Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»;
ЗАО «Вектор-Бест», наукоград Кольцово, Новосибирская обл.
ВИЧ-инфекция и собственно СПИД характеризуются, в первую очередь, поражением иммунокомпетентных клеток и глубоким иммунодефицитом. В патогенезе ВИЧ-инфекции и СПИД дисбаланс цитокинов, продуцируемых Th1 и Th2 лимфоцитами и моноцитами, занимает центральное место, оказывая влияние на силу ответа иммунной системы на специфические антигены вируса. Цитокиновая сеть задействована практически на всех этапах взаимодействия вирус—клетка, распространения ВИЧ-1/2 в макроорганизме, формирования иммунодефицита и, как следствие, развитии оппортунистических инфекций. Стремительный рост числа ВИЧ-инфицированных в мире и в России стимулирует поиск эффективных лекарственных препаратов и оптимизацию протоколов лечения больных СПИД. Совместное применение некоторых цитокинов, например IL-1, IL-2, IL-7 и IL-12 с антиретровирусными препаратами рекомендуется для лечения. Вместе с тем известно, что применение IFN может заметно увеличивать количество CCR5 рецепторов на клетках, которые являются мишенями ВИЧ-1/2. С другой стороны, TNFa, IL-1 р, и IL-6 могут способствовать репликации ВИЧ, повышая экспрессию регуляторных генов вируса.
Основной целью работы явилось сравнительное изучение спектра и уровня цитокинов, вырабатываемых клетками пер- миссивной культуры лимфобластоидных клеток человека МТ-4 при острой инфекции ВИЧ-1, а также ФГА-стимули- рованными лимфоцитами периферической крови здоровых доноров при острой инфекции ВИЧ-1 и при воздействии на них анти-ВИЧ препаратов: RANTES и AMD-3100 (антагонистов хемокиновых корецепторов ВИЧ-1 CCR5 и СxCR4).
Цитокины IL-4, IL-8, IL-1RA, TNFa, IFNy, IFNa определяли в культуральной среде в динамике инфицирования вирусом и обработке селективными по корецепторам ВИЧ химиопрепаратами — RANTES и AMD-3100. Для анализа ци- токинов использовали иммуноферментные тест-системы производства ЗАО «Вектор-Бест» (Кольцово, Новосибирская обл.). Тестирование образцов на содержание исследуемых цитокинов проводили в соответствии с инструкцией к набору.
Уровень наработки цитокинов, определяемый в пермис- сивной культуре лимфобластоидных клеток МТ-4, при инфекции ВИЧ-1 был значительно ниже, чем в первичной культуре донорских лимфоцитов. Культура моноцитарных клеток здоровых доноров при ВИЧ-инфекции отвечала возрастанием наработки IL-4, TNFa и IFNy, в то время как уровни IL-8, IL-1RA и IFNa при острой литической инфекции ВИЧ-
заметно снижались. Наблюдались индивидуальные различия по уровню наработки IFNa в ответ на вирусную инфекцию в лимфоцитах, выделенных от разных доноров. Интересно отметить, что в присутствии анти-ВИЧ препарата AMD-3100 — антагониста хемокинового корецептора ВИЧ CxCR4 уровень IFNa существенно возрастал, что коррелировало с защитой клеток от инфекции. В тоже время уровни IL-8 и рецепторного антагониста IL-1RA значительно возрастали как при ответе на ФГА стимуляцию, так и в присутствии обоих препаратов-антагонистов CCR5 и CxCR4 хе- мокиновых рецепторов (RANTES и AMD-3100), не коррелируя с уровнем протективности клеток от ВИЧ-инфекции. По нашему мнению, необходимо не только определять интер- фероновый статус у ВИЧ-инфицированных пациентов при
назначении и выборе оптимальной схемы лечения, но также экспериментально оценивать индивидуальную цитокиновую реакцию лимфоцитов в ответ на вирусную инфекцию и специфические модуляторы иммунного ответа.
Новосибирский НИИ туберкулеза МЗ РФ, г. Новосибирск
Одним из решающих компонентов в борьбе с туберкулезной инфекцией является способность макрофагов и моноцитов вырабатывать провоспалительные цитокины, в частности TNFa, опосредующий механизмы внутриклеточного кил- линга, микобактерии туберкулеза (МБТ) и защиты моноцитов от апоптоза. Известно, что уровень апоптоза в культуре моноцитов больных туберкулезом снижается при добавлении TNFa. Нейтрализация TNFa сопровождается повышением уровня спонтанного апоптоза в моноцитах, инфицированных микобактерией туберкулеза. Ранее мы показали, что у больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких, при нормальных показателях апоптоза и клеточного цикла процент моноцитов, продуцирующих TNFa, был ниже, чем у доноров.
Целью данной работы была оценка показателей апопто- за и клеточного цикла моноцитов, экспрессирующих и не экспрессирующих TNFa у больных инфильтративным туберкулезом легких до и после курса стандартной терапии. Контрольной группой служили условно здоровые доноры.
Моноциты периферической крови фиксировали, пермеаби- лизировали, инкубировали в растворе РНКазы, затем с моноклональными антителами против TNF, меченными флюоресце- ином, отмывали и хранили в фиксирующем растворе с внутриядерным красителем. Цитометрические исследования проводили с помощью проточного цитофлюориметра FACSCalibur.
У пациентов после курса лечения процент TNF-позитивных моноцитов повысился до величин, достоверно превышающих донорские. Уровень спонтанного апоптоза был достоверно ниже в популяции TNF-позитивных моноцитов, в отличие от популяции TNF-негативных моноцитов, как у больных, так и у доноров. При этом в группе доноров показатель фазы SM TNF-позитивных моноцитов был достоверно выше, чем в TNF-негативных моноцитах. У пациентов достоверного изменения этого показателя не было выявлено. В группе пациентов уровень апоптоза в TNF-позитивных моноцитах был достоверно выше, чем в группе доноров. В группе пациентов наблюдалась отрицательная корреляция между процентом моноцитов, продуцирующих TNFa, и их спонтанным апоптозом. Можно предположить, что продукция TNFa защищает моноциты от апоптоза.
С.В. Прохоренко, Е.Б. Гражданкин, Н.И. Косякова, И.Р. Прохоренко Больница Научного Центра РАН, Институт фундаментальных проблем биологии РАН, г. Пущино;
Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова
Проблема септического шока постоянно привлекает внимание хирургов, т.к. гнойно-септические заболевания и осложнения до настоящего времени сохраняют одно из ведущих мест в структуре летальных случаев в послеоперационном периоде.
Целью настоящего исследования стало изучение уровня цитокинов у больных с хирургическим сепсисом через 3 месяца после выписки из стационара.
