загрузка...
 
Н.Н. Абрамова , А.С. Симбирцев , И.И. Долгушин НИИ иммунологии Челябинской  государственной медицинской академии;   ГНЦ  Гос НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт Петербург Влияние Бестима и Беталейкина на иммунный статус больных с вторичными иммунодефицитными состояниями при вакцинации против вирусного  гепатита В
Повернутись до змісту

Н.Н. Абрамова , А.С. Симбирцев , И.И. Долгушин НИИ иммунологии Челябинской  государственной медицинской академии;   ГНЦ  Гос НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт Петербург Влияние Бестима и Беталейкина на иммунный статус больных с вторичными иммунодефицитными состояниями при вакцинации против вирусного  гепатита В

Представлены результаты сравнительного исследования влияния иммуномодуляторов Бестима (син? тетического дипептида  ? ?Glu?Trp) и Беталейкина  (рекомбинантного  IL?1? ) на иммунный  статус больных с вторичными иммунодефицитами (ВИД) и хроническим инфекционным синдромом (ХИС) на фоне вакцинации против вирусного гепатита В (ВГВ) через один месяц после введения первой дозы вакцины Энджерикс В. Иммунологические нарушения больных с ВИД и ХИС характеризуются снижением абсолютного и относительного количества зрелых Т?клеток, дисбалансом субпопуляций Т?лимфоцитов, угнетением функциональной активности нейтрофилов. Введение одной дозы вакцины против ВГВ пациентам с ВИД усугубляет нарушения клеточного иммунитета и функциональной активности нейтрофилов, вызывает менее выраженную, чем у  здоровых, активацию гуморального  звена иммунитета. Бестим и Беталейкин увеличивают  содержание  зрелых  Т?лимфоцитов в крови, повышают  значение CD4/CD8, нивелируют отрицательное влияние вакцины против ВГВ на функциональную активность нейтрофилов. Беталейкин увеличивает абсолютное количество нейтрофилов крови. Ожидается, что современные иммуномодуляторы Бестим и Беталейкин повысят иммунологическую безопасность вакцины против вирусного  гепатита В, увеличат эффективность вакцинации против вирусного гепатита В у пациентов с ВИД и ХИС. (Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3, № 4. С. 29–35.)

Ключевые слова: вторичный иммунодефицит, вирусный  гепатит В, вакцинация, Бестим, Беталейкин.

