загрузка...
 
Цитокины — посредники нейроиммунорегуляции
Повернутись до змісту

Цитокины — посредники нейроиммунорегуляции

Т.Я. Абрамова, В.С. Кожевников, В.В. Абрамов ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

Известно, что иммунная, эндокринная и нервная системы связаны многими прямыми и обратными связями и характеризуются значительным структурно-функциональным сходством. Каналами, осуществляющими взаимодействие, являются вегетативная нервная система, ее симпатический (СО ВНС) и парасимпатический (ПО ВНС) отделы, гормоны ГВНС, нейропептиды, а также цитокины. На этом основании мы предположили, что здоровые люди, имеющие индивидуальные особенности нервной системы, принадлежат к определенным иммунологическим типам, связанным с церебральной асимметрией мозга и параметрами высшей нервной деятельности (типом ВНД, памятью, «общими способностями»).

В связи с этим, целью настоящей работы являлось определение особенностей иммунной системы у здоровых людей с разным уровнем «общих способностей».

Для достижения поставленной цели использовался комплекс иммунологических, нейрофизиологических и психологических методов. В результате обследования 78 здоровых мужчин (средний возраст 22 ± 2,9) установлены достоверные различия по ряду иммунологических параметров в группах, характеризующихся относительно низкими (группа 1) и высокими (группа 2) «общими способностями». Так, в первой группе выявлено большее количество моноцитов, экспрессирующих ТОТар. Кроме того, у мужчин первой группы определяется достоверно больше СБ8+ и СВ8+ВИ+-лим- фоцитов. В сыворотке крови доноров первой из сравниваемых групп определяется больше ^М, обладающих цито- токсическими свойствами. Возможно, что в основе отмеченного накопления лежит более интенсивная пролиферация МНК у мужчин с относительно низкими «общими способностями» по сравнению с мужчинами оппозитной группы. В то же время, повышение уровня циркулирующих иммунных комплексов позволяет думать, что это либо результат повышенной секреции ^М, либо итог замедленной адсорбции комплексов.


Известно, что базу формирования механизмов мышления составляют нейрохимические процессы, влияющие на активность мессенджеров нейроиммунного сопряжения. Также известно о зависимости характера мышления от функциональной асимметрии мозга. Нами установлено, что правши и ам- бидекстры с относительно низкими «общими способностями» характеризуются снижением активности СО ВНС в покое и при ментальной нагрузке, снижением уровня кортизола, но повышением содержания и активности СБ8+-лимфоцитов в крови относительно оппозитных групп правшей и амбидекст- ров. Кроме того, группы правшей с разным уровнем «общих способностей» характеризуются разницей в уровнях ^-6 и ^-1 в сыворотке, а аналогичные группы амбидекстров характеризуются различиями в фагоцитарной активности, содержании TNFаp+-моноцитов и уровня IgG. Таким образом, особенности иммунного статуса у здоровых людей сопряжены с уровнем «общих способностей», связанных с функциональной асимметрией полушарий и опосредующих свое иммуномодулирующее действие через медиаторы нейроиммунного сопряжения — нейромедиаторы и цитокины.

Регуляторные взаимодействия между клеточным и гуморальным ответом при формировании иммунной памяти

Е.Д. Гаврилова, О.Т. Кудаева, О.П. Колесникова ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

Развитие иммунного ответа не заканчивается образованием Т-эффекторов или синтезом антител, но вызывает формирование иммунологической памяти, характер которой в настоящее время зачастую трудно связать с особенностями первых стадий иммунного ответа. В связи с этим, в настоящей работе изучалась взаимосвязь между выраженностью клеточных реакций и формированием иммунной памяти при специфическом иммунном ответе на Т-зависи- мый антиген.

Иммунизация низкой дозой, вызывающей образование значительно меньшего количества антителообразующих клеток при первичном ответе, приводит к более выраженной реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (43,3 % и 28,4 %, соответственно, для дозы 107 и 2 х 108 ЭБ), что соответствует общепринятым представлениям. Но также приводит и к более сильному гуморальному иммунному ответу при повторной иммунизации по сравнению с дозой, оптимальной для развития первичного гуморального ответа (766 035 и 359 656, соответственно, для дозы 107 и 2 х 108 ЭБ). Введение разрешающей дозы для оценки реакции ГЗТ при первичном иммунном ответе не влияет на формирующийся в это же время системный гуморальный ответ (Е.Ю. Гусев, 1996). Однако повторное введение антигена мышам вызывает значительное угнетение вторичного гуморального иммунного ответа (277 812 по сравнению с 766 035 в контрольной группе без дополнительного введения антигена для оценки ГЗТ), если при первичной иммунизации использовались низкие дозы. Подобный эффект не выявляется в группе мышей, при первичной иммунизации получавших оптимальную для продукции антител дозу антигена. Таким образом, развитие реакции ГЗТ при введении разрешающей дозы, несмотря на локальное развертывание процесса, сопровождается выраженной супрессией идущих в это же время системных процессов формирования гуморальной иммунной памяти. Вероятно, вырабатывающиеся в это время цитокины и другие факторы, участвующие в развитии клеточного ответа, направляют процессы формирования иммунной памяти по клеточному пути, ингибируя формирование клеток памяти гуморального ответа, так что при повторном введении антигена наблюдается значительное снижение гуморального ответа. В случае с оптимальной для гуморального ответа дозой эффект может быть не выражен в связи со слабым клеточным ответом либо с большей стабильностью процессов формирования иммунной памяти в ситуации сильного гуморального ответа.