Под динамическим наблюдением находилось 13 больных с тяжелым хирургическим сепсисом. Средний возраст составил 47,6 ± 3,5 лет. Диагноз сепсиса был верифицирован в соответствии с рекомендациями Чикагской согласительной конференции. Все больные имели очаг инфекции, клинические проявления синдрома системного воспалительного ответа (SIRS), полиорганную недостаточность (ПОН). По степени выраженности нарушения гемодинамики и полиорганной недостаточности больные были распределены на 2 группы. 1-я группа (n = 8) имела средний балл тяжести ПОН — 7,1 ± 1,2 и нестабильные показатели гемодинамики. 2-я группа (n = 5) имела средний балл тяжести ПОН — 5,4 ± 0,9 и стабильные показатели гемодинамики. Оценку тяжести ПОН проводили по шкале SOFA. Все больные получали интенсивную комплексную терапию. Количественное определение уровня ци- токинов (IL-1 р, TNFa, IFNy, IL-6, IL-1Ra) проводили в динамике методом ИФА с использованием тест систем ООО «Цитокин» до начала лечения, через неделю от начала лечения и через 3 месяца после выписки из стационара (в среднем через 98,5 ± 7,6 дня). Сравнительный анализ показателей уровня цитокинов у больных с сепсисом и доноров выявил наличие у больных выраженного дисбаланса в ци- токиновом статусе: высокие значения IL-6, TNFa и IL-1 р и низкие показатели IFNy и IL-1Ra. Наиболее выраженные изменения наблюдались у пациентов 1-й группы наблюдения. Через 3 месяца после завершения курса лечения у пациентов 1-й группы продолжала сохраняться высокая активность провоспалительных цитокинов. Было также установлено, что в эти же сроки продукция индуцированных противовоспалительных цитокинов у больных 1-й и 2-й групп оставалась существенно сниженной, что свидетельствовало не только о дисбалансе в системе цитокино- вого статуса, но и выраженной иммуносупрессии. Все это требует изменения тактики наблюдения за больными, перенесшими сепсис, и разработки программ ранней комплексной иммунореабилитации.
И.О. Наследникова, О.Б. Жукова, Ю.В. Миноченко, Е.А. Пигузова ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет МЗ РФ», г. Томск
Состояние иммунной системы организма является одним из ведущих аспектов в патогенезе вирусных инфекций. Определяющую роль в противовирусной резистентности организма играют изменения функционального статуса, цитокин- продуцирующей способности и состояния рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток. В настоящее время выявлены значительные изменения системы цитокинов при различных вирусных инфекциях, однако до сих пор не оценена их роль в механизмах формирования длительного носитель- ства вируса клещевого энцефалита (КЭ), что и стало предметом настоящего исследования.
Исследовано 35 пациентов с длительной (более 6 мес.) ан- тигенемией вируса КЭ: 17 пациентов с остаточной клинической симптоматикой; 18 — с длительной бессимптомной пер- систенцией антигена вируса КЭ (субклиническая форма КЭ). Контрольную группу составили 20 здоровых доноров, сопоставимых по полу и возрасту. Содержание CD3+, CD4+, CD8+, CD22+, CD56+, и CD95+-клеток оценивалось иммуноцитохими- ческим методом, продукция мононуклеарами IL-2, IL-4, IL-10, IL-12, IFNy, TNFa, sTNFaRI — методом ИФА («Cytimmune», USA; «Procon», Россия), экспрессия мембраносвязанных рецепторов (IL-2R, IL-4R, IL-10R, IFNyR, TNFaRI) — методом ПЦР («^altag», USA) на проточном цитометре Epics XL («Beckman Coulter», USA).
При хроническом течении КЭ нами выявлены повышение содержания CD8+, CD56+ и CD95+-клеток, дефект Т-звена иммунитета. Цитокиновый статус мононуклеарных лейкоцитов характеризовался увеличением конституциональной и индуцированной FGA способности клеток продуцировать IFNy, IL-4, снижением синтеза IL-10, IL-12, TNFa in vitro. У пациентов с хроническим носительством вируса КЭ снижение продукции TNFa мононуклеарами крови положитель
но коррелирует с увеличением содержания sTNFaRI и изменением экспрессии мембранных форм рецепторов IL-2, IL-4, IL-10, IFNy, TNFa.
Таким образом, угнетение Т-клеточного звена иммунной системы, модуляция межклеточной кооперации клеток, выражающаяся в дисбалансе продукции цитокинов с про- (TNFa, IL-2, IL-12) и противовоспалительной (IL-4, IL-10) функциями и экспрессии соответствующих рецепторов мононуклеар- ными лейкоцитами крови, являются факторами, способствующими формированию механизмов иммунопатогенеза длительной персистенции вируса клещевого энцефалита.
Н.В. Пронкина, С.Д. Никонов, О.А. Жданов, А.А. Останин, Е.Р. Черных ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск
CD14+CD16+-клетки представляют минорную субпопуляцию моноцитов периферической крови. Данная субпопуляция, характеризующаяся у здоровых доноров провоспалительной активностью, существенно возрастает при многих инфекционно-воспалительных заболеваниях. Настоящая работа посвящена исследованию CD14+CD16+-моноцитов у больных туберкулезом легких (ТЛ) и их возможной роли в нарушении антигенспецифического ответа. Установлено, что у больных ТЛ выявляется 2-кратное увеличение относительного содержания CD14+CD16+-моноцитов. Повышенное содержание данной субпопуляции сопряжено со снижением доли моноцитов с внутриклеточной экспрессией TNFa. Причем между количеством CD14+CD16+-клеток и долей моноцитов с внутриклеточным TNFa обнаружена обратная корреляционная зависимость. Напротив, увеличение субпопуляции CD14+CD16+-клеток ассоциировано с увеличением доли моноцитов с внутриклеточной экспрессией IL-10. Установлено, что моноциты с внутриклеточной экспрессией IL-10 сосредоточены преимущественно в популяции CD16+-клеток, что свидетельствует о возможной супрессорной активности CD14+CD16+-моноцитов. Выраженное угнетение ответа моно- нуклеарных клеток на PPD (туберкулиновый очищенный белковый дериват) регистрируется приблизительно у 40 % больных ТЛ. Чтобы выяснить возможную взаимосвязь между дефектом Т-клеточного ответа и популяцией CD14+CD16+-мо- ноцитов, было проведено сравнительное исследование относительного содержания CD14+CD16+-клеток у пациентов с сохранным и сниженным PPD-ответом. Больные со сниженным пролиферативным ответом на PPD характеризовались также более низким уровнем PPD-стимулированной продукции INFy, что указывает на дефект ТЫ-клеток. Относительное содержание CD14+CD16+-моноцитов у больных в этой группе было достоверно выше, чем у больных с сохранным ответом на PPD (21,4 ± 2,4 и 15,4 ± 1,0 %, соответственно; p < 0,05). Частота больных с повышенным уровнем CD14+CD16+-моноцитов (> 17 %) в группе анергичных пациентов более чем в 2 раза превышала аналогичный показатель в группе PPD-реактивных больных. Таким образом, увеличение относительного содержания CD14+CD16+-моноцитов у больных ТЛ ассоциировано с угнетением ТЫ-антигенспецифического ответа.
В.В. Романов3, В.С. Кожевников1 1 ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск; 2 Новосибирский Государственный Университет; 3 Новосибирский НИИ туберкулеза МЗ РФ
Одним из основных механизмов устойчивости организма к туберкулезной инфекции считается внутриклеточный кил- линг микобактерий туберкулеза (МБТ) альвеолярными макрофагами. Моноциты, экспрессирующие костимуляторные CD80 молекулы, преимущественно активируют Т-лимфоци- ты I типа (Т1). Т1-клетки определяют формирование эффективного иммунного ответа против МБТ, поскольку продуцируемый ими IFNy усиливает киллинг МБТ макрофагами. Поляризация Т-клеточного баланса в направлении Т1-клеток соответствует положительной динамике клинического течения заболевания, а в направлении Т2 — отрицательной.
Целью данной работы было определение Т-клеточного баланса и оценка относительного количества моноцитов, экспрессирующих CD80 и CD86 костимуляторные молекулы, у больных с впервые выявленным туберкулезом легких. Для этого методами ПЦР было проведено определение экспрессии внутриклеточных цитокинов (IFNy, IL-4) CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитами, а также поверхностных CD80+ и CD86+ молекул моноцитами периферической крови больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких. Контрольной группой служили условно здоровые доноры.
У больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких было показано достоверное снижение относительного количества Th1-, Th0- и Тс1-клеток в периферической крови. Эти изменения были характерны для открытой формы заболевания, тогда как у больных, не выделяющих M. tuberculosis, был снижен только процент CD4+ Т-лимфоцитов, продуцирующих IFNy. Редукция Т1-ответа не сопровождалась усилением Т2-ответа. Кроме того, у больных было отмечено значительное снижение количества CD80-экспрессирующих моноцитов (CD80+, CD80+CD86+). Полученные данные свидетельствуют о нарушении функциональной активности Т-клеточного и моноцитарного звеньев иммунитета у больных туберкулезом легких.
Л.П. Сизякина, Ю.В. Соколова, Г.М. Перелыгина, Е.А. Чумакова НУПК «Клиническая иммунология», Ростовский государственный медицинский университет, г. Ростов-на-Дону
Цель исследования — изучение особенностей интерферо- нового статуса на различных стадиях ВИЧ-инфекции.
Представлены данные, полученные при клинико-иммунологическом наблюдении 43 пациентов, инфицированных субтипом А ВИЧ, в возрасте 25-40 лет, в различные стадии ВИЧ-инфекции. Помимо традиционных методов оценки иммунного статуса была проведена комплексная оценка интерферонового статуса с использованием определения содержания IFNy в сыворотке крови; спонтанной продукции цитокинов МНПК в культуре; индуцированной продукции цитокинов в супернатанте МНПК, стимулированных ФГА. Также было проведено определение с помощью ПЦР количества CD119+-лимфоцитов для оценки рецепции к IFNy.
В стадии ГЛАП уровень IFNy в сыворотке крови был выше (99,2 ± 31,6 пг/мл), чем у доноров (18,3 ± 2,7 пг/мл). Существенных изменений в спонтанной и индуцированной продукции IFNy in vitro в стадии ГЛАП по сравнению с донорами выявлено не было (индуцированная: 1929,3 ± 136,1 пг/мл и 2112,4 ± 105,3 пг/мл; спонтанная: 118,6 ± 10,5 и 102,2 ± 8,6, соответственно). Количество CD119+-лимфоцитов составляло 13,9 ± 2,7 %, по сравнению с 15,6 ± 1,9 % у доноров. В стадии преСПИД при развитии вторичных заболеваний с генерализацией процесса отмечалось угнетение индуцированной продукции IFNy (1065,3 ± 128,2 пг/мл), что сопровождалось некоторым ростом его спонтанной продукции (136,1 ± 6,0 пг/мл). При этом концентрация IFNy в сыворотке крови оставалась без изменений (98,3 ± 10,4 пг/мл). Количество CD119+-лим- фоцитов составило 18,5 ± 1,2 %. Переход в стадию СПИД отмечался еще более выраженным снижением индуцированной продукции IFNy (737,4 ± 61,5 пг/мл). При этом концентрация IFNy в сыворотке крови составила 107,7 ± 37,9 пг/мл, а его спонтанная продукция — 149,7 ± 16,0 пг/мл. Количество CD119+-лимфоцитов оставалось без изменений — 16,9 ± 1,3 %.
Представляет интерес снижение индекса стимуляции IFNy с развитием заболевания (до 6,2 ± 3,1 в стадии СПИД).
Полученные результаты свидетельствуют об иммуносупрессии интерферонового статуса, усугубляющейся по мере прогрессирования заболевания и являющейся одним из патогенетических механизмов формирования генерализации персистирующих вирусных инфекций.
В.А. Козлов2, Н.Н. Филонова1 1ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, г. Красноярск;
2ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск
Целью работы явилось изучение концентрации IL-2, IL-4, IL-6, IFNy в сыворотке крови и другие показатели иммунного статуса при респираторной атопии и псевдоатопии.
Обследовано 23 больных астматической триадой (АТ), 30 — атопической бронхиальной астмой в сочетании с аллергическим ринитом — (АБАР) и 20 практически здоровых лиц, в возрасте от 18 до 62 лет. Концентрацию цитокинов определяли иммуноферментным анализом в сыворотке крови. Исследованы показатели клеточного (популяционный и субпо- пуляционный состав лимфоцитов) и гуморального (общие иммуноглобулины, циркулирующие иммунные комплексы) звеньев иммунитета.
Проведенные исследования показали особенности содержания цитокинов в сыворотке периферической крови в зависимости от клинико-патогенетического варианта респираторной аллергии. У атопиков в сыворотке крови увеличено, относительно контроля, содержание цитокинов IL-2, IL-4, IL-6, IFNy. Полученные результаты свидетельствуют об участии в развитии и проявлении атопии цитокинов, продуцируемых как Th1-, так и №2-лимфоцитами, при несомненном превалировании содержания цитокинов, вырабатываемых №2-клетка- ми. У больных АБАР обнаружено снижение уровня общего IgM, повышение концентрации общего IgE, повышение абсолютного содержания CD3+-, CD8+-лимфоцитов, относительной концентрации CD4+-лимфоцитов, а также абсолютной и относительной концентрации CD16+- и HLA-DR+^ле- ток в периферической крови. При АТ в сыворотке крови увеличена концентрация IL-2 и IFNy, что свидетельствует о преобладании провоспалительных цитокинов (IL-2, IFNy), преимущественно секретируемых ТЫ-лимфоцитами. Определены изменения показателей иммунного статуса: повышено содержание ЦИК, общих IgG и IgE, повышены абсолютные и относительные показатели HLA-DR+-клеток в периферической крови (относительно контроля).
Таким образом, для атопии характерно преобладание ци- токинов, продуцируемых Th2-, а для псевдоатопии — преимущественно ТЫ-лимфоцитами, что и определяет клинико-патогенетический вариант респираторной аллергии. В основе патогенеза АБАР превалирует реагиновый тип аллергической реакции, а при АТ наряду с классической псевдоаллергией, связанной с нарушением метаболизма арахидоновой кислоты, возможно участие антителозависимой цитотоксической гиперчувствительности и иммунокомплексных механизмов, что подтверждают показатели иммунного статуса.
Т.М. Соколова, Н.Е. Федорова, М.Г. Меджидова, А.А. Кущ, Л.В. Урываев ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, Москва
В культурах фибробластов человека, зараженных цито- мегаловирусом (штамм АД169), полуколичественным методом ОТ-ПЦР определены уровни транскрипции мРНК IFN-зависимых и апоптотических генов (IFNa, IFNp, IBNy, ферментов 2,5-олигоаденилатсинтетазы (2,5-ОАС), РНКазы L и дсРНК-протеинкиназы, Fas-антиген и Bcl-2), участвующих в клеточной защите от вирусной инфекции и регулирующих клеточную пролиферацию. Заражение цитомегаловирусом клеток, находящихся в фазах Go и S, приводило к выраженному росту активности 2,5-ОАС (до 1000 раз) и незначительной активации генов IFNp и IFNy (~ в 10 раз). Фибробласты человека в фазе S, в сравнении с клетками в фазе Go, характеризовались более высокими уровнями транскрипции IFN-зависимых мРНК: дс-ПК (в 1000 раз), Fas-антигена, IFNp, 2,5-ОАС, РНКазы L и гамма-актина (~ в 10 раз) и, наоборот, существенно сниженными уровнями транскрипции мРНК Bcl-2 (до 100 раз). Суперактивность группы антивирусных и проапоптотических генов коррелировала с задержкой на 24 ч репродукции CMV. Максимальное накопление очень ранних вирусных белков (IE 65 и IE 72) в клетках, зараженных в фазе Go, происходило к 6 — 12 ч, а в клетках, зараженных в фазе S — к 48 ч. Структурный вирусный белок gB выявлялся в 50 % клеток на Go-фибробластах с 12 ч инфекции, а на S-фиброблас- тах — только после 72 ч. Вирусные белки определяли методом ИФА с препаратами моноклональных антител. Продукция инфекционного вируса и развитие цитопатического действия в клетках также задерживались. В линиях фибробла- стов человека с высокой и низкой чувствительностью к CMV наблюдалась прямая корреляция уровней экспрессии гена ОАС1 с резистентностью клеток к вирусной инфекции.