Опыт применения современных рекомбинантных вакцин против вирусного  гепатита В  (ВГВ) свидетельствует об их высокой эффективности, возможности снижения заболеваемости ВГВ в 10– 19,5 раза [6, 17, 19, 22]. Действие вакцин на иммунную систему может быть разнонаправленным. Вакцины способны вызывать как активацию, так и супрессию отдельных иммунных функций. Следовательно, вакцинация лиц с изначальными нарушениями иммунного статуса может усугубить эти нарушения, а также снизить эффективность вакцинации [3, 5, 10, 11, 15]. Хронический инфекционный синдром  (ХИС) занимает одно из первых мест в структуре вторичных иммунодефицитов (ВИД) [7, 18, 20]. Учитывая то, что вакцинация против ВГВ носит массовый характер, проблема вакцинации больных с ВИД и ХИС представляется весьма актульной. Для развития полноценного иммунного ответа на вакцину и уменьшения отрицательного влияния на организм человека вакцинных препаратов в качестве иммуноадъювантов рекомендуется использование в вакцинальном процессе различных иммуномодуляторов. В настоящее время с этими целями успешно применяются полиионный препарат полиоксидоний, синтетический пептидный иммуномодулятор имунофан, рекомбинантный интерферон виферон и др. [5, 8, 9, 13, 15]. Экспериментальные данные свидетельствуют о стимуляции поствакцинального иммунного ответа при совместном использовании вакцин с различными препаратами цитокинов  (IL1,  IL2 и др.)  [1, 2, 21, 24, 23, 25]. Поэтому включение в схему вакцинации против ВГВ больным с ХИС Беталейкина (рекомбинантного IL1?) и Бестима (синтетического дипептида  ? Glu Trp)—современных препаратов, обладающих широким спекром иммуномодулирующих воздействий  [9, 14, 16], является перспективным решением. В данной работе проведено сравнительное исследование влияния Бестима и Беталейкина на иммунный статус больных с вторичными иммунодефицитными состояниями, ХИС, иммунизированных против ВГВ вакциной Энджерикс В. Материалы и методы исследования Отбор больных проводился по карте иммунологического мониторинга, разработанной в НИИ иммунологии ЧелГМА и на основании анализа амбулаторных карт пациентов. Основными критериями исключения больных из исследования были: наличие острых заболеваний и хронических в фазе обострения, беременность и период лактации у женщин, использование больными иммуномодуляторов и вакцин в течение последних 6 мес., участие в других испытаниях. Для  участия в исследовании было отобрано 97 человек  с ВИД и ХИС в возрасте 19–23 лет. Из них 75 % больных перенесли острую респираторную вирусную инфекцию (ОРВИ) более четырех раз в году, 45,5 % имели хронические заболевания лор-органов, 42,3 % — хроническую  урогенитальную инфекцию, 37,2 %  страдали рецидивирующей  герпетической инфекцией различной локализации, 28,7 % имели  хроническую патологию желудочно-кишечного  тракта;  у 26,3 % больных были выявлены рецидивирующие бактериальные и грибковые  инфекции  кожи,  слизистых,  подкожножировой клетчатки. 37 больных иммунизировали вакциной против ВГВ без назначения иммуномодуляторов (1 я группа), 32 больных с ХИС получали Бестим и вакцину (2 я группа), 28 больных— Беталейкин и вакцину (3 я группа). Контролем служила группа  здоровых людей  (25 человек) в возрасте 19–22 лет, вакцинированных против ВГВ по выбранной схеме (4 я группа). Больные,  у которых были обнаружены антитела к HBsAg до вакцинации, исключались из исследований. Беталейкин применяли в дозе 2,5 нг/кг на 2 мл изотонического раствора хлорида натрия подкожно один раз в сутки в  течение  трех дней  с момента введения первой дозы вакцины и  затем по одной инъекции одновременно  со второй и  третьей дозами вакцины. Бестим назначали в дозе 0,0001  г внутримышечно  в 2 мл изотонического раствора хлорида натрия один раз в сутки. Первоначальный курс лечения составил 5 инъекций, далее препарат вводили подобно Беталейкину. Иммунологическое обследование включало  тесты 1, 2, и 3 го уровней. В периферической крови определяли количество лейкоцитов, абсолютное и относительное  содержание нейтрофилов и лимфоцитов крови. Состояние клеточного иммунитета оценивали по экспрессии поверхностных антигенов лимфоцитов методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител серии ИКО к дифференцировочным антигенам CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD95. Процент антигенположительных клеток подсчитывали  с использованием флюоресцентного микроскопа. Оценка функциональной активности нейтрофилов крови проводилась по реакции восстановления нитросинего  тетразолия  (НСТ) в  спонтанном и индуцированном НСТ тесте, на модели поглощения частиц латекса фагоцитами, путем определения интенсивности люминесценции лизосом в цитоплазме фагоцитов. Изучение уровня  титров антител к HBs анти-гену  (анти HBsАg) проводилось с помощью ИФА [4]. Для проведения вакцинации использовали вакцину Энджерикс В, которую вводили по схеме: 0—1—6 мес. [12]. В настоящей работе приведены данные обследования пациентов, которое проводилось перед первым введением вакцины против ВГВ и через 1 мес. после первой вакцинации.

