относилось к нормальному, что позволило оценить вероятность различий по критерию Стьюдента. Корреляционный анализ уровня адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцитами с другими иммунологическими параметрами проводили с использованием непараметрического коэффициента корреляции Спирмена.

Результаты и обсуждение

На рис. 1 представлены агрегаты тромбоцитов (рис. 1а), их адгезия и фагоцитоз нейтрофилом (рис. 16) и моноцитами (рис. 1в) (во всех случаях ув. х 1000).

У практически здоровых лиц (табл. 1) адгезия и фагоцитоз агрегатов тромбоцитов нейтрофилами регистрировались на уровне 5,13 % с М^ = 5,0 % и межквартильным интервалом от 3,0 до 7,0 %. Несколько активнее, но недостоверно, в этом от­ношении были моноциты: М = 6,55 %; М^ = 6,0 % с межквартильным интервалом от 4,0 до 8,0 %. При псориазе наблюдали увеличение активности адге­зии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов как ней­трофилами (до 7,88 %; Md = 7,5 %; с25с75 от 6,0 % до 9,0 %; p < 0,01), так и моноцитами (до 17,05 %; Md = 17,5 %; с25с75 от 15,0 до 19,0 %; p < 0,001). Причем моноциты были значительно активнее нейтрофилов (p < 0,001). Таким образом, адгезия и фагоцитоз агрегатов тромбоцитов может наблю­даться в норме и значительно усиливаться при развитии воспалительного процесса, связанного с чрезмерной пролиферацией кератиноцитов, в данном случае, при псориазе. В настоящее время роль тромбоцитов, как участников воспалительно­го процесса, не вызывает сомнений. Известно, что на тромбоцитах имеются рецепторы IFNy, факто­ров комплемента, экспрессированы Fc-рецепторы для IgG и IgE [7, 8]. Показано, что агрегация тром­боцитов сопровождается секрецией производных арахидоновой кислоты, гистамина и серотонина [4, 6]. При агрегации тромбоциты секретируют хемо- тактические факторы для моноцитов, нейтрофи- лов, эозинофилов, стимулируют секрецию IFNy, TNFa, С-реактивного белка, хемилюминесценцию и высвобождение супероксидных радикалов и лизосомальных ферментов — непосредствен­ных исполнителей повреждения, в том числе в дерме, эпидермисе, базальной мембране [8, 12, 13]. Учитывая, что, с одной стороны, моноциты и нейтрофилы способны активировать тромбоциты, в частности, посредством фактора, активирующе­го тромбоциты [13], а, с другой стороны, содержат ферменты, инактивирующие вазоактивные ве­щества, в частности, гистаминазу [5], создается впечатление, что адгезия и фагоцитоз агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцитами есть проявление регуляции воспалительного процесса. Особую значимость это приобретает в условиях повышенного уровня фактора, активирующего тромбоциты, агрегации тромбоцитов и инфиль­трации нейтрофилами эпидермиса у больных псориазом [14]. Если исходить из того, что моно­циты более активны в процессе утилизации акти­вированных форм тромбоцитов, чем нейтрофилы, представляло интерес сравнительное изучение

 

Рис. 1. Агрегаты тромбоцитов в мазке крови а) не подвергшиеся адгезии и фагоцитозу; б) адгезия и фагоцитоз нейтрофилом; в) адгезия и фагоцитоз моноцитами. Окраска по Романовскому — Гимза, ув. х 1000.