ЦНИЛ Омской государственной медицинской академии, г. Омск
Одной из важнейших функций цитокинов является формирование и контроль развития защитных реакций организма при введении патогенов. В запуске и развитии реакций воспаления важную роль играют провоспалительные цито- кины, повышение уровня которых наблюдается при острых вирусных, бактериальных и паразитарных инфекциях; обострении ряда хронических заболеваний, причем временные параметры циркуляции цитокинов в крови строго определены. На самых ранних сроках развития заболеваний преобладает увеличение содержания IL-1, IL-8, затем IL-6 и TNFa. С целью изучения цитокинопосредованных механизмов развития воспаления нами проведена оценка уровня цитокинов, их прогностической ценности в ранней диагностике воспалительных заболеваний.
Обследовано 130 практически здоровых лиц в возрасте от
до 50 лет, среди которых 54 женщины и 76 мужчин без клинических проявлений грубой соматической патологии, аллергических реакций и указаний на перенесенные в течение года инфекции. Все они ретроспективно разделенных на 2 группы: практически здоровые и с появившимися после обследования клиническими признаками воспалительных заболеваний вирусной и бактериальной природы. Содержание цито- кинов: TNFa, IL-1 p, IL-1pRa, IL-6 и IL-8 определяли методом ИФА (тест-системы ООО «Протеиновый контур», Санкт-Петербург).
Анализ полученных данных позволил установить, что уровень IL-1 р у 66,2 % обследованных составил 28,2 ± 2,4 пг/мл, у 23 % лиц превысил данную норму в 6 раз (179,6 ± 17,3 пг/мл, р < 0,001), у 10,8 % — в 40 раз (1145,5 ± 248,9 пг/мл, р < 0,01). У лиц с высоким уровнем IL-1 р регистрируется 5—10-кратное увеличение содержания в крови IL-8 (р < 0,01). В последующем у категории лиц с повышенным на момент обследования уровнем цитокинов появились клинические признаки воспалительных заболеваний. Следует отметить, что при уровне IL-1 р, равном 28,2 ± 2,4 пг/мл, количество IL-1pRa составило 26,6 ± 9,4 пг/мл, при высоком содержании IL-1 р наблюдалось отсутствие IL-1pRa. Уровень TNFa у всех обследованных находился в пределах 4,2 ± 2,4 пг/мл, IL-6 —
± 1,8 пг/мл.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о наличии в популяции практически здоровых лиц группы риска (38,8 %) с ранними признаками воспаления, которые
проявляются высокой системной продукцией IL-1 в, IL-8, подавлением синтеза эндогенного ингибитора IL-1 в — IL-1eRa при отсутствии изменений уровней TNFa и IL-6.
Н.М. Старостина, С.В. Сенников, В.С. Ширинский ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск
Обследовано 22 больных простым герпесом (ПГ) с частыми рецидивами инфекции различной локализации в период обострения. Наряду со стандартными параметрами иммунограммы определялось содержание цитокинов в сыворотке крови методом электрохемилюминесценции.
Установлено, что у больных ПГ из провоспалительных цитокинов наибольшего увеличения достигало содержание IL-1 в в сыворотке крови, существенно повышен был и уровень TNFa , а концентрация IL-6 по средним величинам не отличалась от значений у здоровых людей. Содержание ци- токинов профиля Th1 (IL-2 и IFNy) также было повышено. Из №2-продуцируемых цитокинов в 5 раз выше нормы оказался уровень IL-10, а содержание IL-4 не превышало референтных значений.
Показаны различия в распределении частот повышенных уровней цитокинов среди больных со свежими герпетическими высыпаниями и больных, имеющих на момент обследования резидуальные явления высыпаний. Наиболее часто у пациентов со свежими высыпаниями определялись высокие уровни TNFa и IL-1 в, а IL-6 повышался позднее. Ни у одного больного в начальной стадии появления пузырьков не было зарегистрировано повышения содержания IFNy, но в 2 раза чаще встречалось увеличение концентрации IL-4. Частота повышения уровней IL-2 и IL-10 не зависела от стадии развития кожных проявлений, оно наблюдалось почти у половины всех больных ПГ.
Спонтанная пролиферация мононуклеарных клеток периферической крови была снижена на фоне высокого уровня IL-4, а КонА-стимулированная — резко угнетена при большом содержании IL-2 и IFNy. Обнаружено, что у больных со снижением эффекторных функций ГЗТ (у 57 %) был более чем в 20 раз ниже средний уровень IL-2, в 4 раза ниже — IFNy, почти в 5 раз — IL-1 в. Уровни провоспалительных цитокинов повышались содружественно, особенно IL-1 и IL-6. TNFa прямо коррелировал с сывороточными концентрациями TM-цитокинов, наиболее тесно — с IL-2. Уровни IL-2 и IFNy имели между собой высокую степень прямой связи, а IL-10 и IL-4 — среднюю степень обратной.
Выраженность клинических проявлений ПГ обнаружила статистически значимую корреляционную связь с уровнями цитокинов Th2, причем разнонаправленную: более тяжелая клиническая картина наблюдалась на фоне повышения содержания IL-10 и снижения IL-4.
Таким образом, выявлены особенности клинического течения ПГ, характеризующиеся различиями в балансе имму- норегуляторных цитокинов. В основе данных нарушений может лежать неадекватность клеточного ответа на цитоки- новые сигналы у больных с хронической вирусной инфекцией, вызывающая компенсаторное усиление продукции ключевых медиаторов.
М.И. Сабсай, И.А. Зворыгин Ижевская государственная медицинская академия
Исследования проводили на базе Первой республиканской клинической больницы г. Ижевска. Определяли цитоки- новый статус (IL-1 в, IL-6, TNFa) у 57 больных в возрасте от 20 до 50 лет с тубоовариальными абсцессами на фоне ВМК.
Все больные были разделены на 2 группы: наблюдения (30 пациенток) и сравнения (27 пациенток). После проведения хирургического лечения (экстирпации матки с пораженными придатками) в послеоперационном периоде все пациентки получали традиционную терапию (антибактериальную, дезин- токсикационную терапию; терапию, направленную на ликвидацию волемических и электролитных нарушений, ликвидацию обменных и метаболических расстройств, нормализацию функций жизненно важных органов и систем, коррекцию кишечного и вагинального биоценоза). Пациенткам группы наблюдения в послеоперационном периоде со 2-х суток на протяжении 5—7 дней проводили озонотерапию. Озонотерапия заключалась в ежедневном внутривенном капельном введении озонированного изотонического раствора хлорида натрия в количестве 200 мл с концентрацией озона 2—4 мг/л со скоростью 8—10 мл/мин. При поступлении в стационар концентрация IL-1 в, IL-6, TNFa в крови больных значительно превышала нормальные значения, что соответствовало разгару тяжелого деструктивного воспалительного процесса, и обусловливала комплекс характерных клинических симптомов. У больных группы наблюдения после курса озонотерапии наблюдалось достоверное повышение концентрации IL-1 в. Это отражало активацию макрофагальной активности и фагоцитоза в условиях озонотерапии. У больных группы сравнения концентрация IL-1 в снизилась. Наблюдалось быстрое и достоверное снижение концентрации IL-6 в крови у больных группы наблюдения на 8—9-е сутки послеоперационного периода, чего не отмечалось у больных группы сравнения.