Подавление первичного аллогенного ответа клетками памяти CD8+

Т.С. Гриненко, И.А. Батурина, Е.С. Звездова, Д.Б. Казанский ГУ Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

При повторном заражении вирусом другого штамма иммунный ответ оказывается подавленным. Этот феномен получил название «первичного антигенного греха». В этой работе, используя мышей с трансгенной экспрессией зеленого флуоресцентного белка (GFP), мы изучали влияние Т-кле- ток памяти CD8+, специфичных к аллоантигенам опухолевых клеток, на пролиферацию наивных Т-клеток в ответе на те же аллоантигены. В этой работе было показано, что рестимуляция клеток памяти, специфичных к молекулам МНС класса I, сопровождается избирательной пролиферацией клеток CD8+. В присутствии клеток памяти пролиферация клеток CD4+ не обнаруживается даже при дополнительных ал- логенных отличиях по молекулам МНС класса II между отвечающими клетками и стимуляторами. В системах культивирования в смешанных культурах лимфоцитов (MLR) in vitro и адоптивного переноса in vivo мы показали, что клетки памяти подавляют пролиферацию наивных клеток CD8+ с той же специфичностью и их дифференцировку в клетки памяти. По всей видимости, эффект не обусловлен быстрой элиминацией антигена, т.к. клетки памяти, выделенные через 2 мес. после иммунизации аллогенной опухолью, не обладают немедленной цитолитической активностью, оцениваемой проточной цитофлюориметрией смесей клеток памяти с трансгенными мишенями, экспрессирующими GFP. В исследованных нами системах клетки памяти приобретают эффектор- ные функции лишь после рестимуляции антигеном в течение суток, что является специфической особенностью основной популяции клеток памяти («central memory cells»). В ответ на стимуляцию антигеном в MLR, содержащих клетки памяти, наблюдается увеличенная продукция IL-10 и глубокое подавление продукции IL-2 по сравнению с культурами, содержащими наивные клетки. Клетки памяти мышей нокаутов по гену IL-10 не подавляют пролиферацию наивных клеток на аллоантиген in vitro. Таким образом, при вторичном иммунном ответе создаются неоптимальные условия для активации наивных клеток, связанные с отсутствием основного активационного цитокина IL-2 и секрецией центральными клетками памяти супрессорного цитокина IL-10. Вместе с тем, эти условия достаточны для эффективной активации, пролиферации и приобретения эффекторных функций клетками памяти CD8+. Таким образом, клетки памяти CD8+, сохраняя способность к индукции эффекторных функций, обладают выраженной супрессорной активностью, что может быть важно для предотвращения воспаления и риска развития аутоиммунных реакций при повторной встрече организма с антигеном.

Цитокинсинтезирующая активность эритрокариоцитов костного мозга и ее регуляция в норме

В.В. Денисова, А.Д. Кулагин, И.А. Лисуков, С.В. Сенников, В.А. Козлов Новосибирская государственная медицинская академия;

ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

В результате современных работ в области экспериментальной иммунологии стало известно, что эритроидные ядросодержащие клетки гемопоэтических органов млекопитающих обладают множеством иммунных и иммунорегулятор- ных функций, которые частично осуществляются посредством продуцируемых эритрокариоцитами цитокинов.

Целью исследования стало изучение спектра продуцируемых эритрокариоцитами цитокинов и возможных механизмов регуляции цитокинсинтезирующей активности эритроидных ядросодержащих клеток микроокружением костного мозга (КМ).


КМ был исследован у 22 здоровых добровольных информированных доноров. Для разделения клетки были фракционированы на градиенте плотности, прилипанием к пластику адгезирующих элементов МНК, позитивной селекцией эрит- роидных клеток методом непрямого пеннинга с антителами к гликофорину А (Abcam Ltd., UK). Клетки трех фракций культивировались, изолировано и совместно, в различных количественных соотношениях 24 ч в RPMI 1640 для получения культуральной среды. Количественное содержание цитокинов в среде определялось методом иммунофлюоресценции (BioPlex Analyzer, USA).

