И.В. Нестерова, В.А. Роменская, Н.П. Капранова, Г.Г. Рожкова Российский центр функциональной хирургической гастроэнтерологии, Краснодар; Учебно?научный центр Медицинского центра УД Президента РФ, Москва Иммуномодулирующая терапия Вифероном в коррекции нарушений мембранного потенциала нейтрофильных гранулоцитов при осложненной язвенной болезни двенадцатиперстной кишки
И.В. Нестерова, В.А. Роменская, Н.П. Капранова, Г.Г. Рожкова Российский центр функциональной хирургической гастроэнтерологии, Краснодар; Учебно?научный центр Медицинского центра УД Президента РФ, Москва Иммуномодулирующая терапия Вифероном в коррекции нарушений мембранного потенциала нейтрофильных гранулоцитов при осложненной язвенной болезни двенадцатиперстной кишки
Иммунофлюоресцентным методом исследовали количество нейтрофильных гранулоцитов, экспрессирующих рецепторы CD11b, CD16, CD95 в периферической крови 69 пациентов, страдающих язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, осложненной стенозом. Показано модулирующее действие Виферона на количество НГ, экспрессирующих CD11b, CD16 и CD95, у пациентов,перенесших радикальную дуоденопластику с последующей традиционной терапией. (Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4, № 1. С. 47–51.)
В настоящее время большое значение придается роли нейтрофильных гранулоцитов (НГ) в системе иммунитета. Работами последних лет показано, что от состояния именно этого звена иммунной системы зависит исход и прогноз ряда заболеваний [1, 7]. Не подлежит сомнению важность, а в ряде случаев, решающая роль НГ в обеспечении противоинфекционной резистентности организма [5]. Гетерогенность функциональных возможностей НГ, степень их зрелости определяются состоянием рецепторного аппарата НГ [6]. Специфическая мембранная рецепция отражает адгезивные, поглотительные, цитолитические, апоптические способности нейтрофилов [9]. Фагоцитарная и микробицидная активность НГ находится в непосредственной зависимости от количества и плотности таких рецепторов, как CD11b/CD18, CD64, CD16, CD32, CD95 [4]. При этом роль модуляторов экспрессии данных антигенов принадлежит IFN?, TNF?, IL1 [2]. Существование и функционирование многоклеточного организма в виде единого целого обусловлено взаимодействием его клеток как между собой, так и с окружающим их экстрацеллюлярным матриксом. Подобные взаимодействия осуществляются благодаря разнообразному классу молекул клеточной адгезии. Мембранные молекулы, вовлеченные в процессы адгезии, классифицируют на 4 суперсемейства: интегрины, селектины, иммуноглобулины, кадхерины [15]. Интегрины—поверхностные клеточные белки, участвующие в клеточной адгезии и распознавании во многих процессах, включая эмбриогенез, гемостаз, тканевую репарацию, иммунный ответ, метастазирование опухоли и многое др. CD11b/CD18—интегрин, который присутствует на поверхности моноцитов, макрофагов, гранулоцитов, на фолликулярных и других дендритных клетках, некоторых NK клетках. CD11b/CD18 опосредует прилипание клеток к фибронектину и продуктам его расщепления. Интегрин CD11b/CD18 способствует прилипанию нейтрофилов и моноцитов к стимулированному эндотелию и фагоцитозу частиц, покрытых комплементом [3]. CD16 (CD16a, CD16b)—трансмембранный белок иммуноглобулинового суперсемейства. Присутствует на NK клетках, моноцитарно макрофагальных клетках, нейтрофилах. Низкоаффинный Fc рецептор для IgG (Fc?3а — CD16a, Fc?3b—CD16b) опосредует фагоцитоз, антителозависимую клеточную цитотоксичность. С нарушением CD16a связывают предрасположенность к системной красной волчанке, аллоиммунной нейтропении новорожденных, рецидивирующим вирусным инфекциям. Экспрессия CD16bповышается на эозинофилах периферической крови человека при аллергии [3]. CD95 (Fas/Apo 1)—мембранный белок типа 1 суперсемейства рецепторов TNF, содержит домен смерти. Играет центральную роль в физиологической регуляции апоптоза клеток. Экспрессия Fasрецептора (CD95+) на мембране НГ отражает готовность к реализации апоптозной программы, т.е. запрограммированных внутриклеточных процессов, приводящих к гибели клеток [3]. Регуляция апоптотической активности НГ осуществляется сетью цитокинов. Апоптоз является важным механизмом, который лимитирует агрессивный потенциал НГ в условиях естественной микросреды, а также лежит в основе регуляции воспалительных реакций, элиминируя излишние НГ и завершая воспаление [13, 14]. Нарушение процесса апоптоза приводит к серьезным дефектам в иммунной системе, что может проявиться в развитии аутоиммунных и лимфопролиферативных заболеваний, вторичных иммунодефицитов [12]. В литературе имеются данные о дисфункциях НГ при язвенной болезни. Они свидетельствуют о преимущественном поражении нейтрофильного звена при данной патологии [10]. В то же время не проводились исследования рецепторного аппарата НГ, в частности CD11b, CD16, CD95 рецепторов, на нейтрофилах при осложненных формах язвенной болезни двенадцатиперстной кишки (ЯБ ДПК). Цель исследования—изучить особенности экспрессии рецепторов адгезии, цитолиза и апоптоза (CD11b, CD16, CD95) НГ у пациентов, страдающих ЯБ ДПК, осложненной стенозом, и оценить эффекты влияния рекомбинантного интерферона ?2b (Виферона) на экспрессию CD11b, CD16, CD95 рецепторов НГ.