Таким образом, в проведенном нами исследовании под действием озонотерапии отмечалось восстановление иммунологических показателей за счет увеличения концентрации в крови IL-1 в и нормализация цитокинового статуса за счет более быстрого снижения уровня провоспалительных цито- кинов (IL-6, TNFa).
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»,
ЗАО «Вектор-Бест», наукоград Кольцово, Новосибирская обл.
Злокачественные опухоли женской половой сферы по данным ВОЗ составляют 24 % всех опухолей у женщин, из которых до 20 % приходится на опухоли яичников. Увеличение заболеваемости и смертности от рака яичников наблюдается во многих странах, в частности в Сингапуре, Японии, Англии, Испании и России. Процент запущенных случаев рака яичника по статистике стран СНГ составляет 66—88 %. В большинстве случаев возраст больных не указывает на какую-либо возрастную инволюцию или неполноценность иммунной системы. Рост этой патологии в последнее десятилетие дает основание предполагать его связь с ухудшением экологии и, вероятно, с генетической предрасположенностью.
Целью исследований явилась сравнительная оценка ци- токинового профиля у больных раком яичника III стадии (при развитии мультирезистентности к химиотерапии) как исходного (спонтанная продукция лимфоцитами и в сыворотке крови), так и после использования иммуномодуляторов.
Для изучения цитокинового профиля использовали сыворотки крови больных и здоровых доноров, полученные по обычной методике, а также моноцитарную фракцию крови, выделенную из гепаринизированной крови больных в градиенте плотности фиколл-верографин (плотность 1,077 г/мл) методом Boyum (1968). В работе использовали иммунофер- ментные тест-системы производства ЗАО «Вектор-Бест» для определения TNFa, IFNa и IFNy, аутоиммунных антител к IFNa, IL-1Ra, IL-4 и IL-8. Эти системы обеспечивают количественное определение концентрации цитокинов в образцах сыворотки и биологических жидкостях в непрямом им- муноферментном анализе («сэндвич»-метод). Тестирование образцов на содержание исследуемых цитокинов проводили в соответствии с инструкцией к набору.
Результаты исследования показали, что уровни сывороточного IL-4 (51,1 пг/мл); IL-8 (13,6 пг/мл) и IFNa (61,4 пг/мл) при данной патологии превышали таковые в сыворотках крови здоровых доноров (0—20 пг/мл, 0 — 10 пг/мл и 5—45 пг/мл, соответственно). Уровень сывороточного IFNy (0 пг/мл) и IL-1Ra (591,3 пг/мл) не превышал уровня аналогичных значений у здоровых доноров (0—25 пг/мл, 50—1000 пг/мл, соответственно). При этом следует отметить, что в сыворотке крови выявлено наличие аутоантител к лейкоцитарному интерферону, а значения TNFa определялись на минимальном нормативном значении 0 пг/мл. После 10-дневного курса пе- рорального применения пробиотического иммуномодулятора на основе штамма B. subtilis в сыворотке крови больных наблюдали заметное снижение показателей IL-4 (до 1,7 пг/мл), IL-8 (до 0 пг/мл) и IFNa (до 7,5 пг/мл) до нормативных показателей. В тоже время концентрации TNFa и IFNy после приема пробиотика оставались неизменными — 0 пг/мл. Немаловажно, что после приема данного иммуномодулирующего препарата в сыворотке крови пациентов с раком яичников резко возрастало количество IL-1Ra (1167 пг/мл), что превышало аналогичные показатели здоровых доноров (1000 пг/мл). Через 10 дней после приема препарата также отмечалось снижение титров антител к IFNa. Уровни TNFa у здоровых доноров, принимающих этот препарат по той же схеме, возрастали в несколько раз (7 — 10-кратно) на 3—7-й день исследований.
В заключение следует отметить, что цитокиновый профиль сыворотки крови является информативным показателем состояния иммунореактивности пациентов с раком яичника и открывает возможности для целенаправленного применения специфических и неспецифических иммуномодуляторов с целью поддержания иммунного статуса пациентов и повышения качества жизни.
Особенности концентрации IL-2, IL-4, IL-8 и TNFa в мокроте при бронхиальной астме и хроническом бронхите
Н.Н. Филонова12, С.В. Смирнова2, Л.И. Волкова3,
С.Г. Кадричева2, Л.В. Зенкина2, Г.П. Быкова1
МСЧ-81, г. Железногорск; 2 ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, г. Красноярск; 3 Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Целью работы явилось изучение особенностей содержания IL-2, IL-4, IL-8 и TNFa в индуцированной мокроте больных атопической бронхиальной астмой (АБА) и хроническим обструк- тивным бронхитом (ХОБ) в стадии обострения и ремиссии.
Было обследовано 19 больных АБА и 25 — ХОБ в возрасте от 18 до 60 лет. Индуцированную мокроту собирали после ингаляции 3—5 %-ным раствором NaCl через ультразвуковой небулайзер в течение 5—7 минут. Концентрацию цито- кинов в индуцированной мокроте определяли методом твердофазного ИФА реактивами «Cytimmun» (USA). Статистическую обработку результатов проводили при помощи пакета прикладных программ «SPSS 10.0» с использованием непараметрического критерия Манна—Уитни.
Проведенные исследования показали особенности содержания цитокинов в индуцированной мокроте в зависимости как от патологического процесса в бронхах, так и от стадии заболевания. При обострении АБА повышается, относительно ремиссии, уровень IL-2 и TNFa. Тогда как при обострении ХОБ отмечается повышение, относительно ремиссии, содержания IL-8 и уровня IL-4, снижение — TNFa. Сравнительный анализ концентрации цитокинов в мокроте при АБА и ХОБ выявил некоторые особенности. Обострение АБА сопровождается повышением уровней IL-2 и TNFa, снижением IL-4 и IL-8, относительно обострения ХОБ. Тогда как во время ремиссии АБА отмечено повышение концентрации IL-4 и снижение — TNFa, относительно ремиссии ХОБ.
Таким образом, профиль цитокинов в индуцированной мокроте характеризует особенности патогенеза АБА и ХОБ. Так, в патогенезе ХОБ воспаление регулируется путем секреции нейтрофилами TNFa, IL-8. При воспалении, сопровождающем АБА, TNFa контролирует степень инфильтрации стенки бронхов нейтрофильными гранулоцитами, которые участвуют в регуляции экспрессии молекул адгезии, ответственных за избирательную адгезию эозинофилов.
Концентрация IL-2, IL-4, IL-8 и TNFa в сыворотке крови при бронхиальной астме и хроническом бронхите
Н.Н. Филонова1, С.В. Смирнова2, Л.И. Волкова3,
С.Г. Кадричева2, Л.В. Зенкина2
1 МСЧ-81, г. Железногорск; 2 ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, г. Красноярск; 3 Сибирский медицинский университет, г. Томск
Целью работы стало изучение концентрации IL-2, IL-4, IL-8 и TNFa в сыворотке крови больных атопической бронхиальной астмой (АБА) и хроническим обструктивным бронхитом (ХОБ) в стадии обострения и ремиссии.
