Применение технологии ELISpot для оценки специфического иммунного ответа на туберкулезный антиген ESAT36 мононуклеарными клетками больных туберкулезом Ю.А. Шевченко , Е.В. Якушенко , В.В. Романов , С.В. Сенников , В.А. Козлов  ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск; Новосибирский НИИ туберкулеза МЗ РФ

Применение технологии ELISpot для оценки специфического иммунного ответа на туберкулезный антиген ESAT36 мононуклеарными клетками больных туберкулезом Ю.А. Шевченко , Е.В. Якушенко , В.В. Романов , С.В. Сенников , В.А. Козлов  ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск; Новосибирский НИИ туберкулеза МЗ РФ

При проведении вакцинации и разработке новых методов иммунотерапии инфекционных заболеваний, в частности туберкулеза, необходимо оценивать эффективность проводимого иммунокорригирующего лечения, в том  числе по какому типу  (гуморальному или клеточному) идет формирование специфического иммунного ответа. В настоящее время технология ELISpot — EnzymeLinked  Immunopot позволяет оценивать  in vitro продукцию определенных цитокинов  (медиаторов ТЧ1 или ТЧ2) единичными иммунокомпетентными клетками. Метод обладает высокой чувствительностью  (1 клетка на 106  клеток), позволяет использовать малое количество клеток для тестирования широкого спектра антигенов с полным сохранением их жизнеспособности. ELISpot получает широкое распространение в клинической практике как высокочувствительный метод экспресс диагностики различных заболеваний. В данной работе был применен метод ELISpot для оценки антигенспецифичных  IFN? продуцирующих клеток периферической крови  in vitro в ответ на туберкулезный антиген ESAT!6. При стандартной методике ELISpot используются моноклональные антитела, закрепленные на нитроцеллюлозной мембране, для захвата секретируемого цитокина и меченые биотином антитела для его определения. Визуализация секреторного продукта иммунокомпетентной клетки происходит с помощью ферментсубстратного взаимодействия. Для исследования были использованы мононуклеарные клетки периферической крови  (МНК ПК) лиц, больных туберкулезом, туберкулезный антиген ESAT6, митогены, рчIL18, моноклональные антитела против  IFN? и система визуализации. За основу был взят протокол ELISpot, предлагаемый R&D Systems  Inc. В результате  показано достоверное увеличение количества  IFN? продуцирующих клеток при взаимодействии МНК ПК пациентов больных туберкулезом с антигеном ESAT6 по сравнению с нестимулированными клетками. Стимуляцияконканавалином А приводила к увеличению количества интерферон продуцирующих клеток, а стимуляция  IL18—к усилению секреции  IFN? без выраженного пролиферативного ответа МНК ПК больного туберкулезом по сравнению со спонтанной продукцией интерферона. Таким образом, на основе технологии ELISpot был разработан метод оценки антиген специфичных  IFN? продуцирующих клеток периферической крови лиц, больных туберкулезом, в ответ на туберкулезный антиген ESAT6  in vitro. Этот метод может быть использован для оценки эффективности стимуляции противотуберкулезного клеточного иммунного ответа при вакцинации или иммуноактивной терапии.