В результате, впервые было выявлено, что клетки обогащенной популяции эритрокариоцитов КМ человека продуцируют IL-8, IL-13, IL-17, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 и MIP-1P, не секретируют IL-5 и IL-7 и IL-12, а в составе МНК синтезируют только TNFa и IL-10. При оценке взаимного влияния различных клеточных фракций КМ и их продуктов при совместном культивировании была выявлена дозозависимая ингибирующая активность клеток прилипающей фракции КМ на ци- токинпродуцирующую способность эритрокариоцитов.

Таким образом, ядросодержащие эритроидные клетки КМ человека в норме обладают огромным иммунорегуляторным потенциалом, продуцируя широкий спектр цитокинов. Цито- кинсинтезирующая активность находится под негативным контролем со стороны адгезирующего микроокружения, что может быть значимым при патологиях, сопровождающихся угнетением контролирующей функции стромы КМ.

Ранние этапы эволюции врожденного иммунитета: анализ роли цитокинов и комплемента

И.С. Дьячков, И.В. Кудрявцев, А.В. Полевщиков ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург

Обращение к филогенетически более ранним группам животных — это универсальный путь к изучению отдельных элементов, установлению их взаимосвязи и пониманию явления в целом. Иглокожие и оболочники стоят у основания филогенетического древа вторичноротых животных. Потенциальное родство этих групп с позвоночными животными определяет важность изучения их реакций врожденного иммунитета, дает основания предполагать наличие аналогичных или гомологичных элементов, свойственных наиболее совершенным иммунным реакциям позвоночных. Клиренс организма позвоночных и беспозвоночных от патогенов опосредуется через кооперативное действие гуморальных и клеточных механизмов защиты. При этом система комплемента является одним из основных эффекторных механизмов реакций врожденного и приобретенного иммунитета. Белки каскада комплемента (КК) найдены только у вторичноротых животных. Принципиальной чертой КК уже с самых ранних этапов его эволюции становится совмещение функций распознавания патогена, его опсонизации и привлечения фагоцитов, на что указывает раннее появление рецепторов для комплемента на фагоцитах и хематтрактантных свойств у продуктов расщепления С3. Становление пары белков С3 — фактор В произошло уже у иглокожих, у которых, как показывают проведенные исследования, клеточные реакции врожденного иммунитета играют главную роль в элиминации патогенов. Поэтому выявленные различия в ответе культур целомоцитов морских звезд на различные митогены (Кон А, ФГА, анти- лимфоцитарный глобулин) носят принципиально важный характер. При анализе пролиферации целомоцитов A. rubens при стимуляции митогенами установлено, что при всех концентрациях на точках 24 и 48 ч включение 3Н-тимидина максимально, что может свидетельствовать о существовании, как минимум, двух популяций целомоцитов. Показано, что ми- тогены выступают в роли синхронизаторов клеточного цикла целомоцитов, что позволяет косвенно судить о продолжительности клеточного цикла и характере клеточного ответа, опосредованного на постоянном выходе предшественников эффекторных клеток в циркуляцию из депо. Активация предшественников подразумевает продукцию медиатор- ных факторов, обладающих сигнальными, митогенными и дифференцирующими свойствами после превышения пороговой концентрации. Полученные результаты позволяют ставить вопрос о наличии подобных медиаторов (предковых
форм цитокинов) у морской звезды A. rubens при межклеточной кооперации в ходе пролиферативного ответа на ми- тогены in vitro.

Работа поддержана грантом РФФИ № 04-04-49069.

Роль VEGF в регуляции функциональной активности клеток иммунной системы

Е.П. Киселева, А.В. Крылов, В.И. Людыно НИИ экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург

Фактор роста сосудистого эндотелия (VEGF) является основным ангиогенным фактором, стимулирующим рост сосудов и пролиферацию эндотелия in vitro, однако его влияние на клетки иммунной системы изучено мало. Нами было исследовано воздействие VEGF на функциональную активность резидентных перитонеальных макрофагов мышей. Было показано, что инкубация макрофагов в присутствии этого фактора стимулирует продукцию нитроксид анионов, модулирует продукцию супероксид анионов и не влияет на пиноцитоз и активность фермента 5’-нуклеотидазы макрофагов. С помощью реакции ОТ-ПЦР в макрофагах была выявлена экспрессия мРНК рецепторов VEGF обоих типов (VEGFR1 и VEGFR2). Кроме того, было исследовано влияние VEGF на клетки тимуса мышей in vivo и in vitro. В совместной работе с американскими коллегами показано, что длительное введение VEGF в организм животных вызывает развитие инволюции тимуса, по многим своим характеристикам похожее на инволюцию тимуса при опухолевом росте (Ohm et al., 2003). Введение блокирующих антител к VEGF в организм животных- опухоленосителей задерживало развитие инволюции тимуса. Оказалось, что при добавлении этого фактора к тимоцитам in vitro он способен прямо воздействовать на клетки и усиливать развитие спонтанного апоптоза, а также модулировать митоген-индуцированную пролиферацию. При исследовании экспрессии мРНК рецепторов VEGF нами впервые была выявлена экспрессия мРНК VEGFR2 и отсутствие мРНК VEGFR1 в тимоцитах. Повышение концентрации VEGF в крови при опухолевом росте и других патологических состояниях может являться причиной развития инволюции тимуса и последующего иммунодефицита. Выявление нежелательных иммуномодулирующих эффектов этого фактора имеет большие перспективы для их коррекции, поскольку в настоящее время разработано значительное количество способов анти- VEGF терапии, включающей применение антител, антирецеп- торных препаратов и рибозимов. Таким образом, полученные данные обосновывают новый подход к применению антианги- огенной терапии, которая может и должна применяться не только для подавления роста сосудов, но и для устранения иммунодепрессивного влияния избыточного ангиогенеза.

Работа поддержана грантами РФФИ №03-04-49186 и НШ- 540.2003.4.

Влияние длительной физической тренировки на иммунные реакции in vitro и in vivo у экспериментальных животных

О.Т. Кудаева, О.П. Колесникова, Т.Г. Сухенко, О.В. Вежан,

Е.В. Гойман, А.П. Лыков ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

Физические нагрузки оказывают выраженное влияние на все функциональные системы организма, в том числе на иммунную систему. В зависимости от интенсивности, длительности, вида нагрузок может наблюдаться широкий спектр самых разнообразных проявлений — от стимуляции защитных реакций до резкого угнетения иммунных процессов. При этом данные весьма противоречивы и не дают ясной картины, позволяющей понять принципы регуляции ответной реакции иммунной системы на изменение физической активности.


В данной работе исследовалось влияние регулярных физических тренировок разной длительности на состояние иммунной системы экспериментальных животных. В качестве модели физических тренировок было выбрано плавание без груза различной продолжительности: 1, 2 и 4 ч. Контрольной группой служили животные того же генотипа, пола и возраста, что и опытные.

При непродолжительных нагрузках не отмечается выраженных изменений иммунных параметров. Увеличение длительности плавания до 2 ч, не оказывая заметного влияния на функциональную активность клеток в опытах in vitro, вызывает снижение клеточного ответа (реакция ГЗТ) при ответе на антиген. Наблюдается повышение уровня иммуноглобулинов в периферической крови, сопровождающееся усилением спонтанного синтеза иммуноглобулинов клетками костного мозга и селезенки in vitro и появлением плазматических клеток в периферической крови. Физические нагрузки вызывают изменение гемопоэза: в костном мозге наблюдается активация миелопоэза; относительное содержание эритроидных клеток в костном мозге снижается, но увеличивается в селезенке. Реакция иммунной системы зависит от интенсивности физических нагрузок. При продолжительных тренировках (4 часовое плавание) супрессивное действие начинает проявляться при оценке состояния иммунной системы в функциональных тестах in vitro. Поликлональная активация В-лимфоцитов сохраняется даже при значительных физических нагрузках, которые оказывают угнетающее действие на другие параметры иммунной системы.

Влияние регулярных физических тренировок на параметры иммунной системы оказывается более выраженным у самок.

Повышение физической активности, по-видимому, сдвигает соотношение иммунных реакций в сторону активации Th2-зависимого звена.

Характеристика частично-зрелых дендритных клеток у больных туберкулезом легких

О.Ю. Леплина, Л.В. Сахно, М.А. Тихонова, С.Д. Никонов, О.А. Жданов,

А.А. Останин, Е.Р. Черных ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

Дендритные клетки (ДК) играют важную роль в запуске эффективного антибактериального ответа, в том числе при туберкулезной инфекции. Однако M. tuberculosis может оказывать негативное действие на созревание и функциональную активность ДК. Учитывая также изменение при туберкулезной инфекции функциональных свойств моноцитов (источник генерации миелоидных ДК), вопрос о функциональной полноценности ДК при туберкулезе остается открытым. Целью настоящей работы явился сравнительный анализ фенотипических и функциональных свойств ДК у больных туберкулезом легких (ТЛ), в том числе в подгруппах с сохранным и нарушенным антиген- специфическим ответом.