Материалы и методы
Под наблюдением находились 73 пациента обоего пола в возрасте от 19 до 60 лет, страдающих ЯБ ДПК, осложненной стенозом, вне фазы обострения. Диагноз ЯБ ДПК, осложненной стенозом, устанавливали на основании клинического, эндоскопического и рентгенологического исследований. У всех больных были обнаружены сопутствующие эндоскопические признаки гастрита, бульбита либо дуоденита различной степени выраженности. Дополнительно был проанализирован архивный материал РЦФХГ по результатам гистологического исследования интраоперационного резецированного материала у данных пациентов после выполнения дуоденопластики. В этом материале учитывались степень воспаления (показатель инфильтрации и показатель активности) и повреждения (показатель фиброза и показатель атрофии) слоев дуоденальной стенки по 4?балльной шкале активности [11]: 1 балл — изменения ограничиваются слизистой оболочкой дуоденальной стенки; 2 балла — захватывают под? слизистый слой; 3 балла—распространяются на мышечный слой; 4 балла—на серозную оболочку. Контрольную группу составили 23 условно здоровых добровольца обоего полатой же возрастной категории. При проведении клинико?иммунологического исследования были сформированы 3 группы пациентов: 1?я группа (до хирургического и последующего традиционного лечения) 73 пациента ЯБ ДПК, осложненной стенозом. 2?я группа (группа традиционного лечения) — 16 пациентов с ЯБ ДПК, после проведения хирургической операции (дуоденопластики), получавших в раннем послеоперационном периоде традиционную терапию (Н?2 блокаторы, антибактериальные средства, синтетические опиоиды— даларгин, антикоагулянты, антихолинестеразные препараты—прозерин). 3?я группа (группа иммунокоррекции)—34 пациента с ЯБ ДПК, после проведения хирургической операции (ДП), получавших в раннем послеоперационном периоде традиционную терапию и иммунотерапию Вифероном в дозе 2000000 МЕ ректально в течение 7 дней. Иммунологические исследования включали изучение количества НГ периферической крови, экспрессирующих CD11b?, CD16?, CD95?рецепторы иммунофлюоресцентным методом с использованием моноклональных антител (ООО «Сор? бент»). Тестирование проводили дважды: до ДП и через 7 дней после оперативного вмешательства. Статистическую обработку материала проводили вычислением средней арифметической (М) и ее ошибки (m). Достоверность различий средних величин оценивали с использованием критерия Стьюдента. Результаты и обсуждение Анализ количества НГ, экспрессирующих CD11b, CD16, CD95 в 1й группе пациентов с ЯБ ДПК, продемонстрировал наличие разнонаправленных изменений относительно показателей группы контроля. В соответствии с этими изменениями были сформированы 3 подгруппы: 1я подгруппа—с повышенным числом НГ, экспрессирующих CD11b, CD16 и CD95; 2я подгруппа—с неизмененным (относительно контроля) количеством НГ, экспрессирующих CD11b, CD16 и CD95 3я подгруппа—с низким (относительно контроля) количеством НГ, экспрессирующих CD11b, CD16 и CD95. У 53,42 % пациентов (1я подгруппа) при эндоскопическом исследовании, кроме признаков стенозирования луковицы двенадцатиперстной кишки, эрозивного бульбита, дуоденита и выраженных интраоперационных гистологических признаков воспаления дуоденальной стенки, оцениваемых по шкале активности в 34 балла, выявлено достоверное повышение количества НГ, несущих рецепторы адгезии, цитолиза и апоптоза: CD11b—в 2,5 раза, CD16—в 2,2 раза, CD95 — в 3,3 раза относительно контрольных значений (p < 0,001). Результаты наших исследований согласуются с литературными данными о количественном приросте НГ, экспрессирующих рецепторы CD16, CD95 при обострении хронического гастродуоденита у детей [7]. Это объясняется тем, что рецепторному аппарату неповрежденных НГ присуще стереотипное реагирование на имеющийся хронический воспалительный процесс в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки, которое проявляется повышением по сравнению с нормой количества НГ, экспрессирующих рецепторы CD11b, CD16 и CD95. У 16,44 % больных (2я подгруппа) с экспрессией рецепторов НГ в пределах здорового контроля (p > 0,05) имелись умеренные