Было обследовано 68 больных АБА, 25 — ХОБ и 14 практически здоровых лиц, в возрасте от 18 до 60 лет. Концентрацию цитокинов в сыворотке крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа реактивами «Cytimmune» (USA). Статистическую обработку результатов проводили при помощи пакета прикладных программ «SPSS 10.0» с использованием непараметрического критерия Манна—Уитни.
Обострение АБА сопровождалось повышением концентрации IL-2 и TNFa в сыворотке периферической крови, относительно контроля. Тогда как при обострении ХОБ было отмечено снижение IL-4 и повышение IL-2, относительно контроля. Сравнительный анализ групп больных показал, что уровень IL-4 при обострении АБА достоверно выше, чем при обострении ХОБ. В стадии ремиссии АБА нормализовались концентрации IL-2 и TNFa, тогда как уровень IL-4 достоверно снижался, относительно обострения. Изучение содержания цитокинов в сыворотке крови в стадии ремиссии ХОБ показало снижение уровней IL-4, IL-8 и TNFa, относительно обострения, тогда как сохранялась повышенная концентрация IL-2, относительно контроля.
Таким образом, определены особенности профиля цито- кинов, регулирующих воспалительный процесс, в зависимости от характера воспаления при АБА и ХОБ.
Динамика цитокинов у потомков (второе поколение) лиц, находившихся на следе ядерного взрыва на Семипалатинском полигоне после иммуноориентированной терапии
С.В. Сенников, И.Б. Колядо 1 Алтайский государственный медицинский институт, г. Барнаул;
ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск;
ГУ НИИРМЭП, г. Новосибирск
В ряде исследований был убедительно показан рост иммунопатологических состояний у потомков (второе поколение) жителей Алтайского края, подвергшихся радиационному воздействию, сопровождающемуся изменениями в уровне продукции основных цитокинов.
В связи с этим целью настоящего исследования было как клиническое обследование потомков второго поколения лиц, подвергшихся радиационному воздействию в результате деятельности Семипалатинского полигона, страдающих рецидивирующими, хроническими инфекционно-воспалительными заболеваниями системы органов дыхания, так и изучение динамики системы цитокинов в процессе иммуноориентирован- ной терапии.
Проведенное клиническое обследование 103 детей 7—12 лет, являющихся потомками второго поколения облученных лиц на следе ядерного взрыва 29 августа 1949 г., выявило хроническую инфекционно-воспалительную патологию системы органов дыхания у 92 (89,7 %) детей (хронический тонзиллит, аденоиды, хронический аденоидит, рецидивирующий бронхит). Хроническая политопная инфекция (2 и более очагов) отме
чена у 38 (36,9 %) детей. У 37 (35,9 %) больных хронические инфекционно-воспалительные заболевания системы органов дыхания были ассоциированы с функциональной соматической патологией (синдром вегетативной дистонии, дискинети- ческие расстройства желудочно-кишечного тракта и др.). Изолированное воспалительное поражение верхних дыхательных путей отмечено у 16 (15,5%) детей, анемия (уровень гемоглобина меньше 110 г/л) у 21 (20,4%) ребенка. Кроме того, учитывалось общее число рецидивов инфекционно-воспалительных заболеваний верхних и нижних дыхательных путей в течение 1 года, предшествовавшего иммуноориентированной терапии.
Из обследованных детей были сформированы 3 группы пациентов (86 чел.), страдающих рецидивирующими, хроническими воспалительными заболеваниями системы органов дыхания, ассоциированных с дисрегуляторными изменениями в системе про- и противовоспалительных цитокинов.
Клинический и лабораторный катамнез после 3 проведенных курсов адресной иммунореабилитации удалось собрать у 44 чел. — потомков (второе поколение) лиц, находившихся на следе ядерного взрыва.
Общее число рецидивов до иммунореабилитации у 44 больных составило 462 эпизода. На одного ребенка в среднем пришлось 10,5 эпизодов.
Повторно отмечали общее число рецидивов инфекционно-воспалительных заболеваний системы органов дыхания в течение года после окончания иммунокорригирующей терапии, оно составило 93 эпизода за год. На 1 ребенка в среднем пришлось 2,1 эпизодов за год.
Таким образом, у потомков второго поколения лиц, находившихся на следе ядерного взрыва на Семипалатинском полигоне, наблюдается увеличение частоты встречаемости хронических воспалительных заболеваний системы органов дыхания; рецидивирующие, хронические воспалительные заболевания системы органов дыхания у них сопряжены с изменениями в системе иммунорегуляторных цитокинов. После проведения дифференцированной иммунореабилитации отмечено клиническое улучшение состояния детей, выразившееся в уменьшении общего числа рецидивов заболеваний верхних и нижних дыхательных путей в 5 раз и положительной динамикой иммунорегуляторных цитокинов.
Н.М. Пасман, Е.Р. Черных ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН; МДСБ № 5, г. Новосибирск
Поддержание гестационной иммуносупрессии обеспечивается различными механизмами, среди которых наименее исследованными остаются минорные субпопуляции Т-клеток и моноцитов с регуляторной активностью. Между тем известно, что естественные супрессорные Т-клетки (СВ4+СБ25+) играют важную роль в ингибировании ответа на аллоантигены и могут подавлять трансплантационные реакции. Поэтому данная субпопуляция лимфоцитов может иметь большое значение в развитии толерантности к аллоантигенам плода. Большой интерес также представляет минорная субпопуляция моноцитов (СБ14+СБ16+), которые в зависимости от особенностей активации могут обладать как про-, так и противовоспалительной активностью. Учитывая отсутствие данных о содержании указанных популяций клеток при беременности, мы исследовали количественное содержание СБ14+СБ16+-моноцитов и СБ4+СБ25+ Т-клеток в периферической крови женщин с физиологическим и осложненным ге- стозом течением беременности.
В исследование были включены 24 здоровые беременные и 25 женщин с осложненным в III триместре течением беременности, из них у 17 регистрировался гестоз тяжелой степени или преэклампсия. Определение СВ14+СВ16+-моноцитов и СБ4+СБ25+ Т-клеток проводили методом ПЦР. Исследования показали, что при физиологическом течении беременности содержание CD14+CD16+-моноцитов не увеличивается по сравнению с показателями у небеременных женщин. Напротив, развитие гестоза сопровождается увеличением количества CD14+CD16+-моноцитов (10,5 ± 1,6 vs 20,6 ± 3,2 %, p < 0,01). При этом между количеством моноцитов и степенью тяжести гестоза выявляется прямая корреляционная связь (r = 0,39, p < 0,05). Иная тенденция прослеживается при анализе количества CD4+CD25+ Т-клеток в зависимости от характера течения беременности. Так, содержание CD4+CD25+ Т-лимфоцитов у здоровых беременных возрастает в 3 раза по сравнению с показателями у небеременных женщин. Напротив, у женщин с гестозами их количество не превышает аналогичные показатели у небеременных женщин и в 2 раза ниже, чем при физиологической беременности (10,2 ± 1,2 vs 4,7 ± 1,9 %, p < 0,01). Таким образом, по сравнению с физиологической беременностью развитие гестоза сопряжено со снижением в периферической циркуляции регуляторных CD4+CD25+ Т-клеток и увеличением содержания CD14+CD16+-моноцитов.
Т.В. Хоробрых Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова
Целью работы стало проведение анализа изменения иммунологических показателей и уровня цитокинов у больных с обострением язвенной болезни желудка (ЯБЖ) после эндоскопического гемостаза с аппликацией фибринового клея (ФК).