Для генерации ДК использовали протокол получения частично зрелых ДК путем культивирования прилипающей фракции мононуклеарных клеток периферической крови с GM- CSF и IFNa с последующим дозреванием ДК в присутствии лейкинферона. Фенотипическая характеристика ДК включала оценку HLA-DR, CD14 и CD83 методом проточной цитоф- люориметрии. В качестве функциональных параметров оценивали аллостимуляторную активность ДК в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ). ДК, полученные у больных, содержали 23,2 ± 3,6 % зрелых (CD83+) клеток, характеризовались низкой экспрессией CD14 молекул (13,67 ± 1,8 %) и в преобладающем большинстве (91,9 ± 1,9%) экспрессировали HLA-DR антигены, что было сопоставимо с фенотипом ДК, полученных у здоровых доноров (CD83+ 25,8 ± 1,6 %; CD14+

± 0,7 %, HLA-DR+ 94,4 ± 2,0 %). В целом по группе больных, ДК обладали сходной с донорами аллостимуляторной активностью в СКЛ. Так, ответ МНК на ДК в соотношении 10:1 в группе больных составил 16860 ± 3170 имп./мин и не отличался от такового у здоровых доноров (14500 ± 4060 имп./мин). Тем не менее, при сравнении подгрупп больных ТЛ с сохранным и сниженным ответом на PPD (очищенный дериват туберкулина) аллостимуляторная активность ДК у PPD-анер-
гичных больных была значимо ниже, чем в группе пациентов с сохранным антиген-специфическим ответом (индекс стимуляции 11,9 ± 3,8 vs 22,2 ± 7,4; р < 0,05). Таким образом, нарушение пролиферативного ответа на РРБ у больных ТЛ сопряжено со сниженной функциональной активностью ДК.

Экспрессия генов цитокинов в головном мозге животных при трансплантации иммунокомпетентных клеток

Е.В. Маркова, В.В. Абрамов, В.А. Козлов ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

В настоящее время накоплено достаточно убедительных доказательств того, что цитокины воспринимаются мозгом как молекулярные сигналы заболевания. Тем не менее, показано, что продукция цитокинов в структурах мозга наблюдается не только в результате активации иммунной системы или процессов воспаления, но и у животных без патологических проявлений, т. е. имеет место базовый уровень экспрессии генов цитокинов в мозге. При этом животные, характеризующиеся различным уровнем ориентировочно-исследовательского поведения, имеют, по нашим данным, различный уровень экспрессии генов ^1В, рецептора ^-1 первого типа (IL1RI) и рецептора эритропоэтина в головном мозге. Нами впервые показана возможность направленной регуляции поведенческих реакций у животных путем трансплантации иммунокомпетентных клеток. В качестве объекта исследования были выбраны животные — мыши (СВА х С57В1/6^1 с различным уровнем ориентировочно-исследовательского поведения, представляющего собой один из важнейших типов поведения, который обеспечивает животных знанием об окружающей среде и является существенным психологическим механизмом адаптации высших позвоночных. Установлено, что внутривенное введение спленоцитов (как неразделенной суспензии, так и прилипающей фракции), выделенных у мышей, характеризующихся низкими параметрами ориентировочно-исследовательского поведения в «открытом поле» (группа 1) син- генным животным с высоким уровнем указанной поведенческой реакции (группа 2) сопровождается достоверным снижением параметров ориетировочно-исследовательского поведения у реципиентов. Напротив, трансплантация спле- ноцитов от доноров, принадлежащих ко 2-й группе, реципиентам из 1-й группы приводит к повышению у последних уровня исследуемой поведенческой реакции. В то же время при трансплантации спленоцитов внутри групп животных, характеризующихся идентичным поведением в «открытом поле», параметры исследовательского поведения у реципиентов не изменялись. Указанные выше изменения параметров ориентировочно-исследовательского поведения вследствие трансплантации иммунокомпетентных клеток сопровождались определенными изменениями уровня экспрессии мРНК генов ^1В и IL1RI первого типа клетками головного мозга мышей-реципиентов. Полученные экспериментальные данные позволяют говорить о том, что клетки селезенки способны влиять на уровень ориентировочно-исследовательского поведения животных, а цитокины, экспрессируемые в мозге, участвуют не только в патологических процессах, но и в реализации нормальных физиологических функций организма, в частности, процессов высшей нервной деятельности.