Фагоцитоз агрегатов тромбоцитов при псориазе

возможных корреляций между адгезией и фа­гоцитозом агрегатов тромбоцитов указанными клетками с другими иммунологическими парамет­рами, как то: фенотипом лимфоцитов, уровнями интерлейкина 2, трансферрина и фактора некроза опухоли а (табл. 2). У практически здоровых лиц коэффициент корреляции уровня адгезии и фа­гоцитоза агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и содержания цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллеров был низким (р = -0,05 и р = -0,01). У больных псориазом увеличение количества цитотоксических Т-лимфоцитов (с 0,19 ± 0,05 х 109 до 0,54 ± 0,06 х 109 кл/л; p < 0,01) и естественных киллеров (с 0,61 ± 0,06 х 109 до 0,68 ± 0,09 х 109 кл/л) сопровождалось появлением достоверной зависимости между числом этих кле­ток и увеличением уровня адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов нейтрофилами (р = 0,71; p < 0,01 и р = 0,57; p < 0,01). С повышенными кон­центрациями Т-хелперов у больных псориазом, наоборот, регистрировалась обратная взаимо­связь уровня адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов нейтрофилами (р = -0,49; p < 0,05) при отсутствии достоверной корреляции между этими показателями у практически здоровых лиц. Корреляции между активностью адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов моноцитами и числом лимфоцитов с фенотипами CD8+и CD16+ как у практически здоровых лиц, так и у больных псориазом, были очень слабыми и недостоверны­ми. Зависимость адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов моноцитами от количества CD4+ лимфоцитов установлена только у практически здоровых лиц (р = -0,26; p < 0,05), но не у больных псориазом. Активация иммунокомпетентных кле­ток при псориазе, опосредованная через антигены главного комплекса гистосовместимости класса II, также не связана с изучаемым процессом. На­против, снижение концентрации лимфоцитов с рецепторами трансферрина (с 0,63 ± 0,06 х 109 до 0,46 ± 0,02 х 109 кл/л; p < 0,01) отрицательно кор­релировало с активностью адгезии и фагоцитозом агрегатов тромбоцитов нейтрофилами (р = -0,45; p < 0,05), но не моноцитами. Следует отметить, что данная зависимость, зарегистрированная у здо­ровых лиц (р = -0,31; p < 0,05), при псориазе лишь усиливалась. Кроме того, корреляции изучаемого процесса с концентрацией трансферрина не выявле­но. Снижение уровня лимфоцитов с рецептором Пі-2 при псориазе (с 0,66 ± 0,07 х109 до 0,35 ± 0,02 х109 кл/л; p < 0,01) не взаимосвязано с адгезией и фагоцитозом агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцита ми. Корреляции с содержанием IL-2 (3,31 ± 0,67 нг/мл; p < 0,05) недостоверны

Таблица 1 Уровень активности адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцитами.

 

Примечание. Отличие от группы здоровых: * — р < 0,01, ** — р < 0,001.

Таблица 2 Содержание фенотипов лимфоцитов (М ± т) и коэффициенты корреляции Спирмена между содержанием фенотипов лимфоцитов и уровнем адгезии и фагоцитоза агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцитами в периферической крови практически здоровых лиц и больных псориазом

 

Примечание. Достоверное отличие средних величин от группы практически здоровых: * — р < 0,05, ** — р < 0,01. Достоверность коэффици­ентов корреляции Спирмена: 1 — р < 0,05, 11 — р < 0,01.

Только у практически здо­ровых лиц зарегистрирована прямая зависимость между адгезией и фагоцитозом агрегатов тром­боцитов моноцитами и числом активированных лимфоцитов с фенотипом CD25+ (р = 0,31; p < 0,01). В отношении лимфоцитов с рецептором CD95 выяв­лено, что увеличение экспрессии данного рецептора (с 0,65 ± 0,06 х 109 до 1,21 ± 0,08 х 109 кл/л; p < 0,01) влечет за собой потерю достоверной корреляции с повышенным уровнем адгезии и фагоцитозом агре­гатов тромбоцитов моноцитами (ослабление связи с р = 0,34; p < 0,01 до р = -0,25; p > 0,05). Корреляции с увеличением концентрации TNFa до 0,93 ± 0,19 нг/мл; p < 0,05 не проявились. Известно, что TNFa обла­дает способностью стимулировать свертываемость крови, что частично связано с индукцией секреции фактора, активирующего тромбоциты [11].

Таким образом, возможно, что при псориазе адгезия и фагоцитоз агрегатов тромбоцитов ней­трофилами в определенной степени зависят от уровня активности окислительно-восстановитель­ных реакций и взаимосвязаны с цитотоксической активностью. В частности, известно о способности фактора, активирующего тромбоциты, усиливать активность цитотоксических клеток [10]. Со сто­роны моноцитов, наоборот, большее количество связей выявлены у практически здоровых лиц. У здоровых людей корреляции адгезии и фагоцитоза тромбоцитарных агрегатов с лимфоцитами, имею­щими рецепторы IL-2 и CD95, вероятно, являются отражением зависимости, с одной стороны, от пролиферативной реакции иммунокомпетент- ных клеток, а с другой, — от такого механизма, как апоптоз. Развитие псориаза сопровождается ослаблением данных корреляций.