Результаты и обсуждение

Было опрошено 3107 пациентов, проходивших ежегодный медицинский осмотр. Частота ХИС среди обследованных составила 24,2 %. Иммунный статус больных с хроническим инфекционным синдромом до начала вакцинации против ВГВ характеризовался значительными количественными и функциональными нарушениями (табл. 1, 2). При сравнительном изучении иммунологических показателей здоровых пациентов и больных выявлены статистически достоверное снижение CD3, CD4 лимфоцитов  (р < 0,001), CD8 лимфоцитов и отношения CD4/CD8 (р < 0,05), с тенденцией к повышению содержания CD20 и CD95 лимфоцитов, угнетение активности и интенсивности  фагоцитоза  нейтрофилов (р < 0,05), повышение спонтанной НСТ  реакции (р < 0,05) c тенденцией к снижению функционального резерва нейтрофилов. Лизосомальная активность нейтрофилов, уровни  IgA, IgM и IgG в 1 й группе не отличалась от показателей 4 й группы. При анализе иммунологических показателей здоровых и больных пациентов через один месяц после введения первой дозы вакцины против ВГВ выявлено снижение числа лимфоцитов, экспрессирующих CD3 антиген в 1,4 раза в обеих  группах (p < 0,05), CD4 антиген—в 1,3 раза (4 я группа), в 1,2 раза (1 я группа) (p < 0,05). Содержание CD8 лимфоцитов достоверно не изменилось в обеих  группах, значение иммунорегуляторного индекса (ИРИ) здоровых уменьшилось в 1,3 раза (р < 0,05) и достигло уровня ИРИ 1 й  группы до начала вакцинации. Значение CD4/CD8 больных оставалось прежним. Содержание CD20 лимфоцитов у пациентов 1 й  группы имело тенденцию к повышению, а в 4 й  группе определялось достоверное увеличение этого показателя  (p < 0,05). Число лимфоцитов, экспрессирующих антиген CD95,  увеличилось  у  здоровых  пациентов (p > 0,05) и не изменилось у больных. Содержание CD16 лимфоцитов до иммунизации и через 1 месяц в обеих  группах не изменилось  (см. табл. 1). Абсолютное и относительное содержание нейтрофилов крови существенно не изменялось в обеих группах, но показатели их функциональной активности значительно отличались друг от друга. Интенсивность и активность фагоцитоза под влиянием вакцины значительно снижались и у здоровых и у больных, но у больных достоверно ниже, чем у здоровых (p < 0,05). В 4 й группе пациентов значение фагоцитарного числа практически не изменялось, а в 1 й  группе достоверно увеличивалось  (p < 0,05).

Таблица  1 Изменение содержания субпопуляций лимфоцитов периферической крови у здоровых и больных с ВИД и ХИС через один месяц после введения первой дозы вакцины против ВГВ и иммуномодуляторов Бестим и Беталейкин (М ± m)

 

Спонтанная активность нейтрофилов в НСТ тесте уменьшалась в обеих исследуемых группах (p > 0,05). Индуцированный НСТ тест резко падал у больных (p < 0,001) и снижался у здоровых  (p < 0,05), лизосомальная акивность нейтрофилов здоровых вакцинированных достоверно повышалась (p < 0,05) (табл. 2). У больных с ВИД и ХИС, получавших Бестим, через один месяц после введения  первой дозы вакцины против ВГВ наблюдается выраженное увеличение содержания в популяции Т лимфоцитов зрелых CD3 и CD4 клеток  (p < 0,001)

Таблица  2 Изменение содержания субпопуляций лимфоцитов периферической крови у здоровых и больных с ВИД и ХИС через один месяц после введения первой дозы вакцины против ВГВ и иммуномодуляторов Бестим и Беталейкин (М ± m)

 