гистологические признаки воспаления дуоденальной стенки (1–2 балла) без выраженных признаков рубцовой трансформации. У 17,81 % пациентов (3 я подгруппа) с достоверным снижением относительно контроля процента НГ с рецепторами CD11b (в 2,1 раза, p < 0,01), CD16 (в 2,3 раза, p < 0,001) и CD95 (в 1,7 раза, p < 0,05) (см. рис.) имелась выраженная рубцовая трансформация слоев дуоденальной стенки и умеренные признаки воспаления. Возможно, эти изменения свидетельствуют в пользу аутоиммунного характера повреждения слизистой оболочки гастродуоденальной зоны, приводящего к формированию воспалительного инфильтрата вокруг зоны стеноза. Сравнительный анализ влияния проводимого лечения на систему НГ при осложненной стенозом ЯБ ДПК в группе традиционного лечения показал, что в 1й подгруппе не выявлено достоверных различий в количестве CD11b+ и CD16+ НГ до и после лечения (p > 0,05), а количество CD95+ НГ снижалось до контрольных значений (p < 0,01); во 2 й подгруппе имело место достоверное снижение количества CD11b+ НГ в 2,3 раза, CD95+ НГ в 1,8 раза относительно контроля (p < 0,01 и р < 0,05, соответственно) и достоверное повышение CD16+ НГ в 2 раза относительно контрольных значений (p < 0,001); • в 3й подгруппе количество НГ не изменялось по сравнению с показателями до лечения (p > 0,05) (см. рис.). Таким образом, традиционная терапия не влияет на сниженную либо повышенную экспрессию рецепторов НГ и негативно отражается на неизмененных показателях экспрессии, снижая или повышая ее значения относительно контрольной группы. Исследование динамики изучаемых рецепторов в группе больных, получавших иммунотерапию Вифероном, показало:
Рисунок. Динамика CD11b?, CD16? и CD95?маркеров нейтрофилов у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, осложненной стенозом, в зависимости от проводимого лечения
что в 1й подгруппе отмечается достоверное снижение ранее повышенного количества НГ: CD11b в 1,4 раза, CD16 в 1,3 раза, CD95в 1,8 раза относительно показателей до лечения (p < 0,001). Однако показатели не снижаются до контрольных значений (отличиеот контроля: p < 0,001, p < 0,001 и p < 0,01, соответственно); во 2 й подгруппе Виферон не оказывает влияния на неизмененное количество НГ (p > 0,05); в 3 й подгруппе отмечается восстановление количества CD11b+ НГ, CD16+ НГ и CD95+ НГ до уровня здорового контроля (p > 0,05) по сравнению с уровнем до лечения (p < 0,001) (см. рис.). Таким образом, выявлен модулирующий эффект Виферона на количество НГ, экспрессирующих CD11b, CD16, CD95рецепторы у пациентов ЯБ ДПК, перенесших радикальную дуоденопластику с последующей традиционной терапией. Полученные данные соответствуют данным литературы об особенностях влияния Виферона на систему НГ у часто и длительно болеющих детей [8] и у детей с хроническим гастродуоденитом [7]. По нашему мнению, 7дневный курс лечения Вифероном недостаточен для полного восстановления измененных показателей. Оно требует продления сроков терапии данным препаратом или назначения его в комбинации с другими иммуномодуляторами. Выводы 1. Разнонаправленные изменения фенотипа НГ при ЯБ ДПК, осложненной стенозом, находятся в зависимости от степени выраженности воспаления и особенностей рубцовой трансформации стенки двенадцатиперстной кишки, что подтверждается изменением эндоскопической и гистологической картины. 2. Перенесенный операционный стресс и последующая традиционная терапия не влияют на сниженное или повышенное количество НГ, экспрессирующих CD11b, CD16 и CD95, и негативно отражаются на нормальном уровне НГ, экспрессирущих эти рецепторы, снижая или повышая их относительно контрольных значений. 3. Виферон оказывает модулирующий эффект на НГ, экспрессирующие рецепторы CD11b, CD16 и CD95. 4. Исследование особенностей фенотипа НГ может использоваться в качестве диагностических и прогностических критериев выраженности воспалительной реакции в области дуоденальной зоны при ЯБ ДПК, осложненной стенозом.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бережная Н.М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз. — Киев: Наукова Думка, 1988. — 192 с.
2. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии. — М.: Медици? на, 1996. — 238 с.
3. Ковальчук Л.В. Антигенные маркеры клеток иммунной системы человека CD // Методические рекомендации. — Москва, 2003. — 76 с.
4. Козлов И.Г., Горлина Н.К., Чередеев А.Н. Рецепторы контактного взаимодействия // Иммунология. — 1995. — № 4. — С. 14–24.
5. Мазинг Ю.А. Нейтрофильные гранулоциты и система защиты организма // Арх. патол. — 1991. — № 9. — С. 70–73.
6. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. — Новосибирск, 1983. — 254 с.
7. Нагузе С.К. Клинико?иммунологическая характеристика и иммунокоррекция вифероном (рИФН?a2b) вторичных ИДС при хроническом гастродуодените у детей: Автореф. дис. канд. мед. наук. — Краснодар, 2000. — 19 с.
8. Нестерова И.В., Ковалева С.В. Виферон в программной иммунореабилитации часто и длительно болеющих детей // Кремлевская Медицина / Клинический вестник. — 2002. — № 2. — С. 65–69.
9. Нестерова И.В., Колесникова Н.В. Современные представления о роли системы нейтрофильных грагулоцитов // Russ. J. Immunol. Тезисы 11 съезда иммунологов России. — 1999. — Vol. 4, № 1. — Р. 22–28.
10. Нестерова И.В., Роменская В.А. Особенности иммунного статуса больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки // Аллергол. иммунол. — 2000. — Т. 1, № 2. — С. 222–229.
11. Шарапова Е.Г. Критерии объема радикальной дуоденопластики: Автореф. дис.канд. мед. наук. — Краснодар, 2001. — 19 с.
12. Ярилин А.А. Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и при патологии // Актуальные проблемы патофизиологии / Под ред. Б.Б. Мороза. — М.: Медицина, 2001. — С. 13–56.
13. Arends M.J., Morris R.G., Wyllie A.H. Apoptosis. The role of the endonuclease // Am. J. Pathol. — 1990. — Vol. 136. — P. 593–608.
14. Savill J. Apoptosis in resolution of inflammation // J. Leukoc. Biol. — 1997. — Vol. 61. — № 4. — Р. 375–380.
15. Springer T.A. Adhesion receptors of the immune system // Nature. — 1990. — Vol. 346. — Р. 425–434.
Immunomodulatory therapy with interferon in correction of neutrophil granulocytes membrane potential disturbances in complicated duodenal ulcer I.V. Nesterova2 , V.A. Romenskaya1 , N.P. Kapranova1 , G.G. Rozhkova1 1 Russian Center for Functional Surgical Gastroenterology, Krasnodar 2 Training and Scientific Center of Medical Center of the Russian Federation President Affairs, Moscow; The immunofluorencent method has been used for investigation of an amount of the neutrophil granulo# cytes expressing CD11b, CD16 and CD95 in peripheral blood in 69 patients suffering from duodenal ulcer complicated with stenosis. The clinical and immunological analysis of the material has elicited a modulating effect of Viferon on the blood count of neutrophil granulocytes expressing CD11b, CD16, CD95 in the patients underwent radical duodenoplasty followed with further traditional therapy. (Cytokines and Inflammation. 2005. Vol. 4, № 1. P. 47–51.)