Нейтрофильные гранулоциты и цитокиновая сеть

И.В. Нестерова1, И.Н. Швыдченко2

Институт иммунофизиологии, Москва;

Российский центр функциональной хирургической гастроэнтерологии, г. Краснодар


Традиционно нейтрофильные гранулоциты (НГ) рассматриваются как основные клетки, играющие ключевую роль в противоинфекционной защите организма, благодаря своей способности поглощать патогены, высвобождать широкий спектр микробицидных компонентов и синтезировать вазоактивные и хемотаксические липидные медиаторы. В свете современных экспериментальных данных взгляд на эти «совершенные» фагоциты существенно изменился. Работами последнего десятилетия доказано, что НГ играют активную роль в межклеточных взаимодействиях, в которых цитокины выступают в роли посредников и регуляторов. Спектр ци- токинов, влияющих на количественный и субпопуляционный состав НГ и их функциональную активность чрезвычайно широк и постоянно пополняется. Начиная с процессов мие- лопоэза в костном мозге, где основную роль играют колониестимулирующие факторы (GM-, G-CSF) и IL-3, НГ испытывают регуляторные влияния цитокинов на протяжении всей своей короткой жизни, включая запрограммированную гибель (апоптоз). В свою очередь установлено, что и сами НГ при активации секретируют цитокины, и могут, таким образом, инициировать и регулировать воспаление и иммунный ответ. В 1997 г. P.P. McDonald et al. установили наличие в нейтрофилах транскрипционного фактора NF-kB, контролирующего экспрессию генов, кодирующих синтез многих цитокинов и хемокинов, адгезионных белков, ферментов, регулирующих рост и апоптоз клеток. Открытие того, что конечно-дифференцированные короткоживущие НГ имеют значительный транскрипционный потенциал и способны не только секретировать, но и синтезировать цито- кины de novo, совершило прорыв в понимании вклада этих клеток в защитные иммунные реакции. НГ очень лабильная клеточная популяция. Они способны чутко и дифференцировано реагировать на различные стимулы. Спектр и количество секретируемых цитокинов зависит от многих факторов, включая степень предварительной активации клетки (праймирование), вид стимулирующего воздействия, его интенсивность, количество клеток (клеточную плотность), костимулирующие сигналы, основную роль в которых играют адгезионные взаимодействия. Исследования в этой области приблизят нас не только к пониманию биологической роли НГ, они чрезвычайно перспективны в клиническом плане, т.к. помогут разработать совершенно новые схемы лечения хронических воспалительных заболеваний, в большинстве которых НГ являются преобладающей клеточной популяцией в очаге воспаления.

Роль цитокинов в регуляции созревания ооцитов

А.А. Останин1, И.В. Айзикович2, Б.И. Айзикович2,

О.Ю. Леплина1, Е.Р. Черных1

ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН; 2 МЦ «Авиценна», г. Новосибирск

Целью работы стало проведение комплексного анализа уровня 17 цитокинов в фолликулярной жидкости (ФЖ) женщин на пике стимулированной суперовуляции при проведении экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и оценка на этой основе роли цитокинов в процессе созревания ооцитов.

Было обследовано 52 женщины, которым проводилось лечение бесплодия методом ЭКО и 7 фертильных здоровых женщин-доноров ооцитов. В день трансвагинальной пункции фолликулов получали образцы ФЖ, в которых измеряли концентрацию 17 цитокинов (IL-1p, TNFa, IFNy, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12 (p70), IL-13, IL-17, G-CSF, GM-CSF, МСР-1, MIP-1p) методом Bio-Plex анализа. При оценке овариальной функции определялось общее количество полученных ооцитов (Кол_О), процентное содержание среди них ооцитов высокого качества (Кач_О), а также индекс оплодотворения (Инд_Опл) в виде процентного отношения количества оплодотворенных яйцеклеток к общему числу полученных ооцитов.

В результате на пике стимулированной суперовуляции в ФЖ выявляется широкий спектр цитокинов, включая ТЫ/про- воспалительные и ТЪ2/противовоспалительные цитокины, хемокины, а также гемопоэтические ростовые факторы. При этом пациентки с бесплодием были сопоставимы с женщина- ми-донорами ооцитов по составу и среднему уровню цитоки- нов, однако, характеризовались выраженным разбросом ин
дивидуальных значений. Сравнительный анализ женщин, оп- позитных по количеству полученных ооцитов (< 8 или > 8, Median нормативных значений) показал, что у пациенток с неэффективным фолликулогенезом (Median = 4) концентрация в ФЖ IL-2, IL-4, IL-7 и G-CSF достоверно ниже, чем в подгруппе женщин, где среднее количество ооцитов было в 3 раза выше (Median = 13). При анализе женщин, оппо- зитных по количеству качественных ооцитов (Median=50 % vs 100%), установлено, что 2 кратное уменьшение выхода яйцеклеток с высокой оценкой качества происходит на фоне глубокого многокомпонентного цитокинового дефицита (IFNy, IL-2, IL-1 ß, TNFa, IL-12, IL-17, IL-6, IL-4, IL-10, IL-7, G-CSF, MIP-1ß). При этом также снижается эффективность последующего оплодотворения полученных яйцеклеток в культуре in vitro (Инд_Опл = 39 % vs 91 %, pu < 0,01). Полученные результаты свидетельствуют о важной роли ци- токинов в регуляции процесса созревания ооцитов в полноценные в количественном и качественном отношении яйцеклетки.