Примечание к  табл. 1 и 2. р —  статистическая достоверность различий между  группой больных без лечения и  группой  здоровых до вакцинации против ВГВ; р1 —  статистическая достоверность различий в  группе больных без лечения до вакцинации и через один месяц после введения первой дозы вакцины против ВГВ; р2 —  статистическая достоверность различий в  группе больных, получавших Бестим до вакцинации и через один месяц после введения первой дозы вакцины против ВГВ; р3 —  статистическая достоверность различий в  группе больных, получавших Беталейкин до вакцинации и через один месяц после введения первой дозы вакцины против ВГВ; р4 —  статистическая достоверность различий в  группе  здоровых до вакцинации и через один месяц после введения первой дозы вакцины против ВГВ; р5 —  статистическая достоверность различий между  группой больных без лечения и  группой больных, получавших Бестим через один месяц после введения первой дозы вакцины против ВГВ; р6 —  статистическая достоверность различий между  группой больных без лечения и  группой больных, получавших Беталейкин через один месяц после введения первой дозы вакцины против ВГВ; р7 —  статистическая достоверность различий между  группой больных получавших Беталейкин и  группой больных, получавших Бестим через один месяц после введения первой дозы вакцины против ВГВ; р8 —  статистическая достоверность различий между  группой больных без лечения и  группой  здоровых через один месяц после введения первой дозы вакцины против ВГВ.

(см. табл. 1). Показатели CD8, CD4/CD8 тоже увеличились  (p < 0,05). Достоверность различий демонстрируемых показателей с показателями 1 й группы составляет 99 %, что указывает на значительный стимулирующий эффект Бестима на показатели клеточного иммунитета. Содержание CD16 и CD20 увеличилось, а CD95 уменьшилось статистически недостоверно. В сравнении с группой больных без иммунотерапии существенной разницы в динамике этих показателей не определяется. Введение одной дозы вакцины против ВГВ и проведенный курс лечения Бестимом не повлияли на абсолютное и относительное содержание нейтрофилов у больных 2 й  группы  (см. табл. 2). Показатели фагоцитоза также значимо не изменились, но по сравнению с 1 й  группой больных,  где определяется выраженное угнетение фагоцитарной активности нейтрофилов (p < 0,05),  они  оказались  достоверно  выше (p < 0,05). Подобная закономерность прослеживается при сравнительном анализе значений индуцированного НСТ теста  (р < 0,05). Эти данные указывают на то, что Бестим нивелирует отрицательное влияние вакцины на функциональную активность нейтрофилов. В  группе больных с ХИС, получивших одну дозу вакцины против ВГВ и курс лечения Беталейкином, также наблюдается значительноестимулирующее действие иммуномодулятора на клеточное звено иммунитета (см. табл. 1). Достоверно увеличивается содержание CD3, CD4 лимфоцитов в крови и значение ИРИ по сравнению с показателями до вакцинации  (p < 0,05) и с показателями 1 й  группы через один месяц после начала вакцинации (p < 0,001). По сравнению с группой больных, получавших Бестим, полученные значения CD3, CD4 и ИРИ несколько выше, но p > 0,05. Количество CD8 лимфоцитов не изменилось. Динамика содержания CD16, CD20, CD95 лимфоцитов не отличается от показателей 1 й и 2 й  групп. По сравнению с показателями до введения первой дозы вакцины против ВГВ и с показателями 1 й и 2 й  групп после введения вакцины относительное содержание нейтрофилов у больных 3 й группы имеет тенденцию к повышению (p > 0,05), абсолютное содержание нейтрофилов увеличивается достоверно (p < 0,05) (см. табл. 2). В ответ на введение Беталейкина и одной дозы вакцины против ВГВ у больных 3 й группы достоверно увеличиваются интенсивность и активность фагоцитоза нейтрофилов при сопоставлении показателей внутри  группы с вероятностью более 95 %, по сравнению с 1 й группой больных с вероятностью более 99 %, по сравнению со 2 й группой показатели значимо не отличаются. Показатели функциональной активности нейтрофилов в НСТ тесте снижаются, но эта тенденция меньше выражена, чем в 1 й группе и больше, чем во 2 й (p > 0,05). Лизосомальная активность нейтрофилов у больных 3 й  группы повышается недостоверно. После проведения первого тура вакцинации против ВГВ анти HВsAg были обнаружены у 7 больных, получивших курс лечения Беталейкином, но определяемые титры антител были ниже протективного уровня (10 МЕ/мл).