Обследованы 2 группы больных: 1-я группа — больные до 60 лет (39 человек с ЯБЖ в стадии обострения (1а) и 15 — с явлениями язвенного кровотечения (16); 2-я группа — больные 63-90 лет (13 больных в стадии обострения ЯБЖ (2а) и 12 больных ЯБЖ с кровотечением (26). У больных с язвенным кровотечением выполнялся эндоскопический гемостаз с использованием повторных аппликаций ФК до появления эндоскопических признаков устойчивого гемостаза. У пациентов проведено определение показателей клеточного, гуморального иммунитета и естественной резистентности, уровня провоспалительных (TNFa, IL-1?, IL-8) и противовоспалительных (IL-4) цитокинов.
У больных 1а группы отмечено снижение CD4, NK-клеток, одновременно возрастало число клеток CD95 и CD25. Изменение Т-клеточного звена нормализовалось к 21-м суткам. Язвенное кровотечение (16 группа) приводило к еще большему снижению количества и функциональной активности показателей клеточного звена. После эндоскопического гемостаза с ФК показатели клеточного звена восстанавливались к 7-м суткам и достоверно не отличались от показателей иммунитета больных 1а группы. У больных 2а группы изменения показателей субпопуляций лимфоцитов были существенно более выражены. В группе 26 наблюдалось дальнейшее снижение количественных показателей и функциональной активности Т-лимфоцитов. После эндоскопической остановки кровотечения с ФК к 7-м суткам начинали восстанавливаться качественные и количественные показатели клеточного иммунитета. У лиц 1а и 16 групп выявлено достоверное повышение уровня провоспалительных цитокинов и снижен уровень IL-4. После эндоскопического гемостаза с ФК уровень всех цитокинов возрастал с 1-х суток, и к 3-м суткам выявлялась отчетливая динамика по всем исследуемым параметрам. У лиц 2-й группы (2а) провоспалительные цитокины определялись в невысоких концентрациях. Аппликация ФК вызывала достоверное увеличение уровня цитокинов даже у больных пожилого и старческого возраста, у которых имелись признаки истощения всех резервов защитных механизмов.
Таким образом, аппликация ФК способствовала ускорению нормализации показателей клеточного и гуморального иммунитета и повышению уровня провоспалительных и противовоспалительных цитокинов, что является необходимым условием для предотвращения прогрессирующей язвенной деструк
ции и рецидива кровотечения. Это подтверждается отсутствием у обследованных больных рецидивов язвенного кровотечения, потребовавших экстренной или срочной операции.
Роль иммунной системы при инфаркте миокарда
В.Н. Цыган, А.Б. Смолянинов, В.Ю. Никитин,
К.Л. Козлов, Д.А. Кириллов, Е.Е. Халайчев Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН;
Центр клеточной и генной терапии;
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург
Целью нашего исследования явилось изучение иммунного статуса больных инфарктом миокарда (ИМ). Обследовано 25 больных ИМ (средний возраст 75,1 ± 7,3 лет). У всех больных в 1-й группе имелся острый трансмуральный ИМ, у 16-ти с задней локализацией, у 9-ти с локализацией в области верхушки левого желудочка. В анамнезе у 14 больных имелась гипертоническая болезнь, а у 3 пациентов сахарный диабет II типа, среднетяжелое течение. У пациентов ИМ были диагностированы изменения показателей состояния клеточного иммунитета: СБ3+ (Т-лимфоциты) 74,3 ± 3,2 % (р < 0,05); СБ3+СБ4+ (Т-лимфоциты хелперы/индукторы)
± 1,6 % (р < 0,01). При ИМ наблюдалось увеличение содержания циркулирующих иммунных комплексов, так среднемолекулярные составили 152,3 ± 5,4 % (р < 0,01); а низкомолекулярные 375,4 ± 15,9 % (р < 0,001). У больных ИМ в первые сутки повышалось содержание CD3+CD8+ (Т-цито- токсических лимфоцитов), CD4+CD8+ (незрелых Т-лимфоци- тов), усиливалась плотность экспрессии активационных маркеров CD3+HLA-DR, CD3+CD25+ на поверхности Т-лимфо- цитов, что свидетельствует об избирательной активации отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов.
Таким образом, у больных ИМ имеется нестабильность иммунологического фенотипа, возрастает плотность экспрессии маркера ранней активации, CD3+CD25+, и поздней активации CD3"HLA-DR. От состояния иммунной системы зависит течение ИМ. Огромную роль в его терапии могут играть иммуномодуляторы и цитокины.
Цитокины в патогенезе злокачественных новообразований
Н.В. Чердынцева1, В.А. Белявская2, П.А. Гервас1,
Н.В. Севостьянова1, Н.В. Литвяков1, Л.В. Гердт1,
Н.Н. Бабышкина1, Е.М. Слонимская1, М.И. Воевода3
НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН, г. Томск; 2 Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», ЗАО «Вектор-Бест», наукоград Кольцово, Новосибирская обл.; 3 Институт терапии СО РАМН, г. Новосибирск
Механизмы регуляторной активности цитокинов при состояниях повышенного онкологического риска (предраковые изменения в тканях, связанные с дисплазией и хроническим воспалением) и при злокачественных новообразованиях включают в себя прямое влияние на модифицированные и опухолевые клетки посредством регуляции их пролиферации и апоп- тоза, неоангиогенеза, а также регуляцию миграции иммуно- компетентных клеток в опухолевый очаг и модуляцию их функционального состояния с обеспечением противо- или проопухолевой активности. Подтверждением вовлечения ци- токинов в механизмы канцерогенеза являются сведения о взаимосвязи аллельных вариантов генов цитокинов и их рецепторов с риском развития рака различных локализаций.
Мы провели исследования цитокинового статуса на системном (продукция клетками крови) и локальном (в бронхоальвеолярной жидкости) уровнях у больных раком молочной железы (РМЖ) и раком легкого (РЛ) и у пациентов с предраковыми заболеваниями. Была проведена оценка частоты редкого аллеля гена хемокинового рецептора ССR5del32 и распределения генотипов гена супрессора р53 (полиморфизм 72 кодона), а также их сочетаний у больных.
При РМЖ и дисрегенераторных процессах (фиброзно-кистозная мастопатия с высоким уровнем пролиферации клеток) отмечены однонаправленные изменения цитокинового статуса (IL-1, IL-2, IL-4, TNFa). Показана существенная зависимость продукции цитокинов иммунокомпетентными клетками больных РМЖ от стадии заболевания и состояния репродуктивной функции. У больных хроническим бронхитом с диспластическими изменениями бронхиального эпителия выявлено повышение локального уровня провоспалительных цитокинов по мере прогрессирования дисплазии, при этом практически не выявлялись «маркерные» цитокины иммунного ответа (IL-2, IL-4, TNFa, IFNy). Выявлена взаимосвязь делеционного аллеля ССR5del32 с риском появления и прогрессии РЛ. Известно, что ССR5 вовлекается в активацию Th1 (Lin et al., 1996, Galli et al., 2001) и способен регулировать транскрипционную активность р53 и инициировать апоп- тоз (Manes et al., 2004). Был показан разный вклад сочетаний аллелей и генотипов ССR5 и р53 в риск возникновения и прогноз клинического течения РМЖ и РЛ. Проведен анализ взаимосвязи функционального полиморфизма изученных генов с риском возникновения, тяжестью клинического течения РМЖ и РЛ и состоянием иммунной системы.