ЛИТЕРАТУРА

Кручинский Н.Г., Тепляков А.И., Гаранович В.Н. Экспресс-оценка реологичес­ких свойств крови и методы коррекции их нарушений у пациентов с атероск­лерозом: Метод. рекомендации. — Могилев, 2000.

Николов О.Н., Гаташ С.В., Лакин К.М., Лебидь Л.Н. Способ определения агрегационной способности тромбоцитов. — А.С. СССР № 874033 от 23.10.1981.

Савченко Е.А., Савченко А.А., Герасимчук А.Н., Грищенко Д.А. Оценка метабо­лического статуса тромбоцитов в норме и при ишемической болезни сердца // Клин. лаб. диагн. — 2006. — № 5. — С. 33-36.

Формен Дж.К. Тромбоциты // Руководство по иммунофармакологии / Под ред. М.М. Дейла, Дж.К. Формена. — М.: Медицина, 1998. — С. 49-60.

Beer D.J., Matloff S.M., RockLin R.E. The influence of histamine on immune and inflammatory responses // Adv. Immunol. — 1984. — VoL. 35. — P. 209-268.

Clark W.F., Tevaarwerk G.J., Bandali K. et al. Platelet aggregation and release associated with immune complex formation in pig plasma // J. Lab. Clin. Med. — 1980. — Vol. 96, № 4. — P. 654-665.

Fornusek L., Vetvicka V. Fc receptor — more answers, more questions // Folia microbiol. (Praha). — 1984. — Vol. 29, № 6. — P. 476-516.

Joseph M., Capron A., Tsicopoulos A., Damonneville M. et al. Les plaquettes sanguines dans les r?actions allergiques et inflammatoires. Blood platelets in al­

lergic and inflammatory reactions jj Rev. fr. Allergol. Immunol. clin. — l989. — Vol. 29, № 4. — P. 197-20Б.

9. Poole J.C.F. Phagocytosis of platelets by monocytes in organizing arterial thrombi. An electron microsopical study jj Q. J. Exp. Physiol. Cogn. Med. Sci. — 1966. — Vol. Б1, № l. — P. Б4-Б9.

Rola-Pleszczynski M., Pignol B., Pouliot C., Braquet P. Inhibition of human lym­phocyte proliferation and interleukin 2 production by platelet activating factor (PAF-acether): reversal by a specific antagonist, BN Б2021 jj Biochem. Biophys. Res. Commun. — 1987. — 142, № 3. — Р. 7Б4-7б0.

Singri P., West D.P., Gordon K.B. Biological therapy for psoriasis: the new thera­peutic frontier jj Arch. Dermatol. — 2002. — Vol. 138, № Б. — Р. бБ7-бб3.

Tzeng D.Y., Deuel T.F., Huang J.S. et al. Platelet derived growth factor promotes polymorhonuclear leukocyte activation jj Blood. — l984. — Vol. б4, № Б. — P. 1123-1128.

Vercellotti G.M., Wickham N.W., Gustafson K.S. et al. Thrombin-treated endothe- lium primes neutrophil functions: inhibition by platelet-activating factor receptor antagonists jjJ. Leukoc. Biol. — 1989. — Vol. 4Б, № б. — P. 483-490.

Vila L., Sola J., Puig L., de Castellarnau C., de Moragas J.M. Exogenous arachidonic acid metabolism in platelets from psoriatic patients jj Acta Derm. Venereol. — 1990. — Vol. 70, № 2. - P. 110-114.

Adhesion and phagocytosis of platelet aggregates by neutrophiles and monocytes in patients with psoriasis S.L. Kashutin, U.S. Degtyar

Nothern State Medical University, ArchangeLsk

The data on the level of platelet aggregate adhesion and phagocytosis by neutrophiles and monocytes in healthy persons and patients with psoriasis are presented. Elevated levels of platelet aggregate adhesion and phagocytosis by neutrophiles and monocytes revealed in psoriatic patients correlated with the number of CD8+, CD16+, CD71+ lymphocytes. (Cytokines and Inflammation. 2008. Vol. 7, № 4. P. 54-57.)

Key words: platelet aggregation, neutrophiles, monocytes, phagocytosis, psoriasis.



загрузка...