Выводы

1. Иммунологические нарушения у больных с ХИС характеризуются снижением абсолютного и относительного количества зрелых Т клеток, дисбалансом субпопуляций Т лимфоцитов, угнетением функциональной активности нейтрофилов.

2. Введение одной дозы вакцины против ВГВ здоровым пациентам вызывает увеличение содержания в периферической крови В лимфоцитов и повышает лизосомальную активность нейтрофилов, а также снижает содержание зрелых Т лимфоцитов и значение CD4/CD8, угнетает фагоцитарную и НСТ редуцирующую активность нейтрофилов.

3. У пациентов с ХИС введение одной дозы вакцины против ВГВ вызывает незначительную активацию гуморального звена иммунитета, еще большее снижение абсолютного и относительного количества зрелых Т клеток, усугубляет нарушения функциональной активности нейтрофилов.

4. Бестим и Беталейкин увеличивают содержание зрелых Т лимфоцитов в крови, увеличивают значение CD4/CD8, нивелируют отрицательное влияние вакцины против ВГВ на функциональную активность нейтрофилов. Беталейкин увеличивает абсолютное количество нейтрофилов крови.

ЛИТЕРАТУРА

1. Авдеева Ж.И., Медуницын Н.В. Препараты системы цитокинов // Цитокины и воспаление. — 2002. — Т. 1, № 2. — С. 33.

2. Акользина С.Е., Медуницын Н.В. и др. Адъювантные свойства цитокинов. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии // Сб. труд. — М., 1998. — С. 260.

3. Железникова Г.Ф. Иммуномодулирующее действие вакцин: новые аспекты известной проблемы // Иммунология. — 2000. — № 4. — C. 20–24.

4. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Иммунология для врача. — СПб., 1998. — 156 с.

5. Костинов М.П. Вакцинация детей с нарушенным состоянием здоровья. — М., 2000. — 78 с.

6. Костинов М.П., Гурвич Э.Б. Вакцины нового поколения в профилактике инфекционных заболеваний. — М.: Медицина для всех, 2002. — 152 с.

7. Малашенкова И.К., Дидковский Н.А. Принципы иммунокорригирующей терапии вторичных иммунодефицитов, ассоциированных с хронической вируснобактериальной инфекцией // Рус. мед. журн. — 2002. — Т. 10, № 21. — С. 973.

8. Медуницын Н.В. Вакцинология. — М.: Триада Х, 1999. — 272 с. 9. Медуницын Н.В. Возможные пути совершенствования медицинских иммунобиологических препаратов. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии // Сб. труд. — М., 1998. — C. 40–44.

10. Медуницын Н.В. Иммунологическая безопасность вакцин // Патол. физиол. эксперим. тер. — 1999. — № 1. — С. 20–22.

11. Медуницын Н.В. Индивидуальная вакцинация // Эпидемиол. инфекц. болезни. — 2000. — № 3. — С. 8–13.

12. Некоторые современные вопросы вакцинопрофилактики: Сб. метод. рекомендаций и пособий для врачей // Под ред. Н.В. Скрипченко. — Т. 2. — 2000. — С. 37.

13. Петров Р.В., Хаитов Р.М. Вакцины нового поколения на основе синтетических полиионов: история создания, феноменология и механизмы действия, внедрение в практику // Иммунология. — 1998. — № 2. — С. 4–11.

14. Пигарева Н.В., Симбирцев А.С., Колобов А.А. и др. Изучение иммуномодулирующей активности нового пептидного соединения бестима // Иммунология. — 2000. — № 1. — С. 33–35.

15. Семенов Б.Ф., Баранов А.А.  (ред.). Вакцинопрофилактика при нарушении здоровья. — М., 2001. — 339 с.

16. Симбирцев А.С. Биология семейства интерлейкина человека // Иммунология. — 1998. — № 3. — С. 9–17.