Определение нормы содержания цитокинов в плазме и сыворотке практически здоровых доноров крови Новосибирской области и Алтайского края

Т.Г. Рябичева, Н.А. Вараксин, Н.В. Тимофеева, М.Ю. Рукавишников ЗАО «Вектор-Бест», Кольцово, Новосибирская обл.

Для определения нормы содержания цитокинов в сыворотках и плазме по Новосибирской области и Алтайскому краю нами были исследованы случайные выборки от 80 до 400 образцов плазмы и сыворотки практически здоровых доноров крови представителей различных социальных групп в возрасте от 18 до 60 лет с отсутствием клинических проявлений грубой соматической патологии и отсутствием HBsAg, антител к ВИЧ, гепатитам B и C. Определение концентраций цитокинов проводили с использованием наборов ЗАО «Вектор- Бест» (г. Новосибирск) на основе «сэндвич»-метода твердофазного иммуноферментного анализа — TNFa (чувствительность — 2 пг/мл, 0 — 250 пг/мл); IFNy (чувствительность — 5 пг/мл, 0—2000 пг/мл); IL-4 (чувствительность —

пг/мл, 0 — 400 пг/мл; IL-8 (чувствительность — 2 пг/мл,

— 250 пг/мл); рецепторного антагониста IL-1 (чувствительность — 20 пг/мл,0 — 2500 пг/мл; IFNa (чувствительность — 10 пг/мл, 0 — 1000 пг/мл); аутоиммунных антител к IFNa (чувствительность — 2 нг/мл, 0—500 нг/мл). Определение антител к различным бактериальным, грибковым или паразитарным агентам проводили с использованием наборов ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск).

По всем цитокинам, кроме IL-8, различия в выборках по регионам меньше, чем сезонные колебания (повышенные значения для IFN и IL-4 в зимний и весенний периоды).

Для определения нормы по содержанию IL-8 были исследованы 223 образца сыворотки и плазмы доноров крови г. Новосибирска. Диапазон концентраций IL-8 составил 0—106 пг/мл, среднее — 2 пг/мл, в 95 % образцов концентрация этого интерлейкина не превысила 30 пг/мл. Совсем другую картину распределения значений концентраций IL-8 наблюдали для Алтайского края. Диапазон концентраций IL-8 составил 0—353 пг/мл, среднее — 143 пг/мл. Как выяснилось, во всех образцах с содержанием IL-8 выше 30 пг/мл обнаружены антитела к различным бактериальным, грибковым или паразитарным агентам, таким как: Toxoplasma gondii, Chlamydia trachomatis, Mycobacterium tuberculosis, Candida, Aspergillus, Opisthorchis felineus, Lamblia, Echinococcus granulosus, Toxocara canis, Helicobacter pylori. Необходимо отметить, что у большинства зараженных доноров обнаружены сочетанные инвазии.

На основании полученных данных для обследованных регионов можно установить следующие нормы содержания ци- токинов в плазме и сыворотке практически здоровых доноров крови: IL-4 — 0-20 пг/мл, IFNy — 0-25 пг/мл, TNFa —

2,5 пг/мл, IL-8 — 0-30 пг/мл, IFNa — 0-20 пг/мл, IL-1Ra —1000 пг/мл, антитела к IFNa — 0-15 нг/мл.

Сопряженность уровня цитокинов в сыворотке с нейрофизиологическими показателями у здоровых людей

И.Г. Соловьева, В.В. Абрамов, С.В. Труфакин,

В.И. Коненков, А.А. Останин, В.А. Козлов ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

Известны данные о сопряженности нейрофизиологических показателей с параметрами иммунной системы и течением различных заболеваний. В тоже время механизмы указанного сопряжения исследованы недостаточно. В связи с этим, целью настоящей работы является изучение ассоциированности между уровнем цитокинов в сыворотке и нейрофизиологическими параметрами.

Обследовано 16 здоровых добровольцев (37,5 % мужчины и 62,5 % женщины, средний возраст — 38,3 ± 2,4 года). Уровень сывороточных цитокинов (IL-1 р, TNFa, INF y, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, G-CSF, GM-CSF, MIP-1p) определяли методом проточной флюорометрии на 2-лучевом лазерном автоматизированном анализаторе (Bio-Plex Protein Assay System, Bio-Rad, USA) с использованием коммерческих тест-систем 17-Plex. Функциональную асимметрию головного мозга тестировали по четырем парным функциям с помощью опросного метода и функциональных проб (Н.И. Брагина, Т.А. Доброхотова, 1988; В.П. Леутин, Е.И. Николаева, 1988). Параметры вегетативной регуляции определяли методом кардиоинтервалографии с использованием временного и спектрального анализа ритма сердца («Поли-Спектр-Ритм», «НейроСофт», г. Иваново).

