Исследование препаратов с цитокиновой активностью в экспериментальной модели внутрикожной воздушной полости

Б.А. Парамонов1, А.С. Симбирцев2, В.Г. Конусова2, Е.В. Зиновьев1, А.М. Харисов1, В.Б. Бабкин1 1Военно-медицинская академия МО РФ, С.-Петербург; 2ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов, С.-Петербург

Эксперименты проводили на 140 мышах обоего пола линии BALB/c массой 18—20 г. Животные были разделены на 10 групп по 14 особей. Внутрикожную воздушную полость (ВВП) формировали путем двукратного (с интервалом в два дня) внутрикож- ного введения 3 мл стерильного воздуха в кожу области спины. Спустя трое суток после этого в сформировавшуюся ВВП вводили по 1 мл раствора одного из исследуемых веществ. Изучали действие следующих агентов: 5 мг каррагенана (Servа); 0,5 нг интерлейкина 1в и 0,5 нг интерлейкина 8 (НИИ ОЧБ); 0,4 мг су- пероксиддисмутазы (НИИ ОЧБ); 15 мг в-каротина (ГНИИ ОЧБ); 100 мг a-токоферола («Акрихин»). В двух отдельных группах животным вводили смесь интерлейкина 1 и интерлейкина 8 с супероксиддисмутазой. Исследуемые вещества были приготовлены на сбалансированном фосфатном буфере (СФБ). В контрольных группах животным вводили по 1 мл буфера или стерильный воздух. Спустя сутки после введения животных дека- питировали, ВВП вскрывали, после чего в неё вводили 250 мкл раствора СФБ, промывную жидкость отбирали на анализ. Определяли количество клеток в единице объема, а также спонтанную и индуцированную хемилюминесценцию на хемилюми- нометре «Victor-2» (Wallac, Финляндия). Результаты выража
ли в CPS — количестве импульсов за определенный временной интервал (30 мин). Стенку ВВП иссекали, полученные биопта- ты исследовали методами световой и электронной микроскопии.

Установили, что в контрольных группах количество клеток в жидкости различалось на порядок (от 0,3х106 до 13,0х106 в 1 мл) и при этом спонтанная (СХЛ) и индуцированнная зимоза- ном хемилюминесценция (ИХЛ) была на низком уровне и составляла: СХЛ — от 10,0 ± 0,7 до 14,1 ± 2,6; ИХЛ — в пределах от 41,6 ± 1,8 до 464,0 ± 38. Общим для животных, которым в полости вводили антиоксиданты (а-токоферол, Р-каротин и супе- роксиддисмутазу), было наличие цитоза. При изучении показателей хемилюминесценции (как спонтанной, так и индуцированной) была отмечена её полная ингибиция, что свидетельствовало о «гашении» свободных радикалов кислорода. У животных, которым вводили провоспалительные цитокины (IL-1 р, IL-8) и каррагенан, в жидкости пузырей показатели спонтанной хеми- люминесценции существенно не отличались от соответствующих данных в контрольных группах. Вместе с тем, возросла активность ИХЛ (как общей, так и удельной). Величина данных показателей у всех животных была выше, чем в контрольных группах, и колебались в пределах от 227 до 11 000 CPS. Введение супероксиддисмутазы вместе с цитокинами (IL-1 р и IL-8) оказывалось недостаточным для того, чтобы купировать возрастание хемилюминесценции. По-видимому, это связано с краткосрочностью действия фермента.

При гистологическом исследовании были установлены существенные различия в строении ВВП в разных группах. При введении буфера или воздуха признаки воспаления были не выражены, в тонких и нежных стенках пузыря имелись 2—3 слоя клеток. Схожая картину наблюдали при введении антиоксидантов, в частности супероксиддисмутазы. Инъекция провоспалитель- ных агентов (например, интерлейкина 1Р), способствовала привлечению большого количества активированных нейтрофилов и макрофагов. Стенка ВВП при этом набухала, часть нейтрофилов мигрировала из кровеносных сосудов в просвет полости.