17. Уральшина Н.П. Опыт реализации муниципальной программы профилактики гепатита В среди школьников г. Челябинска // Тез. симп. в рамках 4 й Рос. конф. «Гепатит В, С, D: проблемы диагностики, лечения и профилактики». — М., 2001. — С. 52–53.

18. Хаитов Р.М. Вторичная иммунная недостаточность  // Иммунология. — 1999. — № 1. — C. 14–19.

19.Шахгильдян И.В., Хухлович П.А. Десятилетний опыт проведения вакцинации против гепатита В среди лиц, составляющих группы высокого риска инфицирования НВ вирусом // Тез. симп. в рамках 4 й Рос. конф. «Гепатит В, С, D: проблемы диагностики, лечения и профилактики». — М., 2001. — С. 5–11.

20. Ширинский В.С., Старостина Н.М., Сенникова Ю.А., Малышева О.А. Проблемы диагностики и классификации вторичных иммунодефицитов // Аллергология и иммунология. — 2000. — Т. 1, № 1. — С. 62–70.

21.Andrews A.E., Lofthouse S.A. et al. Production and  in vivo use of  recombinant bovine IL1? as an immunological adjuvant // Vaccine. — 1994. — Vol. 12, № 1. — P. 14–22.

22. Margulis G.C., Coleman P.D. et al. The prophylaxis of the transmission of hepatitis B virus through the  immunization. The economic analysis of the modern views // JAMA. — 1995. — Vol. 274, № 15. — P. 1201–1208.

23. Quiroga J.A., Castillo I. et al. Recombinant gamma interferon as adjuvant to hepatitis B  vaccine  in haemodialysis patients  // Hepatology. — 1990. — Vol. 12. — P. 661–663.

24. Rao R.V.S., Nayak A.R. Enhanced immunogenicity of a sequence derived from hepatitis B virus surface antigen  in a composite peptide  that  includes  the immunostimulatory region from human interleukin 1 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1990. — Vol. 87. — P. 5519–5524.

25. Warren H.S., Vogel F.R. et al. Current status of immunological adjuvants // Annu. Rev. Immunol. — 1986. — Vol. 4. — P. 369–388.

Influence of Bestim and Betaleukin on the immunological state of patients with secondary immunodeficiency during vaccination against type В viral hepatitis N.N. Abramova1 , А.S. Simbirtsev , I.I. Dolgushin1 1  Immunology Research Institute of Chelyabinsk State Medical Academy,   State Research  Institute of Highly Pure Biopreparations, St. Petersburg

Influence of Bestim (synthetic dipeptide g?Glu?Trp) and Betaleukin (recombinant human interleukin?1?) on immunological state of patients with secondary immunodeficiency (SID) resulted from chronic infec? tious syndrome (CIS) during vaccination against viral hepatitis B (VHB) one month after the first dose of Endgerics B vaccine was  investigated  in a  comparative  study.  Immunological abnormalities  in patients with SID, CIS are characterized by reduction of absolute and relative quantity of mature T suppressor cells and imbalance of T lymphocyte subpopulations, suppression of neutrophil activity. Injection of single VHB vaccine dose in patients with SID induced further suppression of cellular immunity and neutrophil activity, and led to less activation of humoral immunity than in healthy person. Bestim and Betaleukin increased the number of mature T lymphocytes in blood, the CD4/CD8 value, and diminished negative influence of VHB vaccine on neutrophil activity. Betaleukin increased absolute amount of blood neutrophils. It is expected that modern immunomodulating agents (Bestim and Betaleukin) would improve the immunological safety of hepatitis B virus vaccine and increase the efficacy of vaccination against viral hepatitis B in patients with SID and CIS. (Cytokines and Inflammation. 2004. Vol. 3, № 4. P. 29–35.)

Key words: secondary immunodeficiency, viral hepatitis B, vaccination, Bestim, Betaleukin.



загрузка...