При исследовании сопряженности уровня цитокинов в сыворотке с параметрами функциональной межполушарной асимметрии головного мозга показано, что в группе правшей уровень IL-4 достоверно выше, чем в группе амбидекстров (1,6 ± 0,5 и 0,20 ± 0,0, соответственно, p = 0,03). При изучении влияния параметров вегетативной регуляции СР на уровень сывороточных цитокинов получена прямая корреляционная зависимость между параметрами, характеризующими активность парасимпатического отдела ВНС (SDNN, RMSS, TP, HFnu), и содержанием в периферической крови провос- палительных цитокинов TNFa, IL-2, IL-13. В тоже время, показано, что сдвиг симпато-парасимпатического баланса в направлении симпатотонии (LF/HF > 1) сопровождается снижением уровня TNFa до 7,1 ± 2,4 в сравнении с оппозитной группой — 22,7 ± 7,7 (р = 0,03). Кроме того, у обследуемых с высокой надсегментарной симпатической активностью регистрируется достоверно более высокий сывороточный уровень IL-10 в сравнении с группой с низким уровнем указанной активности (6,3 ± 1,6 и 3,5 ± 0,4, соответственно, р = 0,04). Таким образом, в настоящем исследовании показано, что уровень сывороточных цитокинов сопряжен с разными уровнями регуляции в организме, в частности, с параметрами функциональной асимметрии полушарий головного мозга и параметрами вегетативной регуляции, а именно, изменение сим- пато-парасимпатического баланса сопровождается определенным сдвигами в сывороточном уровне про- и противовоспалительных цитокинов.

Роль цитокинов в регуляции функциональной активности эндокринной системы детей с тимомегалией

Б.Т. Халматова Первый Ташкентский государственный медицинский институт, Узбекистан

На уровне организма цитокины осуществляют связь между иммунной, эндокринной и другими системами и служат для их вовлечения в организацию и регуляцию единой защитной реакции.

Целью настоящего исследования явилось сопоставление данных IFNy и IL-4 детей с тимомегалией (ТМ), переносящих острую бронхолегочную патологию с концентрацией в крови кортизола и тироксина.


Изучали сравнительное содержание IL-4 в сыворотке крови у 20 детей: при пневмонии (n = 10) и остром обструктивном бронхите (n = 10). Уровень сывороточного IFNy определялся у 22 детей: при пневмонии (n = 13) и остром обструктивном бронхите (ООБ) (n = 9). Количественное определение цито- кинов IL-4 и IFNy в сыворотке крови проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью наборов производства ООО «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург). У 50 детей проведено определение кортизола (КЛ) и тироксина (Т4) в сыворотке крови иммуноферментным методом с помощью тест наборов «HUMAN ELISA» («HUMAN», Германия). Концентрацию того или иного гормона сопоставляли с величиной цитокинов в том же образце крови. Контрольную группу составили 10 условно здоровых детей аналогичного возраста. Детям с ТМ после обследования проводилась иммунокоррекция препаратами Кипферон (суппозитории) и Вобэн- зим. Проведен корреляционный анализ. Достоверность различия оценивали с помощью парного t-критерия Стьюдента.

В результате проведенных исследований было установлено, что имеются достоверные различия уровня синтеза

IL-4 при пневмонии и ООБ. У детей с пневмонией отмечено повышение синтеза IL-4 (10,3 ± 2,1 %), тогда как при ООБ — его снижение (5,05 ± 1,8 %). Напротив, у основной части обследованных выявлено повышение синтеза INFy. У 88,0 % детей с ООБ уровень IFNy превышал значения контроля в 2,2 раза (p < 0,05), а у 80,0 % детей с пневмонией в 1,3 раза (p < 0,001). Изучение уровня КЛ показало его резкое снижение у всех обследованных детей (p < 0,05). Уровень Т4 лишь в 12 % случаев соответствовал контрольным значениям, а у 64 % детей был ниже чем в контроле (p < 0,05). Изучение корреляционных связей выявило, что до лечения имеется обратная корреляция между КЛ и IFNy (r = —0,40) и слабо положительная между Т4 и IFNy (r = 0,39). После проведенного лечения наблюдалось изменение направленности корреляционных взаимосвязей: положительная корреляция между КЛ и IL-4 (r = 0,43).

Таким образом, полученные результаты позволяют делать вывод о взаимосвязи цитокинов и выработки гормонов, а также их участии в патогенезе острых бронхолегочных заболеваний у детей с тимомегалией.



загрузка...