Применение технологии ELISpot для оценки специфического иммунного ответа на туберкулезный антиген ESAT-6 мононуклеарными клетками больных туберкулезом
Ю.А. Шевченко1, Е.В. Якушенко1, В.В. Романов2,
С.В. Сенников1, В.А. Козлов1
ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск;
Новосибирский НИИ туберкулеза МЗ РФ
При проведении вакцинации и разработке новых методов иммунотерапии инфекционных заболеваний, в частности туберкулеза, необходимо оценивать эффективность проводимого иммунокорригирующего лечения, в том числе по какому типу (гуморальному или клеточному) идет формирование специфического иммунного ответа. В настоящее время технология ELISpot — Enzyme-Linked ImmunoSpot позволяет оценивать in vitro продукцию определенных цитокинов (медиаторов ТЧ1 или ТЧ2) единичными иммунокомпе- тентными клетками. Метод обладает высокой чувствительностью (1 клетка на 106 клеток), позволяет использовать малое количество клеток для тестирования широкого спектра антигенов с полным сохранением их жизнеспособности. ELISpot получает широкое распространение в клинической практике как высокочувствительный метод экспресс-диагностики различных заболеваний. В данной работе был применен метод ELISpot для оценки антигенспецифичных IFNy продуцирующих клеток периферической крови in vitro в ответ на туберкулезный антиген ESAT-6.
При стандартной методике ELISpot используются моноклональные антитела, закрепленные на нитроцеллюлозной мембране, для захвата секретируемого цитокина и меченые биотином антитела для его определения. Визуализация секреторного продукта иммунокомпетентной клетки происходит с помощью фермент-субстратного взаимодействия. Для исследования были использованы мононуклеарные клетки периферической крови (МНК ПК) лиц, больных туберкулезом, туберкулезный антиген ESAT-6, митогены, рч^-18, моноклональные антитела против IFNy и система визуализации. За основу был взят протокол ELISpot, предлагаемый R&D Systems Inc.
В результате показано достоверное увеличение количества IFNy продуцирующих клеток при взаимодействии МНК ПК пациентов больных туберкулезом с антигеном ESAT-6 по сравнению с нестимулированными клетками. Стимуляция
конканавалином А приводила к увеличению количества ин- терферон-продуцирующих клеток, а стимуляция IL-18 — к усилению секреции IFNy без выраженного пролиферативного ответа МНК ПК больного туберкулезом по сравнению со спонтанной продукцией интерферона.
Таким образом, на основе технологии ELISpot был разработан метод оценки антигенспецифичных IFNy продуцирующих клеток периферической крови лиц, больных туберкулезом, в ответ на туберкулезный антиген ESAT-6 in vitro. Этот метод может быть использован для оценки эффективности стимуляции противотуберкулезного клеточного иммунного ответа при вакцинации или иммуноактивной терапии.
Больница Научного Центра РАН, г. Пущино, Московская обл.
В последние годы важная роль в патогенезе различных сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ), таких как инфаркт миокарда, стенокардия, отводится нейтрофилам в связи с участием этих клеток в процессах повреждения тканей при ишемии-реперфузии под действием активных форм кислорода (АФК). При этих заболеваниях наблюдается увеличение концентрации в крови различных провоспалительных цитокинов (IL-6, IL-8, IL-1 в, GM-CSF), которые ингибируют спонтанный апоптоз циркулирующих нейтрофилов. Сравнительное исследование величины спонтанного апоптоза нейтрофилов, выделенных из крови пациентов с инфарктом миокарда и нестабильной стенокардией, показало, что первоначально наблюдается снижение величины апоптоза нейтрофилов примерно в 2 раза по сравнению с контрольной группой. Применение в качестве метода лечения ультрафиолетового облучения крови приводило к увеличению величины спонтанного апоптоза нейтрофилов на 10 %. В экспериментах in vitro было показано, что при действии ультрафиолетового излучения (254 нм, УФС) в диапазоне доз от 0 до 300 Дж/м2 происходит активация апоптоза исследуемых клеток. При дальнейшем увеличении дозы облучения (до 600 Дж/м2) процент апоптозных клеток не увеличивается. При дозе УФС 600 Дж/м2 происходит снижение активности НАДФ-Н-оксидазы и миелопероксидазы. Было показано, что ключевым механизмом в реализации УФС-индуцирован- ного апоптоза является Fas-рецептор зависимый механизм. Использование ингибиторов ферментов, участвующих в образовании АФК нейтрофилами, приводило к снижению величины спонтанного апоптоза и практически не вызывало изменения УФС-индуцированного апоптоза этих клеток. Предполагается, что терапевтическое действие УФС при лечении ССЗ может быть основано на снижении повреждающего действия гиперак- тивированных циркулирующих нейтрофилов за счет ингибирования продукции АФК и сокращения времени циркуляции ней- трофилов при индукции апоптоза.
НИИ акушерства и гинекологии МЗ Республики Узбекистан, г. Ташкент
На сегодняшний день пневмония остается одной из важнейших проблем медицины, что обусловлено широкой распространенностью этого заболевания. В Узбекистане в последние годы наметилась тенденция к росту заболеваемости пневмонией среди беременных. Особенностью выявленных пневмоний у беременных является тяжелое острое течение, с развитием полиорганной недостаточности, порой приводящее к летальным исходам.
Провоспалительные цитокины IL-1 ? и TNFa являются ключевыми компонентами прогрессирования воспалительного процесса в бронхолегочной системе. Известно, что цитокины действуют неспецифично, плейотропно и обладают как локальной, так и системной регуляторной активностью.
Целью настоящей работы явилось изучение уровня провоспалительных цитокинов (IL-1?, TNFa) в сыворотке периферической крови у беременных с острой внебольничной пневмонией (ОВП).
Нами обследовано 24 беременные женщины с ОВП в возрасте от 18 до 35 лет. Из них 12 беременных с ОВП среднетяжелой и 12 с ОВП тяжелой степени. Контрольную группу составили 14 женщин с физиологически протекающей беременностью.
Уровень провоспалительных цитокинов определяли имму- ноферментным методом с использованием тест-систем (ООО «Цитокин», Санкт-Петербург).
Уровень IL-1? в сыворотке крови у беременных с ОВП среднетяжелой степени до лечения составил 1,71 ± 1,01 пг/мл, а содержание TNFa — 1,6 ± 0,98 пг/мл. Забор крови производили на 3-и сутки от начала заболевания и на 7-е сутки после лечения. После проведения консервативной комплексной терапии уровень данных цитокинов составил 1,2 ± 0,49 пг/мл и 2,57 ± 1,12 пг/мл, соответственно.
Содержание провоспалительных цитокинов у беременных с ОВП тяжелой степени достоверно отличался от показателей беременных с ОВП среднетяжелой степени. Так, уровень IL-1 ? и TNFa до лечения составил 6,68 ± 4,15 пг/мл и
25 ± 8,25 пг/мл, соответственно. У всех беременных с ОВП тяжелой степени по жизненным показаниям проведено досрочное родоразрешение путем кесарева сечения. Изучение содержания данных цитокинов в динамике показало их достоверное повышение после лечения. Уровень IL-1 ? составил 264 ± 158,14 пг/мл, а концентрация TNFa в сыворотке —
± 9,3 пг/мл.
Таким образом, повышение уровня цитокинов при всех формах ОВП является диагностическим критерием активации воспалительного процесса. Наиболее выраженный сдвиг в содержании провоспалительных медиаторов выявлен в группе беременных с ОВП тяжелой степени.